發(fā)布時(shí)間：2018-04-03 21:57

  本文選題：尖孢鐮孢菌　切入點(diǎn)：致病性　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：甜瓜枯萎病是由尖孢鐮孢菌引起的一種甜瓜病害,其流行和傳播對(duì)我國甜瓜生產(chǎn)造成了不同程度的經(jīng)濟(jì)損失。本文在傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上,結(jié)合了分子生物學(xué)的方法,對(duì)甜瓜枯萎病的致病菌尖孢鐮孢菌的種群結(jié)構(gòu)、致病力和不同品種甜瓜的抗病性進(jìn)行了分析、研究;采用酶聯(lián)免疫反應(yīng)(ELISA),對(duì)尖孢鐮孢菌進(jìn)行了檢測,并建立了檢測方法。1.對(duì)東北地區(qū)甜瓜枯萎病菌致病力進(jìn)行了測定從遼寧省、吉林省、黑龍江省及內(nèi)蒙古自治區(qū)采集的甜瓜枯萎病標(biāo)樣中分離純化獲得62株致病菌,在傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分析的基礎(chǔ)上,采用尖孢鐮孢菌特異性引物FOF1/FOR1對(duì)供試菌株的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增,確定44株菌株為尖孢鐮孢菌。致病性測定結(jié)果表明,44株尖孢鐮孢菌對(duì)甜瓜均有一定的侵染能力,病情指數(shù)在31.7-83.3之間,致病力較強(qiáng)。對(duì)不同品種的甜瓜抗病力的測定結(jié)果表明,供試的21種甜瓜種子中,有2種為高感(S)品種,12種為感病(MS)品種,6種為中抗(MR),1種為抗病(R)品種,供試的21種甜瓜種子中未發(fā)現(xiàn)高抗(HR)品種。2.對(duì)44株東北地區(qū)甜瓜枯萎病菌遺傳多樣性進(jìn)行了分析采用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)44株來自東北不同地區(qū)甜瓜枯萎病株的尖孢鐮孢菌進(jìn)行遺傳多樣性分析,探究其遺傳多樣性與地理來源的關(guān)系。研究結(jié)果表明:從100對(duì)SRAP引物中篩選出對(duì)多態(tài)性強(qiáng)、重復(fù)性好的8組SRAP引物組合,共擴(kuò)增出53條條帶,其中多態(tài)性條帶53條,多態(tài)性比率為100%,平均每對(duì)引物擴(kuò)增得到6.63條多態(tài)性條帶。通過聚類分析,44株供試菌株相似系數(shù)為0.47～0.98之間,不同菌株之間的親緣關(guān)系較近,遺傳多樣性較為豐富,但是仍存在遺傳差異,且與地理來源沒有明顯的相關(guān)性。3.初步建立了甜瓜枯萎病血清學(xué)檢測方法通過對(duì)尖孢鐮孢菌菌絲蛋白的提取制備了多克隆抗體,抗體純化后即可用作對(duì)尖孢鐮孢菌的檢測。通過間接ELISE法的測定,確定了所制備的多克隆抗體對(duì)甜瓜枯萎病的致病菌有特異性,并且測定了其效價(jià)為1:25600。同時(shí)對(duì)抗體和抗原的工作濃度進(jìn)行了優(yōu)化選擇,最終確定抗體的最佳工作稀釋倍數(shù)為1:1000;對(duì)酶標(biāo)抗體的工作濃度也進(jìn)行了選擇,最終確定為1:1000,此濃度的確定既考慮了實(shí)驗(yàn)效果有考慮到了經(jīng)濟(jì)因素。甜瓜枯萎病初期的發(fā)病部位在根莖部,本試驗(yàn)對(duì)患病的甜瓜根莖部中的尖孢鐮孢菌進(jìn)行了 ELISA檢測。試驗(yàn)結(jié)果證明,患病甜瓜檢測結(jié)果為陽性,而健康的甜瓜根莖為陰性。甜瓜枯萎病為土傳病害,在土中的致病菌是致使甜瓜罹病的重要原因,本試驗(yàn)同時(shí)對(duì)土壤中的尖孢鐮孢菌進(jìn)行了檢測。試驗(yàn)證明,種植甜瓜一年和五年的土壤的檢測結(jié)果均為陽性,且可以根據(jù)尖孢鐮孢菌蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出這兩種土壤的含菌量分別為2.28 μg/ml和4.43 μg/ml,滅菌后的土壤檢測結(jié)果為陰性。此外,還對(duì)抗體的靈敏度進(jìn)行了測定,當(dāng)抗原稀釋至0.0050 μg/ml時(shí),P/N2.1。
[Abstract]:In this paper , the genetic diversity of Fusarium wilt of melon in Northeast China was analyzed and the relationship between genetic diversity and geographical origin was studied .

【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S436.5

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本文編號(hào)：1707071