本文關(guān)鍵詞：氬氦冷凍對腫瘤抑制性樹突狀細(xì)胞的影響及聯(lián)合anti-CTLA4單抗抑制膠質(zhì)瘤的試驗研究

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【摘要】：研究背景腦膠質(zhì)瘤是最常見的惡性腫瘤之一,占顱腦腫瘤的40%～50%。據(jù)最新資料統(tǒng)計,腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病率為3-10/10萬,目前腦膠質(zhì)瘤的治療以顯微手術(shù)切除為主,術(shù)后輔以化療和放療,但由于膠質(zhì)瘤尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤呈浸潤性生長,廣泛深入正常腦組織,且對放化療均不敏感,手術(shù)創(chuàng)傷及放化療又對機(jī)體免疫力產(chǎn)生抑制和破壞,致使其復(fù)發(fā)率和死亡率普遍居高不下。因此,在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時,盡量減少手術(shù)創(chuàng)傷和提高術(shù)后的免疫水平對膠質(zhì)瘤的治療有著重要的意義,也是當(dāng)前腦膠質(zhì)瘤治療最具前景的戰(zhàn)略發(fā)展方向。隨著分子生物學(xué)和腫瘤免疫學(xué)的快速發(fā)展,免疫療法已經(jīng)成為繼手術(shù)治療、放療及化療之后的第四種腫瘤治療方式。我們前期研究表明：經(jīng)氬氦冷凍治療后的荷C6膠質(zhì)瘤的大鼠模型不僅破壞了腫瘤細(xì)胞,而且誘導(dǎo)病灶周圍細(xì)胞凋亡,同時外周血CD3+、 CD4+、CD8+、CD14+、CD16+56+淋巴細(xì)胞數(shù)以及Thl/Th2比值均有顯著升高,荷瘤動物平均生存時間顯著較對照組延長(P0.01),證實氬氦冷凍治療除了直接殺滅腫瘤細(xì)胞,還能增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能,提高抗腫瘤能力,實現(xiàn)了微創(chuàng)和免疫促進(jìn)的完美結(jié)合,同時也為進(jìn)一步作用機(jī)制的研究打下了夯實的基礎(chǔ)。冷凍荷瘤動物可以有效激活機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)已經(jīng)得到國內(nèi)外的證實,但其機(jī)制仍然沒有明確的定論。冷凍治療產(chǎn)生的免疫機(jī)制主要針對于冷療所產(chǎn)生的環(huán)境有利于抗原呈遞細(xì)胞對此微環(huán)境中的腫瘤特異性抗原產(chǎn)生響應(yīng),從而進(jìn)一步刺激T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞免疫作用殺傷殘存腫瘤。冷療是導(dǎo)致組織壞死的一種有效手段,細(xì)胞壞死包括了細(xì)胞膜的破損及其內(nèi)部細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞器等內(nèi)容物釋放。這個過程對于免疫細(xì)胞來說,是一個很強(qiáng)的刺激信號。同時壞死又激發(fā)了更多的細(xì)胞因子的釋放,使得這些抗原遞呈細(xì)胞被激活的可能性大大提高。與熱療不同的是,冷凍治療并不會對腫瘤內(nèi)部的抗原肽產(chǎn)生很大的破壞。這些相對完整的腫瘤特異性抗原肽隨著腫瘤細(xì)胞的壞死被釋放到周圍環(huán)境中,很容易被抗原呈遞細(xì)胞攝取并呈遞給T細(xì)胞從而產(chǎn)生免疫效應(yīng)。有學(xué)者對乳腺癌的小鼠進(jìn)行冷凍治療發(fā)現(xiàn),小鼠治療后產(chǎn)生了抵抗二次接種腫瘤的免疫力,同時在局部近腫瘤淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)了T細(xì)胞響應(yīng)。也有觀點認(rèn)為,冷凍導(dǎo)致的壞死可以引起腫瘤抗原的釋放,這些抗原可能進(jìn)入機(jī)體循環(huán)系統(tǒng)而到達(dá)外周免疫器官,被B淋巴細(xì)胞攝取后,激活產(chǎn)生針對這些抗原的抗體。正常機(jī)體免疫系統(tǒng)可以識別和殺傷突變的細(xì)胞,從而清除腫瘤細(xì)胞或抑制其生長,但是腫瘤細(xì)胞可通過其高突變的特性,逃避免疫監(jiān)視并且建立免疫抑制微環(huán)境,抵抗和抑制機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)。在腫瘤組織中,除了大量腫瘤細(xì)胞,還有成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、髓源抑制性細(xì)胞等以及包含多種功能的細(xì)胞因子在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì),這構(gòu)成了支持腫瘤生長的微環(huán)境。隨著腫瘤的發(fā)生與發(fā)展,腫瘤微環(huán)境尤其是腫瘤免疫微環(huán)境向抑制性免疫微環(huán)境轉(zhuǎn)變,包括抗腫瘤的免疫效應(yīng)細(xì)胞的缺失及無功能化,免疫抑制細(xì)胞的增多,免疫效應(yīng)分子的減少與免疫抑制分子的增加等,幫助了腫瘤進(jìn)一步逃脫自身免疫監(jiān)視,加劇了腫瘤進(jìn)展。樹突狀細(xì)胞是一種專職的抗原提呈細(xì)胞,不僅可以激活外源性病原免疫反應(yīng),而且,在誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)中同樣發(fā)揮著關(guān)鍵作用。但是,腫瘤微環(huán)境中一些抑制性細(xì)胞因子影響樹突狀細(xì)胞的功能,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)也可通過自身表達(dá)的免疫抑制性分子影響樹突細(xì)胞的功能,這些樹突狀細(xì)胞又能進(jìn)一步誘導(dǎo)Treg的分化和增殖,這些耐受性樹突狀細(xì)胞低表達(dá)協(xié)調(diào)刺激信號和XHC2類分子,并且通過工D0等誘導(dǎo)T細(xì)胞失能。然而,氬氦冷凍腫瘤后對于腫瘤免疫抑制壞境的改變?nèi)圆坏枚?需要進(jìn)一步研究。CTLA4是表達(dá)在活化T細(xì)胞和Treg細(xì)胞上的抑制性共刺激分子受體,anti-CTLA4抗體(ipilimumab)在2011年被美國FDA批準(zhǔn)用于晚期有轉(zhuǎn)移的黑色素瘤患者的治療。CTLA4阻滯可以抑制T細(xì)胞中的CTLA4信號傳導(dǎo),逆轉(zhuǎn)CTLA4對于效應(yīng)T細(xì)胞的抑制,同時也可阻斷CTLA4對于Treg的激活。有研究表明,在小鼠模型中,全身注射anti-CTLA4可以促進(jìn)腫瘤內(nèi)侵潤效應(yīng)T細(xì)胞的增加,減少Treg細(xì)胞的數(shù)量,增加Teff/Treg比例。Anti-CTLA4抗體聯(lián)合GM-CSF疫苗在小鼠腦膠質(zhì)瘤中也取得了顯著的效果。雖然有些研究證實,anti-CTLA4抗體聯(lián)合氬氦冷凍對于治療黑色素瘤具有良好的療效,但是否也適用于小鼠腦膠質(zhì)瘤,還需進(jìn)一步的研究,并且相對全身系統(tǒng)性用藥的嚴(yán)重副作用,局部腫瘤應(yīng)用單抗是否更具優(yōu)勢,也是一個亟待解決的問題。基于以上研究背景,我們首先利用氬氦冷凍皮下膠質(zhì)瘤小鼠模型,觀察凍融前后腫瘤引流淋巴結(jié)中免疫抑制微環(huán)境的變化,尤其是腫瘤相關(guān)免疫抑制性樹突狀細(xì)胞功能上的影響,進(jìn)一步確證氬氦冷凍對于腫瘤免疫功能的恢復(fù)。其次,我們建立腦內(nèi)原位膠質(zhì)瘤小鼠模型,原位注射anti-CTLA4抗體及氬氦冷凍腫瘤裂解物,觀察各組抗腫瘤療效,研究抗腫瘤機(jī)制,探索一種腦膠質(zhì)瘤治療的新方法,為進(jìn)一步的臨床應(yīng)用提供試驗證據(jù)。第一章氬氦冷凍腫瘤對免疫抑制性樹突狀細(xì)胞功能的影響目的：研究氬氦冷凍腫瘤后對于腫瘤引流淋巴結(jié)中的免疫抑制性樹突狀細(xì)胞功能的影響。方法：通過建立皮下GL261膠質(zhì)瘤小鼠模型,利用氬氦冷凍治療或普通手術(shù)切除治療,將小鼠分為空白對照組、腫瘤對照組、氬氦冷凍腫瘤組及手術(shù)切除腫瘤組。在給予處理2周后,分離腫瘤引流淋巴結(jié),流式檢測腫瘤引流淋巴結(jié)中的樹突狀細(xì)胞的數(shù)量、表型及白介素10(IL-10)的表達(dá)。利用CFSE流式檢測腫瘤引流淋巴結(jié)中的樹突狀細(xì)胞刺激T細(xì)胞增殖能力。利用T細(xì)胞細(xì)胞毒試驗檢測T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞殺傷能力。對處理小鼠再次接種GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞,檢測其二次抗腫瘤免疫能力,測量二次接種腫瘤體積,繪制二次腫瘤生長曲線。記錄二次腫瘤小鼠生存期,繪制生存期曲線。免疫熒光檢測二次腫瘤中侵潤樹突狀細(xì)胞的表達(dá)。再各組小鼠處理后,清除調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg),記錄各組小鼠生存期,繪制生存期曲線。結(jié)果：成功構(gòu)建皮下GL261膠質(zhì)瘤小鼠模型并實施治療分組。成功分離各組腫瘤引流淋巴結(jié),流式檢測腫瘤引流淋巴結(jié)中樹突狀細(xì)胞：CD80和CD86的表達(dá)在四組之間有顯著差異,有統(tǒng)計學(xué)差異(F=79.625,P0.001)(F=98.452,P0.001),其中,腫瘤對照組比空白對照組顯著降低(CD80,P0.001:CD86,P0.001),氬氦冷凍腫瘤組較手術(shù)切除腫瘤組顯著升高(CD80,P0.001:CD86,P0.001)�？瞻讓φ战M與腫瘤對照組、手術(shù)切除腫瘤組之間MHC Ⅱ表達(dá)無顯著差異(P=0.702,P=0.491),但氬氦冷凍腫瘤組的樹突狀細(xì)胞MHC Ⅱ顯著高于其他三組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.012,P=0.022,P=0.004)。各組間引流淋巴結(jié)中樹突狀細(xì)胞數(shù)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=19.904,P0.001),其中氬氦冷凍腫瘤組的引流淋巴結(jié)中樹突狀細(xì)胞的絕對數(shù)量顯著高于腫瘤對照組(P=0.003),而各組間的樹突狀細(xì)胞IL-10表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=108.407,P0.001)其中樹突狀細(xì)胞IL-10的表達(dá)率顯著低于腫瘤對照組(P0.001)和手術(shù)切除腫瘤組(P0.001),而腫瘤對照組和手術(shù)切除腫瘤組顯著高于空白對照組(P0.001,P0.001)。對比各組IL-10的分泌量,空白對照組、腫瘤對照組、氬氦冷凍腫瘤組、手術(shù)切除腫瘤組分泌IL-10量分別為：78±37.24pg/ml、766.6±115.9pg/ml、 177.7±46.7pg/ml、596.6±310.9 pg/ml。各組間IL-10分泌量差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=30.524,P0.001),其中腫瘤對照組、手術(shù)切除腫瘤組分泌IL-10高于氬氦冷凍腫瘤組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001、P=0.001),氬氦冷凍腫瘤組與空白對照組無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.272)。在淋巴混合培養(yǎng)實驗中,隨著DC：T細(xì)胞比例不斷增加(1：3、1：1、3：1),空白對照組、氬氦冷凍腫瘤組中T細(xì)胞的增殖率上漲顯著,而腫瘤對照組、手術(shù)切除腫瘤組的T細(xì)胞增殖較為緩慢。在DC：T=3：1的大比例下,氬氦冷凍腫瘤組中T細(xì)胞的增殖率顯著高于腫瘤對照組(P0.001)和手術(shù)切除腫瘤組(P=0.001),具有統(tǒng)計學(xué)意義。在腫瘤細(xì)胞殺傷實驗中,效應(yīng)T細(xì)胞與靶細(xì)胞GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞分別以E：T為10、50、100的比例共培養(yǎng)4小時,利用CCK-8法檢測其靶細(xì)胞殺傷能力。氬氦冷凍腫瘤組的靶細(xì)胞GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞殺傷率均高于其他各組(E:T=10、50、100, P0.001; E:T=10,50、100, P0.001; E:T=10、50.100, P0.001)。氬氦冷凍腫瘤組的二次接種腫瘤大小514.8±310.8mm3,顯著小于空白對照二次接種腫瘤995.6±225.7mm3(P=0.049)及手術(shù)切除腫瘤組的二次接種腫瘤1032.7±277.4mm3(P=0.037),但生存期無顯著差異(P=0.109,P=0.091)。二次腫瘤免疫熒光染色后發(fā)現(xiàn),手術(shù)切除腫瘤組的二次腫瘤組織中侵潤的樹突狀細(xì)胞較多的表達(dá)IL-10,而氬氦冷凍腫瘤組的二次腫瘤組織中侵潤的樹突狀細(xì)胞則較少的表達(dá)IL-10。在清除Treg細(xì)胞后,空白對照組小鼠平均生存期為36.6±3.37天,腫瘤對照+清除Treg組小鼠平均生存期為35.2±4.8天,氬氦冷凍腫瘤+清除Treg組小鼠平均生存期為66.6±7.5天,手術(shù)切除腫瘤+清除Treg組小鼠平均生存期為44.6±5.4天。氬氦冷凍腫瘤+清除Treg組小鼠生存期顯著優(yōu)于空白對照組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.011)。結(jié)論：氬氦冷凍小鼠GL261膠質(zhì)瘤可以改變腫瘤引流淋巴結(jié)中的樹突狀細(xì)胞的數(shù)量及表型,降低免疫抑制因子IL-10的表達(dá),增強(qiáng)刺激T淋巴細(xì)胞的能力,提高效應(yīng)T細(xì)胞對小鼠GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷能力�？裳泳彾谓臃N腫瘤的生長速度,減少二次腫瘤中侵潤表達(dá)IL-10的樹突狀細(xì)胞,同時予以清除免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞Treg,可增強(qiáng)抵抗二次腫瘤的能力,延長二次腫瘤生存期。第二章氬氦冷凍裂解物聯(lián)合anti-CTLA4抗體原位治療顱內(nèi)膠質(zhì)瘤小鼠的療效分析目的：通過探索氬氦冷凍裂解物聯(lián)合anti-CTLA4抗體原位治療顱內(nèi)膠質(zhì)瘤小鼠,分析其抗腫瘤療效,研究其抗腫瘤機(jī)制。方法：建立顱內(nèi)膠質(zhì)瘤小鼠模型,采用顱內(nèi)原位注射氬氦冷凍裂解物及／或anti-CTLA4抗體,分為腫瘤對照組(小鼠右腦尾狀核接種1x1O5/5μl GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞,不予任何治療。)、anti-CTLA4治療組(小鼠右腦尾狀核接種1×105/5μlGL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞后第3、6、9、12天原位注射anti-CTLA4抗體各一次,每次10gg。)、氬氦冷凍腫瘤裂解物治療組(小鼠右腦尾狀核接種1xlO5/5μl GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞后第3、6天原位注射氬氦冷凍膠質(zhì)瘤裂解物各一次,每次10μg。)、聯(lián)合治療組(小鼠右腦尾狀核接種1xlO5/5μl GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞后第3、6、9、12天原位注射anti-CTLA4抗體各一次,每次10gg；第3、6天原位注射氬氦冷凍膠質(zhì)瘤裂解物各一次,每次10μg。),計算各組生存期,評估各組神經(jīng)毒性反應(yīng),分離腦侵潤淋巴細(xì)胞,流式檢測CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞變化,計算CD4+、CD8+T細(xì)胞與Foxp3+Treg細(xì)胞比例,檢測腦侵潤淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞殺傷能力,免疫熒光證實腦侵潤淋巴細(xì)胞,提取腦腫瘤組織,檢測腫瘤微環(huán)境中IL-10. IL-12、IL-4及IFN-gama表達(dá)情況,給予清除CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞后,分析各組小鼠生存期,評價其療效機(jī)制。結(jié)果：成功建立腦膠質(zhì)瘤小鼠模型并按照各組實施治療。治療操作可靠,未見因治療手術(shù)操作死亡小鼠。腫瘤對照組、anti-CTLA4治療組、氬氦冷凍腫瘤裂解物治療組、聯(lián)合治療組小鼠平均生存期為28.8±1.31天、39.9±3.8天、32.7±1.7天、51.9±3.4天,治療組生存期均優(yōu)于腫瘤對照組,(P=0.010,P=0.028, P0.001), anti-CTLA4治療組和氬氦冷凍腫瘤裂解物治療組生存期無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.123),聯(lián)合治療組生存期優(yōu)于anti-CTLA4治療組及氬氦冷凍腫瘤裂解物治療組(P=0.046,P=0.001)。神經(jīng)系統(tǒng)評分中,在腫瘤接種第7天,腫瘤對照組評分平均秩次為12.05,聯(lián)合治療組評分平均秩次為8.95,Z=-1.33,P=0.181,兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在腫瘤接種第13天,腫瘤對照組評分平均秩次為14.2,聯(lián)合治療組評分平均秩次為6.8,Z=-2.87,P=0.004,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義,腫瘤對照組評分高于聯(lián)合治療組評分。腫瘤對照組腦組織HE染色,可見腦內(nèi)膠質(zhì)瘤巨大,侵潤正常腦組織,而聯(lián)合治療組腦組織HE染色,可見正常腦組織,未見腫瘤細(xì)胞侵潤,可見淋巴細(xì)胞侵潤。經(jīng)免疫熒光染色后,腫瘤對照組中有較少腦CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞侵潤。聯(lián)合治療組可見較多的腦侵潤C(jī)D4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測腦侵潤淋巴細(xì)胞,對于腦侵潤淋巴細(xì)胞中CD4+T淋巴細(xì)胞的比例,聯(lián)合治療組顯著高于腫瘤對照組(P0.001). anti-CTLA4治療組(P=0.002)和氬氦冷凍腫瘤裂解物治療組(P0.001)；對于腦侵潤淋巴細(xì)胞中CD8+T淋巴細(xì)胞的比例,聯(lián)合治療組顯著高于腫瘤對照組(P0.001), anti-CTLA4治療組(P0.001)和氬氦冷凍腫瘤裂解物治療組；聯(lián)合治療組中的CD4+, CD8+T淋巴細(xì)胞相對數(shù)量計數(shù)分別為0.46±0.048/Million、0.71 ±0.019/Million,顯著高于其他三組(所有P0.001)。同樣,腫瘤對照組與聯(lián)合治療組的脾臟淋巴細(xì)胞中CD4+Foxp3-/Foxp3+的比例無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.713),但腦侵潤淋巴細(xì)胞中CD4+Foxp3-/Foxp3+的比例,聯(lián)合治療組顯著高于腫瘤對照組(P=0.005)；腫瘤對照組與聯(lián)合治療組的脾臟淋巴細(xì)胞中CD8+Foxp3-/Foxp3+的比例無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.102),但腦侵潤淋巴細(xì)胞中CD8+Foxp3-/Foxp3+的比例,聯(lián)合治療組高于腫瘤對照組7倍(P=0.003)。在腫瘤細(xì)胞殺傷實驗中,效應(yīng)細(xì)胞：靶細(xì)胞為10、20、40時,聯(lián)合治療組腦侵潤淋巴細(xì)胞殺傷效率均高于脾臟淋巴細(xì)胞組(P=0.005、P0.001、P0.001)和腫瘤對照組(P=0.007、P0.001、P0.001),在聯(lián)合治療組中,腦侵潤淋巴細(xì)胞對于GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷效率均高于B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞(效靶比=10,P=0.002、效靶比=20,P0.001、效靶比=40,P0.001)和Hepal-6小鼠肝細(xì)胞癌細(xì)胞(效靶比=10,P=0.002、效靶比=20,P0.001、效靶比=40,P0.001)。同時,聯(lián)合治療組腦侵潤淋巴細(xì)胞殺傷GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞釋放的IFN-gama劑量顯著大于正常小鼠脾臟淋巴細(xì)胞(P0.001)和腫瘤對組腦侵潤淋巴細(xì)胞(P0.001)的釋放量。在熒光定量PCR檢測腦腫瘤組織細(xì)胞因子實驗中,聯(lián)合治療組腦腫瘤組織中IL-10的表達(dá)僅為腫瘤對照組的三分之一(P=0.02),而氬氦冷凍腫瘤裂解物治療組中IL-10的表達(dá)為腫瘤對照組的1.6倍(P=0.036)。聯(lián)合治療組腦腫瘤組織中IL-12的表達(dá)為腫瘤對照組表達(dá)的7.17±1.51倍,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001)。聯(lián)合治療組腦腫瘤組織中IL-4的表達(dá)為腫瘤對照組表達(dá)的0.53±0.24倍,有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.024)。聯(lián)合治療組腦腫瘤組織中IFN-gama的表達(dá)為腫瘤對照組表達(dá)的3.76±0.25倍,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001)。在清除CD4+或CD8+淋巴細(xì)胞后,聯(lián)合治療小組小鼠與聯(lián)合治療+CD4-depletion小鼠生存期無顯著差異(P=0.134),聯(lián)合治療+CD8-depletion小鼠生存期顯著少于聯(lián)合治療組小鼠,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001)。結(jié)論：腫瘤原位注射anti-CTLA4抗體聯(lián)合腫瘤凍融裂解物可以治療腦膠質(zhì)瘤小鼠,可以延長小鼠存活時間,改善小鼠生存期,并且具有較小的神經(jīng)系統(tǒng)毒性。聯(lián)合治療可以增加腦侵潤淋巴細(xì)胞CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例及數(shù)量,增加了效應(yīng)T細(xì)胞與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例,尤其是CD8+效應(yīng)T細(xì)胞與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例,并且改變了腦膠質(zhì)瘤腫瘤微環(huán)境,增加腫瘤局部IL=12、IFN-gama的表達(dá),降低了IL-10、IL-4的表達(dá)。在體外實驗中,聯(lián)合治療組中腦侵潤淋巴細(xì)胞具有GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞特異性殺傷能力,具有較強(qiáng)的抗腫瘤能力,尤其是CD8+T淋巴細(xì)胞在聯(lián)合治療腦膠質(zhì)瘤中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 樹突狀細(xì)胞 CTLA4 氬氦冷凍 抗腫瘤免疫
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 摘要3-11
• ABSTRACT11-23
• 前言23-31
• 第一章 氬氦冷凍對腫瘤相關(guān)樹突狀細(xì)胞功能的影響31-64
• 一、引言31-32
• 二、材料和方法32-46
• 三、結(jié)果46-60
• 四、討論60-63
• 五、結(jié)論63-64
• 第二章 氬氦冷凍聯(lián)合原位anti-CTLA4抗體治療顱內(nèi)膠質(zhì)瘤小鼠的療效分析64-99
• 一、引言64-66
• 二、材料與方法66-81
• 三、結(jié)果81-96
• 四、討論96-98
• 五、結(jié)論98-99
• 全文總結(jié)99-100
• 參考文獻(xiàn)100-112
• 中英文對照和縮略詞表112-114
• 攻讀學(xué)位期間成果114-116
• 致謝116-119
• 統(tǒng)計學(xué)審稿證明119

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本文編號：957538