發(fā)布時間：2017-12-15 03:03

  本文關(guān)鍵詞：發(fā)光桿菌SN259菌株次生代謝產(chǎn)物的分離鑒定和抑菌活性研究

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【摘要】：昆蟲病原線蟲共生菌屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae),寄生于昆蟲病原線蟲的腸道內(nèi),可產(chǎn)生化學(xué)結(jié)構(gòu)豐富,且具有抗菌、抗病毒、抗癌、殺蟲等生物活性的代謝產(chǎn)物,在農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域具有較大開發(fā)潛力和應(yīng)用前景,已成為一類重要的新型微生物資源。本文通過對采自遼寧丹東、內(nèi)蒙扎蘭屯、吉林長白山的108個土樣進(jìn)行大蠟螟生物誘導(dǎo)得到57株初生型昆蟲病原線蟲共生菌,通過化學(xué)篩選與生物活性篩選相結(jié)合的方法對共生菌進(jìn)行初篩,得到最優(yōu)菌株,鑒定為Photorhabdustemperata,對該菌株的次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離、鑒定、及生物活性測定得出以下主要研究結(jié)果:1.優(yōu)勢菌株的篩選:對分離純化得到的57株初生型共生菌進(jìn)行小發(fā)酵,用大孔樹脂吸附法獲取共生菌的粗提物。采用TLC檢測技術(shù)對菌株發(fā)酵粗提物進(jìn)行分析檢測,結(jié)果表明SN259菌株的發(fā)酵粗提物的次生代謝產(chǎn)物種類比較豐富。采用菌絲生長速率法測定菌株粗提物對植物病原真菌的抑制作用。結(jié)果表明,SN259菌株的發(fā)酵粗提物對瓜果腐霉,水稻紋枯病菌,禾谷鐮刀病菌,玉米大斑病菌的菌絲生長均具有明顯抑制作用,當(dāng)濃度為50μg/mL,對四株真菌的抑制率分別為72%,51%,38%,41%。因此選定SN259菌株為最優(yōu)菌株。2.SN259菌株的鑒定:PCR擴增SN259菌株的16SrRNA全序列,通過構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹進(jìn)行16S rRNA序列同源性比較及聚類分析。結(jié)果顯示SN259菌株與發(fā)光桿菌Photorhabdustemperata(GenBank accession number EU136626)的同源性為 100%,表明SN259 菌株與 Photorhabdus temperata 為同種,命名為Photorhabdus temperata SN259(GenBank accession number KU240002).3.SN259菌株次生代謝產(chǎn)物的分離純化及鑒定:對發(fā)光桿菌SN259菌株進(jìn)行液體發(fā)酵得到粗提物。然后利用柱層析技術(shù)與半制備高效液色譜技術(shù)相結(jié)合的方法對SN259菌株的次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,得到7個單體化合物,經(jīng)核磁共振波譜及高分辨質(zhì)譜分析,并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),鑒定為:3-羥基-2-異丙基-5-苯乙基苯基氨基甲酸酯(1),2-(1-羥基丙烷-2-基)-5-[2-苯乙基]苯-1,3-二醇(2),2-(1-羥基丙烷-2-基)-5-[(E)-2-苯乙烯基]苯-1,3-二醇(3),2-乙基-5-(2-苯乙基)苯-1,3-二醇(4),2-異丙基-5-[2-苯乙基]苯-1,3-二醇(5),2-乙基-5[(E)2-苯乙烯基]苯-1,3-二醇(6),2-異丙基-5-[(E)-2-苯乙烯基]苯-1,3-二醇(7)。以上7個單體化合物均為二苯乙烯類化合物,命名為化合物1-7。其中化合物1-3為新化合物,化合物4為新的天然產(chǎn)物,化合物5-7為已知化合物。4.化合物生物活性測定及構(gòu)效分析:通過菌絲生長速率法和微量肉湯稀釋法測定化合物1-7的抑真菌活性,結(jié)果表明新化合物1和化合物7活性較強。在菌絲生長速率試驗中化合物1和化合物7對瓜果腐霉的IC50分別為2.8 μg/mL和2.7 μg/mL,與百菌清的效果相近。在含藥平板試驗中,化合物1和化合物7也對瓜果腐霉表現(xiàn)出較好的抑制作用,IC50值分別為2.4μg/mL和1.9μg/mL。雖然化合物的結(jié)構(gòu)非常類似,但其生物活性具有較大的差異,進(jìn)一步進(jìn)行構(gòu)效分析,結(jié)果表明,酰胺基及異丙基對于維持化合物的生物活性是至關(guān)重要的。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S476

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 呂秋軍,簡恒,劉衛(wèi)京,楊秀芬,溫利青,陳媛媛,郭紹明,曲艷燕,董俊興;從嗜線蟲桿菌分離的吲哚衍生物抗腫瘤活性的研究[J];中國新藥雜志;2002年11期

2 徐潔蓮;昆蟲病原線蟲發(fā)光桿菌的分離和鑒定[J];昆蟲天敵;1986年03期

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本文編號：1290351