發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 06:12

  本文關(guān)鍵詞：腎虛痰阻與AD的關(guān)系及補(bǔ)腎化痰益智法治療AD的作用研究

  更多相關(guān)文章： 補(bǔ)腎化痰益智法 阿爾茨海默病 腎虛 痰阻 Aβ 神經(jīng)炎癥

【摘要】：目的:阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是以漸進(jìn)性記憶障礙,認(rèn)知功能障礙、人格改變以及語言障礙等神經(jīng)精神癥狀為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,是世界上最常見的癡呆性疾病,影響超過1.5億人。隨著我國(guó)老齡化人口數(shù)量的增長(zhǎng),加強(qiáng)對(duì)阿爾茨海默病病因病機(jī)的研究,并對(duì)其開展有效的防治措施及藥物治療,這顯得尤為迫切和重要。因此,本論文在闡述阿爾茨海默病病因病機(jī)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步深入探討補(bǔ)腎化痰益智法臨床應(yīng)用的理論依據(jù),并以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠為研究對(duì)象,研究其代表方——補(bǔ)腎化痰益智方治療AD的作用及機(jī)制,為中醫(yī)藥治療阿爾茨海默病提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1、理論探討:通過整理并分析古今相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)阿爾茨海默病的記載與論述,總結(jié)祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)本病病因病機(jī)的認(rèn)識(shí),探討以腎虛為主的五臟虧虛與阿爾茨海默病的關(guān)系、腎虛與痰阻的關(guān)系,從而進(jìn)一步闡述其病因病機(jī)及臨床的治則治法。2、實(shí)驗(yàn)研究:選用APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型,以Aβ沉積為靶點(diǎn),從分子生物學(xué)水平研究補(bǔ)腎化痰益智方治療AD的機(jī)制。通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)這三種行為學(xué)檢測(cè)方法,觀察小鼠的學(xué)習(xí)記憶力的改變;透射電鏡觀察小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元及突觸的病理改變;免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠海馬Aβ1-40、Aβ1-42染色改變,免疫組織化學(xué)染色法及Western Blot法觀察Aβ主要生成分泌酶和降解酶(α-分泌酶:ADAM-10,β-分泌酶:BACE1,降解酶:NEP、IDE)的表達(dá),影響Aβ腦內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的RAGE、LRP1的表達(dá)及海馬NF-κB的表達(dá)。ELISA法檢測(cè)IL-1β、TNF-α含量。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組小鼠外周血黏附分子含量(CD11a、CD11b、CD18、CD54、CD62L)的變化。結(jié)果:morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示,在整個(gè)定位航行實(shí)驗(yàn)過程中,與模型組比較,各給藥組小鼠能較快找到逃生平臺(tái),并且隨著訓(xùn)練的時(shí)間延長(zhǎng),學(xué)習(xí)趨勢(shì)不斷增強(qiáng),尤以補(bǔ)腎化痰益智方高劑量組效果更為好。空間搜索實(shí)驗(yàn)中,與模型組比較,補(bǔ)腎化痰益智方組小鼠的穿越平臺(tái)次數(shù)、第一象限時(shí)間明顯增加(p0.01,p0.05)及第一次穿越平臺(tái)時(shí)間明顯縮短(p0.01)。跳臺(tái)測(cè)試實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,各給藥組小鼠的潛伏期與模型組比呈明顯縮短,其出錯(cuò)次數(shù)也較之明顯減少(p0.01)。穿梭箱實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,補(bǔ)腎化痰益智方組小鼠的主動(dòng)回避次數(shù)較模型組明顯增加(p0.01,p0.05),而主動(dòng)回避潛伏期、被動(dòng)回避潛伏期明顯縮短(p0.01)。說明補(bǔ)腎化痰益智方能較好的改善app/ps1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力。透射電鏡觀察,補(bǔ)腎化痰益智方對(duì)小鼠海馬神經(jīng)元及突觸有保護(hù)作用;免疫組織化學(xué)染色法結(jié)果顯示與空白組比較,模型組海馬dg區(qū)神經(jīng)細(xì)胞aβ1-40、aβ1-42染色較深,且模型組偶可見老年斑染色。與模型組比較,各給藥組海馬dg區(qū)神經(jīng)細(xì)胞aβ1-40、aβ1-42染色較淺。免疫組化、weston-blot結(jié)果顯示與空白組比較,模型組adam-10、nep、ide表達(dá)顯著性降低(p0.05,p0.01);bace1、rage、lrp1、nf-κb表達(dá)顯著性升高(p0.05,p0.01)。與模型組比較,各給藥組adam-10、nep、ide表達(dá)顯著性升高(p0.05,p0.01);bace1無顯著性差異(p0.05);而rage、lrp1、nf-κb表達(dá)顯著性降低(p0.05,p0.01)。elisa檢測(cè)結(jié)果顯示,與空白組比較,模型組小鼠海馬il-1β和tnf-α明顯增加(p0.01);與模型組比較,其余各給藥組大鼠海馬il-1β和tnf-α明顯減少(p0.05,p0.01)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示與空白組比較,模型組小鼠外周血黏附分子cd11a、cd11b、cd18、cd54、cd62l含量均明顯降低(p0.05,p0.01);與模型組比較,各給藥組外周血黏附分子cd18、cd54含量均明顯升高(p0.05,p0.01),而cd11a、cd11b、cd62l含量無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1、腎虛是AD的病機(jī)之本,痰阻是AD的病機(jī)之標(biāo)。補(bǔ)腎化痰益智法是防治AD的重要治法。2、補(bǔ)腎化痰益智方能夠改善APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶能力,對(duì)其海馬組織神經(jīng)元、突觸有一定保護(hù)作用。3、補(bǔ)腎化痰益智方治療AD的作用機(jī)制與減少APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠海馬組織Aβ生成,促進(jìn)Aβ降解及轉(zhuǎn)運(yùn),減輕炎癥反應(yīng),調(diào)節(jié)其外周血中黏附分子有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：補(bǔ)腎化痰益智法 阿爾茨海默病 腎虛 痰阻 Aβ 神經(jīng)炎癥
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R277.7
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 縮略詞表13-15
• 前言15-16
• 第一部分 補(bǔ)腎化痰益智法治療AD的理論探討16-31
• 1 古代文獻(xiàn)對(duì)AD的記載及論述16-18
• 2 中醫(yī)學(xué)對(duì)AD病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)18-27
• 2.1 腎虛是AD的病機(jī)之本19-24
• 2.2 痰阻是AD的病機(jī)之標(biāo)24-27
• 3 補(bǔ)腎化痰益智治法探討27-31
• 3.1 補(bǔ)腎填精健腦27
• 3.2 化痰開竅益智27-31
• 第二部分 補(bǔ)腎化痰益智法對(duì)AD動(dòng)物模型作用的實(shí)驗(yàn)研究31-61
• 實(shí)驗(yàn)一 補(bǔ)腎化痰益智方對(duì)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)、記憶的影響32-39
• 1 實(shí)驗(yàn)材料32-33
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物32
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥物32
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器32-33
• 2 實(shí)驗(yàn)方法33-35
• 2.1 動(dòng)物分組及給藥33
• 2.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.3 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)34
• 2.4 穿梭箱實(shí)驗(yàn)34-35
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-39
• 3.1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-37
• 3.2 跳臺(tái)測(cè)試實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-38
• 3.3 穿梭箱測(cè)試實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-39
• 實(shí)驗(yàn)二 補(bǔ)腎化痰法對(duì)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠海馬Aβ 沉積的影響39-56
• 1 實(shí)驗(yàn)材料39-41
• 1.1 實(shí)驗(yàn)儀器39
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑39-41
• 1.3 實(shí)驗(yàn)所用主要溶液的配制41
• 2 實(shí)驗(yàn)方法41-46
• 2.1 取材41-42
• 2.2 電鏡觀察42
• 2.3 免疫組織化學(xué)染色42-43
• 2.4 Western-blot法檢測(cè)43-45
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理45-46
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-56
• 3.1 小鼠海馬CA1區(qū)電鏡結(jié)果46-50
• 3.2 小鼠海馬Aβ1-40、Aβ1-42免疫組織化學(xué)染色結(jié)果50
• 3.3 小鼠海馬組織ADAM-10、BACE1蛋白的表達(dá)50-52
• 3.4 小鼠海馬組織NEP、IDE蛋白的表達(dá)52-53
• 3.5 小鼠海馬組織RAGE、LRP1蛋白的表達(dá)53-56
• 實(shí)驗(yàn)三 補(bǔ)腎化痰益智方對(duì)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠海馬及外周血炎癥相關(guān)因子的影響56-61
• 1 實(shí)驗(yàn)材料56
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物56
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥物56
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器56
• 1.4 實(shí)驗(yàn)試劑56
• 1.5 實(shí)驗(yàn)所用主要溶液的配制56
• 2 實(shí)驗(yàn)方法56-58
• 2.1 取材56
• 2.2 免疫組化及weston-blot檢測(cè)56-57
• 2.3 ELISA法檢測(cè)57
• 2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)57
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理57-58
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果58-61
• 3.1 小鼠海馬組織NF-κB蛋白的表達(dá)58
• 3.2 ELISA法檢測(cè)IL-1β、TNF-α 含量58-59
• 3.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組小鼠外周血黏附分子含量59-61
• 第三部分 討論61-77
• 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的選擇61-62
• 2 補(bǔ)腎化痰益智方對(duì)癡呆模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響62-65
• 3 補(bǔ)腎化痰益智方對(duì)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠Aβ 級(jí)聯(lián)損傷的影響65-77
• 3.1 對(duì)小鼠海馬神經(jīng)元的損傷65-66
• 3.2 對(duì)小鼠海馬Aβ 沉積的影響66-72
• 3.3 對(duì)小鼠海馬及外周血炎癥相關(guān)因子的影響72-77
• 結(jié)語77-78
• 參考文獻(xiàn)78-87
• 附錄 免疫炎癥與AD關(guān)系的研究進(jìn)展87-97
• 參考文獻(xiàn)92-97
• 在校期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及科研成果97-98
• 致謝98-99

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本文編號(hào)：921888