本文關(guān)鍵詞：大麥黃矮病毒運(yùn)動(dòng)蛋白與AtVOZ1和AtVOZ2互作并延遲擬南芥開(kāi)花　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：大麥黃矮病毒(Barely yellow dwarf viruses,BYDVs)侵染多種禾本科作物,呈現(xiàn)多種發(fā)病癥狀同時(shí)也給世界糧食生產(chǎn)造成嚴(yán)重的損失。其在小麥上的癥狀主要有植物矮化、葉片黃化,除此之外在燕麥上還能造成分蘗和抽穗的減少。而目前對(duì)于這種癥狀的產(chǎn)生原因研究的還不是很清楚。為了更好地控制小麥病毒病發(fā)生,研究該病癥的發(fā)病機(jī)制勢(shì)在必行。大麥黃矮病毒的運(yùn)動(dòng)蛋白(Movement Protein,MP)的主要功能是結(jié)合病毒RNA,增大胞間連絲孔徑并促使其在植物細(xì)胞間運(yùn)輸。但是對(duì)于MP對(duì)植物生理生化方面的影響研究的還是較少。因此,本研究針對(duì)BYDV-GAV MP對(duì)模式植物擬南芥生理生化方面的影響進(jìn)行了研究,主要結(jié)果如下:1.通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)在擬南芥中能夠與MP蛋白互作的是兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,維管植物鋅指蛋白AtVOZ1和AtVOZ2。利用雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)(BiFC),進(jìn)一步驗(yàn)證MP與AtVOZ1和AtVOZ2是能夠相互作用的,且互作的位置是細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)MP蛋白的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域,對(duì)MP片段進(jìn)行缺失突變,構(gòu)建了MP(DH1)、MP(DH2)、MP(DH3)三個(gè)突變體。通過(guò)雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明只有MP(DH2)不能與AtVOZ1和AtVOZ2互作,而MP(DH2)是缺失了MP的N端1-81aa,即MP的核定位信號(hào)區(qū)域,說(shuō)明MP的N端核定位信號(hào)在互作中是必須的。2.由于AtVOZ1和AtVOZ2是控制擬南芥開(kāi)花通路上的關(guān)鍵基因。我們通過(guò)農(nóng)桿菌浸花轉(zhuǎn)序的方法構(gòu)建MP轉(zhuǎn)基因擬南芥。探究轉(zhuǎn)基因植株是否產(chǎn)生開(kāi)花方面的表型差異。結(jié)果顯示,同時(shí)播種野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥,開(kāi)花時(shí),轉(zhuǎn)基因擬南芥蓮座葉數(shù)目比野生型顯著增多,同時(shí)轉(zhuǎn)基因擬南芥經(jīng)過(guò)更長(zhǎng)的時(shí)間才開(kāi)始開(kāi)花。MP轉(zhuǎn)基因擬南芥表現(xiàn)晚花表型,也就是MP影響了擬南芥的開(kāi)花表型。3.AtVOZ1和AtVOZ2是光周期通路phyB途徑上的關(guān)鍵基因。為了探究MP轉(zhuǎn)基因植株出現(xiàn)的晚花表型是否與phyB途徑有關(guān),通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn),測(cè)定轉(zhuǎn)基因擬南芥及野生型擬南芥phyB通路上的關(guān)鍵基因AtVOZ1、AtVOZ2、CO、FLC、FT的表達(dá)量。結(jié)果表明MP轉(zhuǎn)基因植株的可能通過(guò)調(diào)節(jié)FT基因的表達(dá)量來(lái)影響擬南芥開(kāi)花。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)揭示了BYDV-GAV MP通過(guò)與AtVOZ1、AtVOZ2的互作,可能通過(guò)影響FT基因的表達(dá),介導(dǎo)晚花表型。為BYDV-GAV對(duì)癥狀的產(chǎn)生機(jī)理研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Barley yellow dwarf virus (Barely yellow dwarf viruses, BYDVs) infection of a variety of gramineous crops, showing a variety of symptoms but also to the world food production caused serious losses. The main symptoms in wheat plant dwarfing, Leaf Chlorosis, in addition to the decrease in oat also can cause tillering and heading and the current. For this reason of symptoms is not very clear. In order to control wheat virus disease, it is imperative to study the pathogenesis of disease. The movement protein of barley yellow dwarf virus (Movement Protein MP) is the main function of virus RNA, enlarged plasmodesmata aperture and the transport in plant cells. But for MP on plant physiological and biochemical aspects of the impact of research is still less. Therefore, this study was about the influence of BYDV-GAV MP on Arabidopsis physiological and biochemical aspects. The main research results are as follows: 1. by the yeast two hybrid experiment, found to interact with MP protein in Arabidopsis is two transcription factor, vascular plant zinc finger protein AtVOZ1 and AtVOZ2. using bimolecular fluorescence complementation assay (BiFC), MP and AtVOZ1 and further validation of AtVOZ2 is able to interact with each other. The position is the key. According to the cytoplasmic domain of MP protein, the MP deletion mutation, constructed MP (DH1), MP (DH2), MP (DH3) three mutants by bimolecular fluorescence complementation experiments, the results show that only MP (DH2) with AtVOZ1 and AtVOZ2 interaction, and MP (DH2) is the lack of N end 1-81aa MP, namely the nuclear localization signal region of MP, N MP in the end of the nuclear localization signal interaction is necessary because the AtVOZ1 and.2. AtVOZ2 is the key gene control flowering pathway. By Agroinoculation method to order the bacteria leaching flower building MP transfer matrix Because of the Arabidopsis transgenic plants. To explore whether phenotypic differences in flowering. The results showed that the sowing and wild type and transgenic Arabidopsis, transgenic Arabidopsis rosette leaves of flowering, the number increased significantly than that of the wild type, the transgenic Arabidopsis plants after a longer period of time to flowering.MP transgenic Arabidopsis showed late flowering phenotype, which is the MP effect in Arabidopsis thaliana the flowering phenotype of.3.AtVOZ1 and AtVOZ2 are the key genes in the photoperiod pathway phyB pathway. In order to explore the MP transgenic plants appeared late flowering phenotype is associated with phyB pathway by real-time fluorescence quantitative PCR test, determination of key gene AtVOZ1 in transgenic Arabidopsis and wild type Arabidopsis phyB pathway on AtVOZ2, CO, FLC, FT expression MP. The results showed that transgenic plants may be through the regulation of FT gene expression to affect the flowering of Arabidopsis. In summary, this study reveals The interaction between BYDV-GAV MP and AtVOZ1 and AtVOZ2 may mediate the late flowering phenotype by influencing the expression of FT gene, and lay the foundation for the study of the mechanism of symptom generation by BYDV-GAV.

【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S432.41

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本文編號(hào)：1404761