本文關鍵詞：腎虛痰阻與AD的關系及補腎化痰益智法治療AD的作用研究

  更多相關文章： 補腎化痰益智法 阿爾茨海默病 腎虛 痰阻 Aβ 神經炎癥

【摘要】：目的:阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是以漸進性記憶障礙,認知功能障礙、人格改變以及語言障礙等神經精神癥狀為特征的中樞神經系統(tǒng)退行性疾病,是世界上最常見的癡呆性疾病,影響超過1.5億人。隨著我國老齡化人口數(shù)量的增長,加強對阿爾茨海默病病因病機的研究,并對其開展有效的防治措施及藥物治療,這顯得尤為迫切和重要。因此,本論文在闡述阿爾茨海默病病因病機的基礎上,進一步深入探討補腎化痰益智法臨床應用的理論依據,并以APP/PS1雙轉基因小鼠為研究對象,研究其代表方——補腎化痰益智方治療AD的作用及機制,為中醫(yī)藥治療阿爾茨海默病提供堅實的理論基礎和科學的實驗依據。方法:1、理論探討:通過整理并分析古今相關文獻對阿爾茨海默病的記載與論述,總結祖國醫(yī)學對本病病因病機的認識,探討以腎虛為主的五臟虧虛與阿爾茨海默病的關系、腎虛與痰阻的關系,從而進一步闡述其病因病機及臨床的治則治法。2、實驗研究:選用APP/PS1雙轉基因小鼠模型,以Aβ沉積為靶點,從分子生物學水平研究補腎化痰益智方治療AD的機制。通過Morris水迷宮實驗、穿梭箱實驗、跳臺實驗這三種行為學檢測方法,觀察小鼠的學習記憶力的改變;透射電鏡觀察小鼠海馬CA1區(qū)神經元及突觸的病理改變;免疫組織化學染色法觀察小鼠海馬Aβ1-40、Aβ1-42染色改變,免疫組織化學染色法及Western Blot法觀察Aβ主要生成分泌酶和降解酶(α-分泌酶:ADAM-10,β-分泌酶:BACE1,降解酶:NEP、IDE)的表達,影響Aβ腦內轉運的RAGE、LRP1的表達及海馬NF-κB的表達。ELISA法檢測IL-1β、TNF-α含量。流式細胞儀檢測各組小鼠外周血黏附分子含量(CD11a、CD11b、CD18、CD54、CD62L)的變化。結果:morris水迷宮實驗顯示,在整個定位航行實驗過程中,與模型組比較,各給藥組小鼠能較快找到逃生平臺,并且隨著訓練的時間延長,學習趨勢不斷增強,尤以補腎化痰益智方高劑量組效果更為好�？臻g搜索實驗中,與模型組比較,補腎化痰益智方組小鼠的穿越平臺次數(shù)、第一象限時間明顯增加(p0.01,p0.05)及第一次穿越平臺時間明顯縮短(p0.01)。跳臺測試實驗結果顯示,各給藥組小鼠的潛伏期與模型組比呈明顯縮短,其出錯次數(shù)也較之明顯減少(p0.01)。穿梭箱實驗結果顯示,補腎化痰益智方組小鼠的主動回避次數(shù)較模型組明顯增加(p0.01,p0.05),而主動回避潛伏期、被動回避潛伏期明顯縮短(p0.01)。說明補腎化痰益智方能較好的改善app/ps1雙轉基因小鼠的學習、記憶能力。透射電鏡觀察,補腎化痰益智方對小鼠海馬神經元及突觸有保護作用;免疫組織化學染色法結果顯示與空白組比較,模型組海馬dg區(qū)神經細胞aβ1-40、aβ1-42染色較深,且模型組偶可見老年斑染色。與模型組比較,各給藥組海馬dg區(qū)神經細胞aβ1-40、aβ1-42染色較淺。免疫組化、weston-blot結果顯示與空白組比較,模型組adam-10、nep、ide表達顯著性降低(p0.05,p0.01);bace1、rage、lrp1、nf-κb表達顯著性升高(p0.05,p0.01)。與模型組比較,各給藥組adam-10、nep、ide表達顯著性升高(p0.05,p0.01);bace1無顯著性差異(p0.05);而rage、lrp1、nf-κb表達顯著性降低(p0.05,p0.01)。elisa檢測結果顯示,與空白組比較,模型組小鼠海馬il-1β和tnf-α明顯增加(p0.01);與模型組比較,其余各給藥組大鼠海馬il-1β和tnf-α明顯減少(p0.05,p0.01)。流式細胞儀檢測結果顯示與空白組比較,模型組小鼠外周血黏附分子cd11a、cd11b、cd18、cd54、cd62l含量均明顯降低(p0.05,p0.01);與模型組比較,各給藥組外周血黏附分子cd18、cd54含量均明顯升高(p0.05,p0.01),而cd11a、cd11b、cd62l含量無明顯差異(P0.05)。結論:1、腎虛是AD的病機之本,痰阻是AD的病機之標。補腎化痰益智法是防治AD的重要治法。2、補腎化痰益智方能夠改善APP/PS1雙轉基因小鼠學習記憶能力,對其海馬組織神經元、突觸有一定保護作用。3、補腎化痰益智方治療AD的作用機制與減少APP/PS1雙轉基因小鼠海馬組織Aβ生成,促進Aβ降解及轉運,減輕炎癥反應,調節(jié)其外周血中黏附分子有關。
【關鍵詞】：補腎化痰益智法 阿爾茨海默病 腎虛 痰阻 Aβ 神經炎癥
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R277.7
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 縮略詞表13-15
• 前言15-16
• 第一部分 補腎化痰益智法治療AD的理論探討16-31
• 1 古代文獻對AD的記載及論述16-18
• 2 中醫(yī)學對AD病因病機的認識18-27
• 2.1 腎虛是AD的病機之本19-24
• 2.2 痰阻是AD的病機之標24-27
• 3 補腎化痰益智治法探討27-31
• 3.1 補腎填精健腦27
• 3.2 化痰開竅益智27-31
• 第二部分 補腎化痰益智法對AD動物模型作用的實驗研究31-61
• 實驗一 補腎化痰益智方對APP/PS1雙轉基因小鼠學習、記憶的影響32-39
• 1 實驗材料32-33
• 1.1 實驗動物32
• 1.2 實驗藥物32
• 1.3 實驗儀器32-33
• 2 實驗方法33-35
• 2.1 動物分組及給藥33
• 2.2 Morris水迷宮實驗33-34
• 2.3 跳臺實驗34
• 2.4 穿梭箱實驗34-35
• 2.5 統(tǒng)計學處理35
• 3 實驗結果35-39
• 3.1 Morris水迷宮實驗結果35-37
• 3.2 跳臺測試實驗結果37-38
• 3.3 穿梭箱測試實驗結果38-39
• 實驗二 補腎化痰法對APP/PS1雙轉基因小鼠海馬Aβ 沉積的影響39-56
• 1 實驗材料39-41
• 1.1 實驗儀器39
• 1.2 實驗試劑39-41
• 1.3 實驗所用主要溶液的配制41
• 2 實驗方法41-46
• 2.1 取材41-42
• 2.2 電鏡觀察42
• 2.3 免疫組織化學染色42-43
• 2.4 Western-blot法檢測43-45
• 2.5 統(tǒng)計學處理45-46
• 3 實驗結果46-56
• 3.1 小鼠海馬CA1區(qū)電鏡結果46-50
• 3.2 小鼠海馬Aβ1-40、Aβ1-42免疫組織化學染色結果50
• 3.3 小鼠海馬組織ADAM-10、BACE1蛋白的表達50-52
• 3.4 小鼠海馬組織NEP、IDE蛋白的表達52-53
• 3.5 小鼠海馬組織RAGE、LRP1蛋白的表達53-56
• 實驗三 補腎化痰益智方對APP/PS1雙轉基因小鼠海馬及外周血炎癥相關因子的影響56-61
• 1 實驗材料56
• 1.1 實驗動物56
• 1.2 實驗藥物56
• 1.3 實驗儀器56
• 1.4 實驗試劑56
• 1.5 實驗所用主要溶液的配制56
• 2 實驗方法56-58
• 2.1 取材56
• 2.2 免疫組化及weston-blot檢測56-57
• 2.3 ELISA法檢測57
• 2.4 流式細胞儀檢測57
• 2.5 統(tǒng)計學處理57-58
• 3 實驗結果58-61
• 3.1 小鼠海馬組織NF-κB蛋白的表達58
• 3.2 ELISA法檢測IL-1β、TNF-α 含量58-59
• 3.3 流式細胞儀檢測各組小鼠外周血黏附分子含量59-61
• 第三部分 討論61-77
• 1 實驗動物模型的選擇61-62
• 2 補腎化痰益智方對癡呆模型小鼠學習記憶的影響62-65
• 3 補腎化痰益智方對APP/PS1轉基因小鼠Aβ 級聯(lián)損傷的影響65-77
• 3.1 對小鼠海馬神經元的損傷65-66
• 3.2 對小鼠海馬Aβ 沉積的影響66-72
• 3.3 對小鼠海馬及外周血炎癥相關因子的影響72-77
• 結語77-78
• 參考文獻78-87
• 附錄 免疫炎癥與AD關系的研究進展87-97
• 參考文獻92-97
• 在校期間公開發(fā)表的學術論文及科研成果97-98
• 致謝98-99

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本文編號：921888