本文關(guān)鍵詞：新型納米生物探針的構(gòu)建及其應(yīng)用

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【摘要】：神經(jīng)系統(tǒng)疾病和腫瘤是當(dāng)前人類面臨的兩類重大而又未能攻克的疾病,嚴(yán)重影響著人類的健康和生活質(zhì)量。納米科技的發(fā)展為這兩類疾病的診療發(fā)展提供了新的契機(jī)。本論文圍繞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和腫瘤中的兩個重要問題:星型膠質(zhì)細(xì)胞對β-淀粉樣肽的內(nèi)化降解過程以及循環(huán)腫瘤細(xì)胞的快速高靈敏檢測,研究新型納米生物探針的構(gòu)建及其應(yīng)用。首先,分別采用物理包覆法,共價偶聯(lián)法及生物親和法將淀粉肽(Aβ)結(jié)合到量子點(diǎn)(QDs)表面制備納米生物探針。通過多種手段對這些探針進(jìn)行了表征,結(jié)果證明三種探針均保持了QDs優(yōu)良的熒光性質(zhì)也保留了Aβ的生物免疫活性,可進(jìn)一步應(yīng)用;其后利用原代培養(yǎng)的星型膠質(zhì)細(xì)胞對三類生物探針進(jìn)行內(nèi)化實(shí)驗(yàn),在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件的基礎(chǔ)上,證明了物理包覆法所制得的QDs-Aβ探針對Aβ的入胞事件示蹤效果最好,且利用該探針對Aβ“入胞-被降解-降解完畢”的過程進(jìn)行了初步示蹤觀察,證明了QDs-Aβ作為該方面研究工具的可行性。其次,以快速、簡便且高效地分離并檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)為目標(biāo),分別構(gòu)建基于超順磁性γ-Fe2O3納米材料的免疫磁富集探針,以及基于水溶性Zn Se/Zn S QDs的免疫熒光探針,進(jìn)而將這兩類探針聯(lián)合應(yīng)用,并采用對Zn2+具有特異性熒光放大信號作用的Fluo Zin-3染料對CTCs進(jìn)行定量檢測。結(jié)果表明,利用修飾有Ep CAM抗體的免疫磁球(IMNs)可以特異性捕獲乳腺癌細(xì)胞MCF-7(104個/m L或1-100個/m L),捕獲率達(dá)95%以上;通過溫和的無銅催化點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)構(gòu)建的CTCs靶向的免疫熒光探針具有對MCF-7細(xì)胞的特異識別能力;通過條件優(yōu)化后,Fluo Zin-3染料不但可以對經(jīng)過離子置換的Zn Se/Zn S QDs進(jìn)行定量檢測,而且可以對經(jīng)免疫磁富集探針分離富集并被Zn Se/Zn S QDs特異性標(biāo)記的MCF-7細(xì)胞進(jìn)行定量檢測,檢測的線性范圍為100-1000個細(xì)胞/m L。這些研究結(jié)果可以推動星型膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)化和降解β-淀粉樣肽的過程和機(jī)理研究以及循環(huán)腫瘤細(xì)胞的快速高靈敏檢測技術(shù)的發(fā)展,也將促進(jìn)納米生物探針在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用的發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：熒光納米量子點(diǎn) Aβ 星型膠質(zhì)細(xì)胞 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 免疫磁球 硒化鋅量子點(diǎn) Fluo Zin-3
【學(xué)位授予單位】：北京理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R44;O657.3;TB383.1
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 第1章 緒論12-40
• 1.1 癌癥與神經(jīng)退行性疾病的社會現(xiàn)狀12
• 1.2 阿爾茲海默疾病及其現(xiàn)狀12-24
• 1.2.1 阿茲海默癥及其危害12-13
• 1.2.2 β-淀粉肽與阿茲海默癥的發(fā)病機(jī)制13-14
• 1.2.3 Aβ 的酶降解代謝途徑14-15
• 1.2.4 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對Aβ 的內(nèi)化與清除15-18
• 1.2.5 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對Aβ 肽的內(nèi)化機(jī)制18-20
• 1.2.6 納米技術(shù)在阿茲海默疾病研究中的應(yīng)用20-24
• 1.3 循環(huán)腫瘤細(xì)胞及其檢測技術(shù)的研究現(xiàn)狀24-37
• 1.3.1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞在癌癥診療領(lǐng)域的應(yīng)用24-31
• 1.3.2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測方法的發(fā)展及納米技術(shù)在其中的應(yīng)用31-37
• 1.4 納米生物探針概述37-38
• 1.5 課題研究思路38-40
• 1.5.1 課題研究目的及意義38
• 1.5.2 具體方法與策略38-40
• 第2章 量子點(diǎn)標(biāo)記Aβ 生物熒光探針的制備及其在星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)化Aβ 中的應(yīng)用40-69
• 2.1 引言40-41
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分41-49
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑41
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器41-49
• 2.3 結(jié)果與討論49-67
• 2.3.1 量子點(diǎn)作為淀粉肽研究工具的可行性探索49-53
• 2.3.2 多方法制備量子點(diǎn)標(biāo)記Aβ 的生物熒光探針53-63
• 2.3.3 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對QDs-Aβ 的吞噬63-67
• 2.4 小結(jié)67-69
• 第3章 γ-Fe_2O_3納米磁球免疫探針的構(gòu)建及其對循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲方法的建立69-85
• 3.1 引言69
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分69-74
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器69
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器69-70
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法70-74
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論74-83
• 3.3.1 羧基納米磁球濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及其磁回收效率-時間曲線檢測74-75
• 3.3.2 羧基納米磁球表面的EpCAM抗體功能化75-77
• 3.3.3 免疫磁球（IMNs）對乳腺癌細(xì)胞的特異性識別77-79
• 3.3.4 免疫磁球?qū)θ橄侔┘?xì)胞的高效特異性捕獲79-83
• 3.4 小結(jié)83-85
• 第4章 量子點(diǎn)免疫熒光探針的構(gòu)建及基于磁富集和熒光信號放大的CTCS檢測新方法85-112
• 4.1 引言85
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分85-92
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑耗材85-86
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器86-87
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法87-92
• 4.3 結(jié)果與討論92-110
• 4.3.1 基于點(diǎn)擊化學(xué)的量子點(diǎn)免疫熒光探針的構(gòu)建及其對CTCs的識別與標(biāo)記92-103
• 4.3.2 鋅離子特異性染料對ZnSe/ZnS量子點(diǎn)的熒光放大檢測103-109
• 4.3.3 免疫磁富集聯(lián)合Zn2+熒光放大檢測CTCs方法的建立109-110
• 4.4 小結(jié)110-112
• 結(jié)論112-113
• 參考文獻(xiàn)113-126
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文與研究成果清單126-127
• 致謝127

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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3 孫夢晗;FPS-ZM1對糖基化終產(chǎn)物所致大鼠海馬區(qū)炎性反應(yīng)和Aβ異常代謝的影響與機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2014年

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6 曾瀝瓊;循環(huán)腫瘤細(xì)胞對卵巢癌預(yù)后預(yù)測價值的meta分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

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9 郭宇冰;gx-50對β淀粉樣蛋白所誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞趨化性的影響[D];上海交通大學(xué);2014年

10 李金鞠;早老素-2對炎癥的調(diào)控及其在阿爾茨海默癥發(fā)生中的作用[D];華東師范大學(xué);2015年

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本文編號：901558