本文關(guān)鍵詞： 茶樹 沒食子酸 aroB aroDE 基因克隆　出處：《福建農(nóng)林大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：以茶樹1005品系為研究對象,應(yīng)用PCR、RACE技術(shù)及在線生物信息學(xué)分析軟件,首次克隆并分析了茶樹酯型兒茶素合成前體物質(zhì)之一GA的生物合成途徑中aroB、aroDE基因的全長cDNA序列。結(jié)合對茶樹1005品系不同葉位酯型兒茶素含量的測定結(jié)果,選擇葉位為處理因素,并根據(jù)得到的aroB、aroDE序列設(shè)計特異引物,應(yīng)用熒光定量技術(shù)測定了aroB與aroDE基因在茶樹1005品系不同葉位的表達差異。1茶樹1005品系不同葉位酯型兒茶素含量茶樹1005品系酯型兒茶素總量變化范圍為6.71%～22.49%,一葉最高,老葉最低,其含量隨葉位次序的增加而顯著減少,含量高低次序為：一葉芽二葉三葉四葉五葉六葉老葉。EGCG含量,在同一葉位中極顯著高于其他3種酯型兒茶素單體,在不同葉位中的含量變化范圍為2.26%～13.09%,其含量亦基本隨葉位次序的增加而顯著減少。整體上,順式酯型兒茶素含量極顯著高于反式兒茶素。2茶樹aroB基因的全長cDNA克隆及生物信息學(xué)分析應(yīng)用RACE技術(shù),從茶樹1005品系頂芽首次克隆獲得aroB基因的全長cDNA序列,命名為Cs1005-aroB, NCBI GeneBank登錄號為KM009084。Cs1005-aroB cDNA序列全長1509bp,其中ORF序列長1350bp,3'UTR序列長89bp, 5'UTR序列長70bp。Cs1005-aroB蛋白生物學(xué)信息經(jīng)在線軟件預(yù)測分析,顯示：Cs1005-aroB蛋白為親水性非分泌蛋白,穩(wěn)定性高,保守性強,三維結(jié)構(gòu)與中華獼猴桃aroB基因高度相似,親緣關(guān)系與歐洲山毛櫸較近,具有DHQS特征結(jié)構(gòu)域。推測Cs1005-aroB蛋白在葉綠體中合成,與其結(jié)合起激活作用的金屬離子為Fe2+。3茶樹aroDE基因的全長cDNA克隆及生物信息學(xué)分析應(yīng)用RACE技術(shù),從茶樹1005品系頂芽克隆獲得3條aroDE基因的全長cDNA序列,分別命名為Cs1005-aroDE1、Cs1005-aroDE2、Cs1005-aroDE3, NCBI GeneBank登錄號分別為KM009085、KM009086、KM009087�；駽s1005-aroDE1全長2118bp,編碼519個氨基酸；Cs1005-aroDE2全長1990bp,編碼532個氨基酸；Cs1005-aroDE3全長1957bp,編碼525個氨基酸。3條aroDE基因同源性為64.32%,共同相似區(qū)域分布不連續(xù),所編碼的氨基酸序列同源性為65.36%,共同相似區(qū)域分布亦不連續(xù)。Cs1005-aroDE1、Cs1005-aroDE2與Cs1005-aroDE3三條蛋白序列的生物學(xué)信息經(jīng)在線軟件預(yù)測分析,顯示：三種蛋白均為親水性非分泌酸性蛋白,穩(wěn)定性高；雖序列結(jié)構(gòu)相似性不高,但三種蛋白的空間結(jié)構(gòu)高度相似,均與擬南芥aroDE基因高度相似；三種蛋白磷酸化位點均較多；三種蛋白各自保守性都較強,均具有DHQase_I、Shikimate_dh_N及 NAD_bind_Shikimate_DH功能域,且蛋白Cs1005-aroDE2多出一個莽草酸結(jié)合位點；Cs1005-aroDE1蛋白合成與發(fā)揮作用的場所最可能在細胞質(zhì)中,而Cs1005-aroDE2與Cs1005-aroDE3蛋白合成與發(fā)揮作用的場所最可能在線粒體中；三種蛋白均各自與葡萄相應(yīng)類型的aroDE蛋白親緣關(guān)系較近,但彼此間親緣關(guān)系相對較遠。4茶樹1005品系不同葉位aroB與aroDE基因的定量表達分析應(yīng)用2-ΔΔCt法計算的SYBR Green熒光定量法檢測了Cs1005-aroB、 Cs1005-aroDE1、Cs1005-aroDE2與Cs1005-aroDE3四個基因在茶樹1005品系不同葉位的相對表達量。四基因在不同葉位的表達量均呈現(xiàn)近似正態(tài)分布的趨勢,除Cs1005-aroDE3在第二葉表達量最高外,其余三基因均在第三葉檢測到最高表達量。與3條aroDE基因顯著不同,aroB基因在頂芽表達量最低。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S571.1

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 杜娟,林戈,盧光t;人胚胎干細胞和分化細胞差別基因的篩選[J];遺傳學(xué)報;2004年09期

2 邢少辰,林秀峰;分離基因的有效手段-mRNA差異顯示技術(shù)[J];吉林農(nóng)業(yè)科學(xué);2004年02期

3 張冉;林浴霜;;不同品種雞MSTN基因表達差異的研究[J];中國家禽;2012年06期

4 唐婷;柳峰松;任國棟;;謝氏寬漠王β-actin基因cDNA克隆、序列分析及表達量檢測[J];昆蟲學(xué)報;2008年11期

5 何蕾;薛仁宇;曹廣力;胡小龍;貢成良;;基于RNA-Seq技術(shù)分析家蠶卵巢培養(yǎng)細胞(BmN)高表達基因[J];蠶業(yè)科學(xué);2014年03期

6 楊紅蘭;張道遠;劉燕;馬瑞;張元明;;齒肋赤蘚乙醛脫氫酶基因ALDH21的克隆與表達分析[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2010年01期

7 周鑫;柴保國;趙衛(wèi)東;鄭振宇;;小鼠早期胚胎發(fā)育過程中胚胎發(fā)育相關(guān)功能基因mRNA的表達[J];河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2010年06期

8 王金玲;單雪松;楊雨江;王雪麗;;北京鴨/番鴨雜交體系肝臟組織基因表達差異的研究[J];家畜生態(tài)學(xué)報;2009年01期

9 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前6條

1 張文俊;江華;趙耀忠;朱曉海;劉安堂;;皮膚惡性黑色素瘤與良性痣基因表達差異的研究[A];第四屆華東六省一市整形外科學(xué)術(shù)會議暨2007年浙江省整形、美容學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

2 楊勁松;鄭新民;陳詩書;;誘導(dǎo)PTPα表達24小時NIH3T3細胞基因表達差異的研究[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

3 孟金萍;劉云波;張以河;孫淑華;王艷蓉;呂鳳柱;楊旭;;鉛暴露U251細胞基因表達譜改變及基因通路分析[A];實驗動物與藥理學(xué)、毒理學(xué)研究學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2009年

4 劉丹慧;陳少松;羅崇林;肖雪媛;何大澄;;一個在肺癌中缺失的基因的篩選與初步研究[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會2005年學(xué)術(shù)大會、青年學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

5 賓曉農(nóng);譚敏;呂嘉春;蔣義國;陳家X;;基因芯片篩選BPDE轉(zhuǎn)化16HBE相關(guān)基因的研究[A];第五屆廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會暨第三屆廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

6 霍曉芳;張俊武;;紅系分化相關(guān)基因的鑒別與功能研究[A];中國遺傳學(xué)會七屆一次青年研討會暨上海高校模式生物E——研究院第一屆模式生物學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2005年

相關(guān)重要報紙文章 前4條

1 吳一福;第四軍醫(yī)大學(xué)發(fā)現(xiàn)抑癌新基因[N];中國醫(yī)藥報;2008年

2 柯尊洪;基因技術(shù)在中藥研究中的作用[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

3 王興 閆智勇 郝曉鋒;借助基因技術(shù)發(fā)展現(xiàn)代中藥[N];中國醫(yī)藥報;2003年

4 本報記者 吳紅月;醫(yī)院病理科借助基因檢測延伸新服務(wù)[N];科技日報;2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李倩;轉(zhuǎn)Nramp1基因克隆牛的研制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

2 朱明庫;番茄SlNAC4和SlDEAD31基因在果實成熟及非生物脅迫響應(yīng)中的功能研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 陳鵬程;人類分子相互作用在線資源及多物種的基因集功能關(guān)聯(lián)分析工具的建立[D];浙江大學(xué);2015年

4 孫占斌;粉紅螺旋聚孢霉67-1菌寄生相關(guān)基因的篩選與功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

5 韓洪強;控制茄子果型相關(guān)性狀關(guān)鍵基因的克隆及功能研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 王X;牦�；蚪M遺傳變異圖譜和高原適應(yīng)的轉(zhuǎn)錄組研究[D];蘭州大學(xué);2015年

7 吳全金;‘白雞冠’茶樹響應(yīng)光調(diào)控的基因差異及理化特征分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

8 王春麗;AML1/ETO陽性白血病APP基因的臨床意義、生物學(xué)功能及其作用機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

9 高士剛;玉米彎孢葉斑病菌全基因組序列分析與致病性分化相關(guān)基因的研究[D];上海交通大學(xué);2014年

10 嚴佳文;相橘潰病病防御相關(guān)基因的鑒定及功能分析[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫姣姣;棉鈴蟲Serpin基因的克隆、表達及Feeding RNAi分析[D];河北大學(xué);2015年

2 韓國英;棉鈴蟲和HaCHS和CDA基因的克隆、表達及Feeding RNAi分析[D];河北大學(xué);2015年

3 湯常永;梨‘中矮1號’矮生基因的篩選及PcAHS克隆與表達分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 王慶峰;膠質(zhì)類芽孢桿菌胞外多糖調(diào)節(jié)及相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

5 崔淼;飛蝗海藻糖酶基因的分子特性及功能研究[D];山西大學(xué);2014年

6 郝妍妍;玉米ZmSTKR基因的表達及其蛋白的磷酸化分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 申艷;Let-7b通過其靶基因-TGFβR Ⅰ調(diào)控羊駝毛生長的研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 賀望興;靈芝全局性調(diào)控基因LaeA的克隆及其在靈芝酸生物合成過程中的差異表達[D];福建師范大學(xué);2015年

9 王洋;多氯聯(lián)苯代謝過程中紅球菌應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)基因的研究[D];山西大學(xué);2015年

10 冬方;鯽魚耐鹽堿基因的篩選及驗證[D];上海海洋大學(xué);2015年

，

本文編號：1491295