本文關(guān)鍵詞：中華絨螯蟹中ADAMs蛋白在精細(xì)胞凋亡過程中的功能研究

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【摘要】：生殖細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)對維持正常的精子發(fā)生非常重要。在脊椎動(dòng)物中,ADAM家族蛋白中的ADAM17和ADAM10已被證明參與精細(xì)胞凋亡過程。并且,已有研究證明哺乳動(dòng)物中的ADAM17和ADAM10通過p38 MAPK信號通路參與精細(xì)胞的凋亡調(diào)控。但是在中華絨螯蟹中,Es-ADAM17和Es-ADAM10是否參與精細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制仍然不明。在本文研究中,我們建立了中華絨螯蟹的紫外線誘導(dǎo)的精細(xì)胞凋亡模型,并通過分析不同條件下Es-ADAM17和Es-ADAM10的蛋白表達(dá)水平,來探究Es-ADAM17和Es-ADAM10基因與中華絨螯蟹精細(xì)胞在紫外誘導(dǎo)條件下的精細(xì)胞凋亡過程之間的關(guān)系。轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的三磷酸脫氧鳥苷-生物素刻痕末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測結(jié)果顯示,紫外光照射時(shí)間越長,在熒光顯微鏡下組織樣本陽性信號越強(qiáng),中華絨螯蟹的精細(xì)胞凋亡率越高。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明,凋亡標(biāo)記基因Es-caspase和Es-NM23的基因表達(dá)量也隨著紫外照射時(shí)間延長而增長;Es-ADAM17的基因表達(dá)量隨著光照時(shí)間的延長而升高,但Es-ADAM10的基因表達(dá)量卻隨著光照時(shí)間的延長而降低。通過,蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)分析,精細(xì)胞的凋亡引起Es-ADAM17和Es-ADAM10蛋白表達(dá)量的變化,變化趨勢與實(shí)時(shí)熒光定量PCR的趨勢相同。這表明Es-ADAM17和Es-ADAM10在中華絨螯蟹的精細(xì)胞凋亡中起到相反的作用。在凋亡模型中分別加入ADAM17和ADAM10的抑制劑后的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明,Es-ADAM17促進(jìn)精細(xì)胞凋亡,Es-ADAM10抑制精細(xì)胞凋亡。在抑制劑的作用下,Es-p38和Es-p53的蛋白磷酸化水平也發(fā)生了不同程度的變化。上述研究結(jié)果表明,中華絨螯蟹ADAM17和ADAM10可能通過p38MAPK信號通路來調(diào)節(jié)精細(xì)胞的凋亡。
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 堵南山,薛魯征,賴偉;中華絨螯蟹精子的研究 Ⅱ.精子發(fā)生[J];海洋與湖沼;1988年01期

2 堵南山,賴偉,薛魯征;中華絨螯蟹精子的研究——Ⅰ.精子的形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)[J];海洋與湖沼;1987年02期

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本文編號：1265840