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藍(lán)莓間座殼潰瘍病菌Diaporthe spp.鑒定及分子檢測研究

發(fā)布時間:2018-02-04 22:48

  本文關(guān)鍵詞: 藍(lán)莓 間座殼潰瘍病 鑒定 PCR快速檢測 出處:《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文


【摘要】:藍(lán)莓是一種新興的小漿果類樹種,藍(lán)莓果實細(xì)膩,酸甜可口,具有特別的香氣,是健康的鮮食漿果之一。藍(lán)莓不僅好吃,還具有非常豐富的營養(yǎng)價值,藍(lán)莓中除了含有糖類等物質(zhì),還含有黃酮、酚類物質(zhì),花青素等特殊成分;有研究表明藍(lán)莓還具有預(yù)防動脈粥樣硬化、保護(hù)心腦血管、清除人體自由基,延緩衰老等保健功能。近年來藍(lán)莓的銷售及推廣逐漸增多,藍(lán)莓也越來越受到人們的歡迎。間座殼潰瘍病是危害藍(lán)莓的一種嚴(yán)重病害之一,病菌可從莖傷口、嫩枝及芽眼侵入,造成藍(lán)莓減產(chǎn),嚴(yán)重時可使整株藍(lán)莓枯死。本文對我國部分藍(lán)莓主產(chǎn)區(qū)的藍(lán)莓莖潰瘍病樣進(jìn)行采集,對藍(lán)莓病樣進(jìn)行分離純化及致病性測定,并且采取形態(tài)學(xué)與分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)結(jié)合的方法對病原菌進(jìn)行鑒定;同時設(shè)計PCR特異性引物,用于病原真菌的分子檢測;選取代表菌對我國主要栽培的10個藍(lán)莓品種進(jìn)行致病性測定以及抗性評價,為病害的防治打下基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:1.2014~2016年在我國多個藍(lán)莓主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行藍(lán)莓病樣的采集,采集地分別位于我國福建省龍巖市;江西省上饒市;浙江省新昌市;四川省成都市;遼寧省大連市、丹東市;黑龍江省伊春市,6個省7個市的藍(lán)莓種植園。共分離純化出52株具有致病性的病原菌,對病原菌進(jìn)行致病力分級,其中22株菌具有強(qiáng)致病性,8株菌具有較強(qiáng)致病性,15株菌具有中等致病性,7株菌具有弱致病性。2.對52株病原菌采取ITS與EF1-α聯(lián)合基因分別采用貝葉斯法(BI)和最大簡約法(MP)進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析,并結(jié)合形態(tài)學(xué)進(jìn)行鑒定。52株病原菌中至少存在5種間座殼潰瘍病菌,其中,有44株2種病原菌可確定其種類,其他的病原菌由于缺乏相關(guān)模式菌株信息暫時無法定種。經(jīng)鑒定Diaporthephaseolorum為藍(lán)莓間座殼病病原之一,該種群菌株包括龍巖市的1株菌、伊春市的1株菌、丹東市的2株菌以及大連市的3株菌,該種菌具有中等弱致病性,且主要分離自我國東北地區(qū),本研究系國內(nèi)外首次報道D.phaseolorum危害藍(lán)莓,造成藍(lán)莓莖潰瘍病;Dhongkongens.為另一種藍(lán)莓間座殼潰瘍病的病原菌,包括上江西饒市1株菌、浙江新昌市6株菌以及福建龍巖市30株菌,共37株病原菌定種為D.hongkongensis,該種病原菌致病性較強(qiáng),主要危害南方藍(lán)莓產(chǎn)區(qū)的藍(lán)莓,在北方未分離出該種病原菌,本研究首次報道間座殼真菌D.honagkongensis危害藍(lán)莓。3.針對 Diaporthe hongkongensis及D.phaseolorum分別在 EF1-α及 ITS 基因片段特異區(qū)間設(shè)計種特異性引物EFhong1/2、Pha5/6,分別擴(kuò)增出195 bp及302 bp目標(biāo)DNA產(chǎn)物,實現(xiàn)對病原菌的早期檢測,引物特異性及靈敏度較好,可檢測出濃度為500 fg/μl的目標(biāo)真菌DNA,且可從從發(fā)病程度不同的藍(lán)莓莖部檢測出目標(biāo)真菌,藍(lán)莓組織DNA及其他真菌對結(jié)果沒有影響。4.利用D.hongkongensis、D.phaseolorum代表菌株分別對我國主栽的10個藍(lán)莓品種進(jìn)行不同藍(lán)莓品種致病性測定,不同的藍(lán)莓品種對間座殼潰瘍病的敏感性具有較大的差異;對2種菌的代表菌株的表現(xiàn)略有不同:其中'愛國者'、'瑞卡'、'日出'、'奧林匹亞'、'都克'、'托柔'、'藍(lán)豐'相對抗病;'北陸'、'埃利奧特'相對感病,'達(dá)柔'對Diaporthe hngkongensis相對感病,但是對 D.phaseolorum 相對抗病。
[Abstract]:Blueberry is a new kind of small berry tree species , the blueberry fruit is delicate , sour and sweet , it has special fragrance , it is one of the healthy fresh food berries . The blueberry is not only delicious but also has very rich nutritional value . The results showed that D . phaseolorum ( D . phaseolorum ) could be used to detect the pathogenic bacteria of different blueberry cultivars . Diapramycin hngkongensis is relatively susceptible to disease , but is relatively resistant to D . phaseolorum .

【學(xué)位授予單位】:沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:S436.639

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本文編號:1491370

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