本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-181c對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的抑制作用及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 miRNA-181c 增殖 侵襲 Notch2

【摘要】：膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)中最常見(jiàn)的原發(fā)惡性腫瘤,尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Glioblastoma multiforme, GBM)治療效果差,復(fù)發(fā)率高,平均生存期短,是神經(jīng)外科臨床工作中的難點(diǎn)之一。盡管近年來(lái)有手術(shù)、放療、化療及靶向治療等多種治療方法的進(jìn)步,膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍然不佳,其主要原因還是與膠質(zhì)瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng)及侵襲性強(qiáng)有關(guān)。主要方法、研究結(jié)果及結(jié)論如下：1.我們運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)檢索了癌癥基因組圖譜(TCGA)數(shù)據(jù)庫(kù),篩選出518例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤資料,其中包括142例經(jīng)典型,85例神經(jīng)元型,136例前神經(jīng)元型以及155例間充質(zhì)型。相對(duì)其他類型的GBM亞型,間充質(zhì)型的miRNA-181c表達(dá)是明顯下調(diào)的(P0.01)。進(jìn)而我們發(fā)現(xiàn),在GBM患者中,高表達(dá)miRNA-181c患者的中位生存期明顯長(zhǎng)于低表達(dá)者(452天vs.372天,P0.05)。單因素及多因素的回歸分析均證實(shí)了miRNA-181c是GBM的獨(dú)立預(yù)后因素。2.miRNA-181c在U87細(xì)胞神經(jīng)球中表達(dá)明顯下調(diào),并且抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。(1)對(duì)比U87神經(jīng)球和U87單層細(xì)胞,我們發(fā)現(xiàn)神經(jīng)球中的miRNA-181c表達(dá)明顯降低(P0.01)。(2)在轉(zhuǎn)染miRNA-181c mimic后,U87神經(jīng)球和U87細(xì)胞均有不同程度的miRNA-181c表達(dá)增加。(3)在48h和72h時(shí)間點(diǎn),用miRNA-181c mimic轉(zhuǎn)染后的U87細(xì)胞增殖被明顯抑制(P0.01)。(4)體外Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染了miRNA-181c mimic的U87細(xì)胞侵襲能力明顯減弱(P0.05)。3. miRNA-181c減弱了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的自我更新能力。(1)通過(guò)運(yùn)用有限稀釋法研究,由miRNA-181c mimic轉(zhuǎn)染的U87細(xì)胞神經(jīng)球體積和數(shù)量都明顯小于對(duì)照組,表明其成球能力減弱。(2)轉(zhuǎn)染了miRNA-181c mimic的U87細(xì)胞克隆形成數(shù)量明顯減少(P0.01),說(shuō)明其克隆形成能力亦被減弱。4.miRNA-181c在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中下調(diào)Notch2的表達(dá)。(1)運(yùn)用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)方法,分析了5個(gè)miRNA預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù),篩選出Notch2, HOXA1以及Smad7這3個(gè)重要基因。(2)RT-PCR結(jié)果表明,Notch2在轉(zhuǎn)染了miRNA-181c mimic的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)明顯降低,證明其為關(guān)鍵基因。(3)進(jìn)一步我們發(fā)現(xiàn),在U87細(xì)胞神經(jīng)球中,Notch2 mRNA是明顯上調(diào)的(P0.01),而轉(zhuǎn)染了miRNA-181c mimic的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中Notch2 mRNA表達(dá)明顯降低(P0.01)。(4)采用Western blot方法證實(shí),在U87細(xì)胞及成球細(xì)胞中,miRNA-181c都能夠減少Notch2的蛋白含量,表明miRNA-181c可以抑制Notch2蛋白的表達(dá)。(5)我們獲取了10例膠質(zhì)瘤病理標(biāo)本,并通過(guò)RT-PCR研究其中miRNA-181c與Notch2的關(guān)系。線性回歸模型證明了miRNA-181c與Notch2呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。(P0.05,R2=0.5728).本文的結(jié)論如下：癌癥基因組圖譜(TCGA)是一種研究膠質(zhì)瘤的有效方法,miRNA-181c是GBM的獨(dú)立預(yù)后因素,可以用作判斷GBM預(yù)后的指標(biāo)；miRNA-181c能夠抑制GBM腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和自我更新能力；miRNA-181c能夠在抑制GBM進(jìn)展的過(guò)程中發(fā)揮重要作用,其調(diào)控作用的發(fā)揮可能主要依賴Notch2信號(hào)通路的阻斷。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 miRNA-181c 增殖 侵襲 Notch2
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-13
• 前言13-15
• 第一部分 MIRNA-181C與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的亞型及預(yù)后相關(guān)15-22
• 1 研究方法15-16
• 2 結(jié)果16-19
• 3 討論19-21
• 4 小結(jié)21-22
• 第二部分 MIRNA-181C抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲與自我更新22-41
• 1 材料與方法22-32
• 2 結(jié)果32-38
• 3 討論38-40
• 4 小結(jié)40-41
• 第三部分 MIRNA-181C調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的NOTCH2信號(hào)通路41-62
• 1 材料與方法41-51
• 2 結(jié)果51-57
• 3 討論57-60
• 4 小結(jié)60-62
• 全文總結(jié)62-64
• 附表 164-77
• 參考文獻(xiàn)77-86
• 文獻(xiàn)綜述86-96
• 參考文獻(xiàn)92-96
• 致謝96-97
• 攻讀博士期間發(fā)表論文97

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本文編號(hào)：916190