本文關鍵詞：MicroRNA-181c對膠質母細胞瘤的抑制作用及其機制研究

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【摘要】：膠質瘤是神經系統(tǒng)中最常見的原發(fā)惡性腫瘤,尤其是膠質母細胞瘤(Glioblastoma multiforme, GBM)治療效果差,復發(fā)率高,平均生存期短,是神經外科臨床工作中的難點之一。盡管近年來有手術、放療、化療及靶向治療等多種治療方法的進步,膠質瘤患者的預后仍然不佳,其主要原因還是與膠質瘤細胞的快速生長及侵襲性強有關。主要方法、研究結果及結論如下：1.我們運用生物信息學技術檢索了癌癥基因組圖譜(TCGA)數據庫,篩選出518例膠質母細胞瘤資料,其中包括142例經典型,85例神經元型,136例前神經元型以及155例間充質型。相對其他類型的GBM亞型,間充質型的miRNA-181c表達是明顯下調的(P0.01)。進而我們發(fā)現,在GBM患者中,高表達miRNA-181c患者的中位生存期明顯長于低表達者(452天vs.372天,P0.05)。單因素及多因素的回歸分析均證實了miRNA-181c是GBM的獨立預后因素。2.miRNA-181c在U87細胞神經球中表達明顯下調,并且抑制了腫瘤細胞的增殖和侵襲。(1)對比U87神經球和U87單層細胞,我們發(fā)現神經球中的miRNA-181c表達明顯降低(P0.01)。(2)在轉染miRNA-181c mimic后,U87神經球和U87細胞均有不同程度的miRNA-181c表達增加。(3)在48h和72h時間點,用miRNA-181c mimic轉染后的U87細胞增殖被明顯抑制(P0.01)。(4)體外Transwell小室侵襲實驗發(fā)現,與對照組相比,轉染了miRNA-181c mimic的U87細胞侵襲能力明顯減弱(P0.05)。3. miRNA-181c減弱了膠質瘤細胞的自我更新能力。(1)通過運用有限稀釋法研究,由miRNA-181c mimic轉染的U87細胞神經球體積和數量都明顯小于對照組,表明其成球能力減弱。(2)轉染了miRNA-181c mimic的U87細胞克隆形成數量明顯減少(P0.01),說明其克隆形成能力亦被減弱。4.miRNA-181c在膠質瘤細胞中下調Notch2的表達。(1)運用生物信息學預測方法,分析了5個miRNA預測數據庫,篩選出Notch2, HOXA1以及Smad7這3個重要基因。(2)RT-PCR結果表明,Notch2在轉染了miRNA-181c mimic的膠質瘤細胞中表達明顯降低,證明其為關鍵基因。(3)進一步我們發(fā)現,在U87細胞神經球中,Notch2 mRNA是明顯上調的(P0.01),而轉染了miRNA-181c mimic的膠質瘤細胞中Notch2 mRNA表達明顯降低(P0.01)。(4)采用Western blot方法證實,在U87細胞及成球細胞中,miRNA-181c都能夠減少Notch2的蛋白含量,表明miRNA-181c可以抑制Notch2蛋白的表達。(5)我們獲取了10例膠質瘤病理標本,并通過RT-PCR研究其中miRNA-181c與Notch2的關系。線性回歸模型證明了miRNA-181c與Notch2呈負相關關系。(P0.05,R2=0.5728).本文的結論如下：癌癥基因組圖譜(TCGA)是一種研究膠質瘤的有效方法,miRNA-181c是GBM的獨立預后因素,可以用作判斷GBM預后的指標；miRNA-181c能夠抑制GBM腫瘤細胞的增殖、侵襲和自我更新能力；miRNA-181c能夠在抑制GBM進展的過程中發(fā)揮重要作用,其調控作用的發(fā)揮可能主要依賴Notch2信號通路的阻斷。
【關鍵詞】：膠質母細胞瘤 miRNA-181c 增殖 侵襲 Notch2
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 縮略語表5-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-13
• 前言13-15
• 第一部分 MIRNA-181C與膠質母細胞瘤的亞型及預后相關15-22
• 1 研究方法15-16
• 2 結果16-19
• 3 討論19-21
• 4 小結21-22
• 第二部分 MIRNA-181C抑制膠質瘤細胞的增殖、侵襲與自我更新22-41
• 1 材料與方法22-32
• 2 結果32-38
• 3 討論38-40
• 4 小結40-41
• 第三部分 MIRNA-181C調控膠質瘤細胞的NOTCH2信號通路41-62
• 1 材料與方法41-51
• 2 結果51-57
• 3 討論57-60
• 4 小結60-62
• 全文總結62-64
• 附表 164-77
• 參考文獻77-86
• 文獻綜述86-96
• 參考文獻92-96
• 致謝96-97
• 攻讀博士期間發(fā)表論文97

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