本文關(guān)鍵詞： 茶樹(shù) 沒(méi)食子酸 aroB aroDE 基因克隆　出處：《福建農(nóng)林大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：以茶樹(shù)1005品系為研究對(duì)象,應(yīng)用PCR、RACE技術(shù)及在線生物信息學(xué)分析軟件,首次克隆并分析了茶樹(shù)酯型兒茶素合成前體物質(zhì)之一GA的生物合成途徑中aroB、aroDE基因的全長(zhǎng)cDNA序列。結(jié)合對(duì)茶樹(shù)1005品系不同葉位酯型兒茶素含量的測(cè)定結(jié)果,選擇葉位為處理因素,并根據(jù)得到的aroB、aroDE序列設(shè)計(jì)特異引物,應(yīng)用熒光定量技術(shù)測(cè)定了aroB與aroDE基因在茶樹(shù)1005品系不同葉位的表達(dá)差異。1茶樹(shù)1005品系不同葉位酯型兒茶素含量茶樹(shù)1005品系酯型兒茶素總量變化范圍為6.71%～22.49%,一葉最高,老葉最低,其含量隨葉位次序的增加而顯著減少,含量高低次序?yàn)椋阂蝗~芽二葉三葉四葉五葉六葉老葉。EGCG含量,在同一葉位中極顯著高于其他3種酯型兒茶素單體,在不同葉位中的含量變化范圍為2.26%～13.09%,其含量亦基本隨葉位次序的增加而顯著減少。整體上,順式酯型兒茶素含量極顯著高于反式兒茶素。2茶樹(shù)aroB基因的全長(zhǎng)cDNA克隆及生物信息學(xué)分析應(yīng)用RACE技術(shù),從茶樹(shù)1005品系頂芽首次克隆獲得aroB基因的全長(zhǎng)cDNA序列,命名為Cs1005-aroB, NCBI GeneBank登錄號(hào)為KM009084。Cs1005-aroB cDNA序列全長(zhǎng)1509bp,其中ORF序列長(zhǎng)1350bp,3'UTR序列長(zhǎng)89bp, 5'UTR序列長(zhǎng)70bp。Cs1005-aroB蛋白生物學(xué)信息經(jīng)在線軟件預(yù)測(cè)分析,顯示：Cs1005-aroB蛋白為親水性非分泌蛋白,穩(wěn)定性高,保守性強(qiáng),三維結(jié)構(gòu)與中華獼猴桃aroB基因高度相似,親緣關(guān)系與歐洲山毛櫸較近,具有DHQS特征結(jié)構(gòu)域。推測(cè)Cs1005-aroB蛋白在葉綠體中合成,與其結(jié)合起激活作用的金屬離子為Fe2+。3茶樹(shù)aroDE基因的全長(zhǎng)cDNA克隆及生物信息學(xué)分析應(yīng)用RACE技術(shù),從茶樹(shù)1005品系頂芽克隆獲得3條aroDE基因的全長(zhǎng)cDNA序列,分別命名為Cs1005-aroDE1、Cs1005-aroDE2、Cs1005-aroDE3, NCBI GeneBank登錄號(hào)分別為KM009085、KM009086、KM009087�；駽s1005-aroDE1全長(zhǎng)2118bp,編碼519個(gè)氨基酸；Cs1005-aroDE2全長(zhǎng)1990bp,編碼532個(gè)氨基酸；Cs1005-aroDE3全長(zhǎng)1957bp,編碼525個(gè)氨基酸。3條aroDE基因同源性為64.32%,共同相似區(qū)域分布不連續(xù),所編碼的氨基酸序列同源性為65.36%,共同相似區(qū)域分布亦不連續(xù)。Cs1005-aroDE1、Cs1005-aroDE2與Cs1005-aroDE3三條蛋白序列的生物學(xué)信息經(jīng)在線軟件預(yù)測(cè)分析,顯示：三種蛋白均為親水性非分泌酸性蛋白,穩(wěn)定性高；雖序列結(jié)構(gòu)相似性不高,但三種蛋白的空間結(jié)構(gòu)高度相似,均與擬南芥aroDE基因高度相似；三種蛋白磷酸化位點(diǎn)均較多；三種蛋白各自保守性都較強(qiáng),均具有DHQase_I、Shikimate_dh_N及 NAD_bind_Shikimate_DH功能域,且蛋白Cs1005-aroDE2多出一個(gè)莽草酸結(jié)合位點(diǎn)；Cs1005-aroDE1蛋白合成與發(fā)揮作用的場(chǎng)所最可能在細(xì)胞質(zhì)中,而Cs1005-aroDE2與Cs1005-aroDE3蛋白合成與發(fā)揮作用的場(chǎng)所最可能在線粒體中；三種蛋白均各自與葡萄相應(yīng)類(lèi)型的aroDE蛋白親緣關(guān)系較近,但彼此間親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)。4茶樹(shù)1005品系不同葉位aroB與aroDE基因的定量表達(dá)分析應(yīng)用2-ΔΔCt法計(jì)算的SYBR Green熒光定量法檢測(cè)了Cs1005-aroB、 Cs1005-aroDE1、Cs1005-aroDE2與Cs1005-aroDE3四個(gè)基因在茶樹(shù)1005品系不同葉位的相對(duì)表達(dá)量。四基因在不同葉位的表達(dá)量均呈現(xiàn)近似正態(tài)分布的趨勢(shì),除Cs1005-aroDE3在第二葉表達(dá)量最高外,其余三基因均在第三葉檢測(cè)到最高表達(dá)量。與3條aroDE基因顯著不同,aroB基因在頂芽表達(dá)量最低。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S571.1

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本文編號(hào)：1491295