發(fā)布時(shí)間：2017-12-13 19:08

  本文關(guān)鍵詞：綿羊肺腺瘤病PCR檢測(cè)技術(shù)的建立及exJSRV與enJSRV載量相關(guān)性分析

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【摘要】：綿羊肺腺瘤病(OPA)的病原是綿羊肺腺瘤病毒(JSRV),是一種可傳播的綿羊肺腫瘤疾病。OPA自19世紀(jì)被發(fā)現(xiàn)以來(lái),至今也沒(méi)可靠的方法控制其傳播,并且影響著很多國(guó)家養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展。該病有一個(gè)重要特點(diǎn)就是在OPA病羊血液中未曾檢測(cè)到循環(huán)抗體,所以不能用常規(guī)的血清學(xué)方法進(jìn)行診斷。為了建立針對(duì)該病靈敏度高、特異性好的檢測(cè)方法,以及探究外源性綿羊肺腺瘤病毒(exJSRV)和內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒(enJSRV)的相對(duì)表達(dá)量是否存在相關(guān)性,本研究建立了巢式RT-PCR和exJSRV Taqman實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法,針對(duì)OPA的早期、快速檢測(cè)。根據(jù)GenBank上發(fā)表的exJSRV基因序列(登錄號(hào)JQ837489.1與AF105220.1)設(shè)計(jì)合成巢式RT-PCR、Taqman實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物及擴(kuò)增exJSRV-env全基因的引物。利用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法對(duì)檢測(cè)樣品進(jìn)行分析,比對(duì)各樣品中exJSRV與enJSRV的載量關(guān)系。對(duì)兩種方法檢測(cè)出的陽(yáng)性血樣的羊只進(jìn)行跟蹤試驗(yàn),進(jìn)行組織病理學(xué)驗(yàn)證。巢式RT-PCR、Taqman實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法分別可檢測(cè)到9.72 fg的病毒RNA和為10-1 copies的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒。特異性試驗(yàn)結(jié)果表明兩種方法僅可特異性的擴(kuò)增exJSRV。臨床檢測(cè)陽(yáng)性的部分樣品(1份鼻液和2份血樣)經(jīng)送檢測(cè)序,序列比對(duì)結(jié)果顯示鼻液、血樣的巢式外套與內(nèi)套R(shí)T-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與JQ837489.1同源性均高達(dá)98.9%以上,且擴(kuò)增基因序列翻譯的氨基酸序列中具有外源性綿羊肺腺瘤病毒特有的致病性"YXXM"序列。所建立的qPCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線循環(huán)數(shù)與模板濃度呈良好的線性關(guān)系。同時(shí)分析比較同一樣品中exJSRV與enJSRV相對(duì)表達(dá)量的關(guān)系發(fā)現(xiàn)在自然感染病肺中、本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期跟蹤羊只的肺組織及疑似OPA羊只的鼻液中,exJSRV都較enJSRV有高表達(dá)量,而血樣中正好相反,這正好解釋了對(duì)各樣品進(jìn)行exJSRV-env全基因的擴(kuò)增,病肺與鼻液的擴(kuò)增產(chǎn)物與exJSRV具有高同源性;血樣的擴(kuò)增產(chǎn)物與enJSRV同源性高。本試驗(yàn)所建立的方法,具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值且靈敏性高、特異性好,這對(duì)OPA的早期檢測(cè)提供了一種方便、可靠、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的診斷方法,并且為定量分析exJSRV感染程度奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S858.26

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1 劉淑英,馬學(xué)恩;綿羊肺腺瘤病研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2003年01期

2 宋卓;;綿羊肺腺瘤病[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2006年04期

3 張艷紅;史夏云;韓惠瑛;;葛迪羊患綿羊肺腺瘤病[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2007年04期

4 冉雙存;;綿羊肺腺瘤病研究進(jìn)展[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2010年04期

5 荊文魁;王穎;張懷宇;劉彩霞;;綿羊肺腺瘤病[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2010年05期

6 趙澤峗;劉淑英;羅學(xué)東;;綿羊肺腺瘤病毒的巢式RT-PCR技術(shù)檢測(cè)[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2011年06期

7 張?jiān)旅?劉淑英;;內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒與宿主共進(jìn)化研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年07期

8 平萬(wàn)軍;;綿羊肺腺瘤病的流行及診治[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn);2011年06期

9 魯延剛;相猛;賈寧;潘虹;李棟;寧明剛;;蘭州地區(qū)綿羊肺腺瘤病的診斷及病理學(xué)研究[J];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年02期

10 劉桂珍;張光濤;;綿羊肺腺瘤病的診斷與防治[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn);2013年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉淑英;齊景偉;梁化春;徐萌杰;;綿羊肺腺瘤病毒的斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢測(cè)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 王金良;李嬌;祖立闖;沈志強(qiáng);劉吉山;張文杰;;德克賽爾雜交綿羊肺腺瘤病毒病的診斷[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

3 賽朝格圖;徐永新;娜順其木格;幺宏強(qiáng);于立新;白善義;馬學(xué)恩;;綿羊肺腺瘤病的流行病學(xué)調(diào)查和診斷[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

4 羅軍榮;周艷喜;高華;武志紅;周建華;馬學(xué)恩;;綿羊肺腺瘤病血清學(xué)檢測(cè)方法的建立[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

5 馬學(xué)恩;劉淑英;王鳳龍;幺宏強(qiáng);張九河;賽朝格圖;白云霖;韓彩霞;張淑琴;鄭秉武;;內(nèi)蒙古綿羊肺腺瘤病的研究初報(bào)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十三次學(xué)術(shù)討論會(huì)和中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十二次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2005年

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7 張淑琴;鄭秉武;于立新;馬學(xué)恩;;綿羊肺腺瘤病自然感染病例的臨床病理學(xué)檢查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十三次學(xué)術(shù)討論會(huì)和中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十二次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2005年

8 么宏強(qiáng);馬學(xué)恩;于立新;張淑琴;鄭秉武;;綿羊肺腺瘤病毒人工感染羔羊后淋巴細(xì)胞的變化[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十三次學(xué)術(shù)討論會(huì)和中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十二次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2005年

9 魯延剛;賈寧;;蘭州地區(qū)綿羊肺腺瘤病的診斷及病理學(xué)研究[A];2012年中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)暨中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

10 武志紅;么宏強(qiáng);于立新;馬學(xué)恩;;人工感染綿羊肺腺瘤病毒內(nèi)蒙株羔羊的臨床病理學(xué)研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ;羊的病毒性傳染病[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 周艷喜;綿羊肺腺瘤病相關(guān)基因突變的檢測(cè)及綿羊、山羊內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的擴(kuò)增[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

2 羅軍榮;JSRV檢測(cè)及JSRV轉(zhuǎn)錄起始調(diào)節(jié)基因LTR致瘤機(jī)制相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 張?jiān)旅?綿羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白與綿羊透明質(zhì)酸酶2相互作用初探[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 斯日古楞;JSRV-NM株env基因和CA基因的克隆、表達(dá)及其單抗的制備[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

5 么宏強(qiáng);綿羊肺腺瘤病自然病例和人工感染病例的臨床病理學(xué)及分子病理學(xué)研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 劉淑英;綿羊肺腺瘤病毒NM株基因組全序列的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 趙澤峗;綿羊肺腺瘤病毒的分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 楊素芳;新疆部分地區(qū)綿羊肺腺瘤病分子流行病學(xué)調(diào)g⒉±硌д鋃霞叭蜃櫸治鯷D];石河子大學(xué);2015年

3 駱?biāo)?JSRV-Env重組質(zhì)粒對(duì)小鼠三種體外細(xì)胞的幾種細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)影響的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 石晶;綿羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白引起體內(nèi)外細(xì)胞轉(zhuǎn)化的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 梁田;薩�？搜蚝凸_克羊Toll樣受體7基因SSCP多態(tài)性與綿羊肺腺瘤病的相關(guān)性分析[D];石河子大學(xué);2016年

6 肖媛媛;新疆哈薩克羊TLR8基因突變與綿羊肺腺瘤病毒易感性關(guān)系研究[D];石河子大學(xué);2016年

7 吳志強(qiáng);綿羊肺腺瘤病毒斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

8 郭文慶;綿羊肺腺瘤病PCR檢測(cè)技術(shù)的建立及exJSRV與enJSRV載量相關(guān)性分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

9 鄭秉武;綿羊肺腺瘤病的病理組織學(xué)研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 劉霄卉;綿羊肺腺瘤病毒囊膜基因表面蛋白的表達(dá)及其單克隆抗體的制備[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

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