本文關(guān)鍵詞：副豬嗜血桿菌細(xì)胞致死膨脹毒素細(xì)胞毒性機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 副豬嗜血桿菌 細(xì)胞致死膨脹毒素 細(xì)胞周期 細(xì)胞凋亡 p53

【摘要】：副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,H.parasuis)是引起副豬嗜血桿菌病的病原,該病主要表現(xiàn)為多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎及腦膜炎。細(xì)胞致死膨脹毒素(Cytolethal distending toxin,CDT)是H.parasuis的重要毒力因子,由CdtA、CdtB和CdtC 3個(gè)亞基組成。為研究副豬嗜血桿菌細(xì)胞致死膨脹毒素(HpCDT)對(duì)宿主細(xì)胞的毒性作用,本研究以豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)和PK-15細(xì)胞為模型,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)、激光共聚焦、免疫印跡、熒光定量PCR等方法進(jìn)行毒素與細(xì)胞的互作研究。通過(guò)Predsi、Signal-Blast和Signal-3L軟件預(yù)測(cè)CdtA,CdtB和CdtC的信號(hào)肽,結(jié)果顯示其信號(hào)肽分別為N端1-19aa、1-21aa和1-19aa。去掉信號(hào)肽后成功地以可溶形式表達(dá)了3種重組蛋白。純化的CdtB在體外能夠剪切環(huán)狀或線性DNA,表明其具有DNase活性;在體內(nèi)純化的CdtB能夠誘導(dǎo)PK-15細(xì)胞產(chǎn)生γ-H2A.X,說(shuō)明其具有DNase活性,并引起了DNA雙鏈斷裂。經(jīng)流式細(xì)胞儀分析重組蛋白處理的細(xì)胞周期和凋亡情況,結(jié)果表明單獨(dú)的CdtB能夠引起PAM和PK-15細(xì)胞G2/M期阻滯和細(xì)胞凋亡,而在CdtA或/和CdtC的幫助下能夠更顯著地增強(qiáng)這種作用。進(jìn)一步研究結(jié)果表明CDT全毒素能夠引起最顯著的細(xì)胞膨脹、細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡。Pifithrin-α和CDT共同處理PK-15細(xì)胞能夠明顯地抑制其細(xì)胞凋亡,說(shuō)明CDT誘導(dǎo)的凋亡是p53依賴的。通過(guò)基因表達(dá)譜芯片分析各亞基的細(xì)胞毒性,顯示各亞基作用于細(xì)胞均有大量的基因表達(dá)發(fā)生變化。總之,本研究成功地以可溶形式純化了去掉信號(hào)肽的HpCDT的3個(gè)亞基,CdtB在體內(nèi)體外均具有DNase活性,單獨(dú)的CdtB能夠引起細(xì)胞周期阻滯和凋亡,CdtA和CdtC能夠增強(qiáng)其細(xì)胞毒性,3個(gè)亞基共同作用能夠發(fā)揮最大毒性,CDT介導(dǎo)的凋亡是p53依賴的。
【關(guān)鍵詞】：副豬嗜血桿菌 細(xì)胞致死膨脹毒素 細(xì)胞周期 細(xì)胞凋亡 p53
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 英文縮略表10-11
• 第一章 緒論11-21
• 1.1 副豬嗜血桿菌簡(jiǎn)介11-15
• 1.1.1 病原學(xué)11
• 1.1.2 致病機(jī)理11-13
• 1.1.3 流行病學(xué)13
• 1.1.4 臨床癥狀和病理變化13-14
• 1.1.5 診斷14
• 1.1.6 預(yù)防14-15
• 1.2 CDT的研究進(jìn)展15-20
• 1.2.1 CDT簡(jiǎn)介15
• 1.2.2 CDT的結(jié)構(gòu)及酶活性15-16
• 1.2.3 CDT的內(nèi)化16
• 1.2.4 CDT細(xì)胞毒性機(jī)制的研究16-18
• 1.2.5 CDT引起的炎癥反應(yīng)18-20
• 1.3 研究目的和意義20-21
• 第二章 副豬嗜血桿菌細(xì)胞致死膨脹毒素的細(xì)胞毒性機(jī)制21-40
• 2.1 材料與方法21-26
• 2.1.1 菌株和細(xì)胞21
• 2.1.2 主要儀器與試劑21
• 2.1.3 信號(hào)肽預(yù)測(cè)21-22
• 2.1.4 cdtA，cdtB和cdtC基因擴(kuò)增22
• 2.1.5 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定22
• 2.1.6 CdtA，，CdtB和CdtC原核表達(dá)、純化及鑒定22-23
• 2.1.7 DNase活性試驗(yàn)23
• 2.1.8 γ-H2A.X間接流式分析23
• 2.1.9 細(xì)胞周期分析23
• 2.1.10 細(xì)胞凋亡分析23-24
• 2.1.11 激光共聚焦試驗(yàn)24
• 2.1.12 Western blot24
• 2.1.13 熒光定量RT-PCR24-25
• 2.1.14 細(xì)胞處理及表達(dá)譜芯片分析25
• 2.1.15 差異基因表達(dá)的驗(yàn)證25
• 2.1.16 數(shù)據(jù)分析25-26
• 2.2 結(jié)果26-38
• 2.2.1 信號(hào)肽預(yù)測(cè)26
• 2.2.2 cdtA，cdtB和cdtC基因擴(kuò)增26-27
• 2.2.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定27-28
• 2.2.4 CdtA，CdtB和CdtC原核表達(dá)、純化及鑒定28-29
• 2.2.5 DNase活性試驗(yàn)29
• 2.2.6 CdtB引起細(xì)胞DNA雙鏈斷裂29-30
• 2.2.7 CDT誘導(dǎo)PAM和PK-15細(xì)胞周期阻滯30-33
• 2.2.8 CDT誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡33-34
• 2.2.9 CDT誘導(dǎo)p53依賴的細(xì)胞凋亡34-35
• 2.2.10 CDT各亞基作用細(xì)胞基因表達(dá)譜變化35-36
• 2.2.11 CDT各亞基作用細(xì)胞基因的變化36-38
• 2.3 討論38-40
• 第三章 全文結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-51
• 致謝51-52
• 作者簡(jiǎn)介52

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 溫華梅;;副豬嗜血桿菌的臨床分離鑒定與耐藥性分析[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2009年12期

2 趙恒章;趙坤;余燕;李國(guó)旺;馬金友;張慧輝;;副豬嗜血桿菌蜂膠苗的制備及免疫效果試驗(yàn)[J];生物技術(shù);2009年06期

3 何麗麗;李春玲;王貴平;賈愛(ài)卿;楊冬霞;宣春玲;鄭鐵鎖;王金生;;廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘;2010年03期

4 楊國(guó)強(qiáng);;副豬嗜血桿菌診斷治療分析[J];科技致富向?qū)?2013年02期

5 蔣征;李軍星;姜平;柴其然;余飛;錢(qián)黎婷;;副豬嗜血桿菌分離與基因分型鑒定[J];畜牧與獸醫(yī);2008年06期

6 周雪;付利芝;王孝友;翟少欽;譚榮;丁玉春;;重慶地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥物敏感性分析[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2011年12期

7 熊蕊;劉曉慧;左玉柱;范京惠;郭鳳柳;趙同欣;王娜;顏紅;;副豬嗜血桿菌感染豬的臨床癥狀及病理學(xué)觀察[J];科技致富向?qū)?2014年02期

8 張雷;張秀亮;鄭新添;余旭平;;副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2008年02期

9 郭建強(qiáng);王傳寶;張彬;;副豬嗜血桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J];中國(guó)動(dòng)物保健;2008年06期

10 陸國(guó)林;何海健;;浙江省副豬嗜血桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2010年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 胡明明;常月紅;張艷禾;司薇;謝芳;于申業(yè);劉慧芳;劉思國(guó);王春來(lái);;副豬嗜血桿菌“菌影”的制備[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 孫清蓮;荊汝頂;畢征;郝付全;劉海林;;某豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌等病的診治報(bào)告[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十三次學(xué)術(shù)討論會(huì)和中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專業(yè)委員會(huì)第十二次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2005年

3 車(chē)勇良;陳少鶯;周倫江;王隆柏;魏宏;莊向生;;副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

4 王東方;;副豬嗜血桿菌的診斷與治療[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

5 朱杰儀;劉健;羅滿林;;副豬嗜血桿菌毒力基因的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

6 周宗清;鄒勇;王英;張春玲;蔣鳳英;;多重感染豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

7 周學(xué)利;蔡旭旺;陳煥春;徐曉娟;趙雅欣;陳品;張璇;;副豬嗜血桿菌的耐藥性研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)養(yǎng)豬學(xué)分會(huì)第五次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨養(yǎng)豬業(yè)創(chuàng)新發(fā)展論壇論文集[C];2010年

8 張瑜;鄭杰;張慶霞;喬彥良;趙玉軍;范國(guó)兵;;一例副豬嗜血桿菌的分離鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

9 何海健;陸國(guó)林;熊永忠;;浙江省副豬嗜血桿菌分離株的生物學(xué)特性[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

10 尹秀鳳;王艷;姜平;;副豬嗜血桿菌的流行病學(xué)調(diào)查[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 行唐縣獸醫(yī)防疫站 王金合;副豬嗜血桿菌和附紅細(xì)胞體混感的診治[N];河北科技報(bào);2011年

2 沙河市畜牧水產(chǎn)局 胡文英 付麗偉;豬瘟與副豬嗜血桿菌混感的綜合防控[N];河北科技報(bào);2014年

3 ;一例副豬嗜血桿菌和傳染性胸膜肺炎混合感染的治療心得[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

4 ;一例副豬嗜血桿菌和傳染性胸膜肺炎混合感染的治療心得[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

5 石家莊市行唐縣獸醫(yī)防疫站 王金合;副豬嗜血桿菌和附紅體混合感染咋治療[N];河北農(nóng)民報(bào);2011年

6 張偉;一例豬圓環(huán)病毒與副豬嗜血桿菌混合感染的診治[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2011年

7 譚海珍;鑒別豬跛行 對(duì)癥好防控[N];河南科技報(bào);2012年

8 石家莊市畜牧水產(chǎn)局 于振梅 郝立賓;豬流行性感冒、鏈球菌病、副豬嗜血桿菌混合感染的診治[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2007年

9 山東省沂水縣職教中心高級(jí)畜牧師 李連任　提供;豬：關(guān)節(jié)發(fā)病不要急 查找病因要仔細(xì)[N];河南科技報(bào);2010年

10 山東省沂水縣職教中心 李連任;春季謹(jǐn)防豬跛行性疾病[N];河北科技報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 金卉;副豬嗜血桿菌感染和應(yīng)激相關(guān)基因的鑒定與功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 陳品;副豬嗜血桿菌耐藥性分子機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 靳國(guó)旺;安陽(yáng)地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及蜂膠滅活苗的制備[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 付書(shū)林;副豬嗜血桿菌重要免疫原性相關(guān)蛋白發(fā)掘及GAPDH免疫調(diào)節(jié)機(jī)理研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 汪洋;副豬嗜血桿菌感染豬肺泡巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究與環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 周明光;副豬嗜血桿菌新型免疫原性蛋白的發(fā)掘與鑒定及細(xì)胞毒素的鑒定與功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 都啟晶;副豬嗜血桿菌基因組表達(dá)文庫(kù)的構(gòu)建與其莢膜多糖輸出蛋白基因的篩選和免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 蔡旭旺;副豬嗜血桿菌的分離鑒定及診斷方法與滅活疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

9 樂(lè)敏;副豬嗜血桿菌基因組學(xué)及毒力相關(guān)因子研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 李軍星;副豬嗜血桿菌分子流行病學(xué)調(diào)查及其HSP70對(duì)PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白GP3/GP5的免疫協(xié)同作用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 苗立中;副豬嗜血桿菌熒光定量PCR方法建立及其分離株高密度發(fā)酵研究[D];吉林大學(xué);2012年

2 張悅;副豬嗜血桿菌耐藥性調(diào)查及其對(duì)氟苯尼考耐藥分子機(jī)制的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 �；�;副豬嗜血桿菌細(xì)胞致死膨脹毒素細(xì)胞毒性機(jī)制研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 米丁丹;副豬嗜血桿菌HbpA蛋白功能及其致病中作用的初步研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

5 陳凡杰;副豬嗜血桿菌HAPS_ 2096基因介導(dǎo)的天蠶素B抗性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 周杉杉;NOD1/2-RIP2信號(hào)通路參與副豬嗜血桿菌感染PK-15細(xì)胞調(diào)控機(jī)制的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 李雪梅;副豬嗜血桿菌nanH基因和at1基因的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 劉佳;副豬嗜血桿菌細(xì)胞致死膨脹毒素對(duì)細(xì)胞和仔豬致病作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 姚文龍;人乳寡糖LSTa和血清型5副豬嗜血桿菌莢膜多糖重復(fù)單元的化學(xué)酶法合成研究[D];山東大學(xué);2015年

10 馮芬芬;CpxA/R雙組份系統(tǒng)在副豬嗜血桿菌應(yīng)對(duì)刺激中的作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

本文編號(hào)：1082675