本文關鍵詞：新型納米生物探針的構建及其應用

  更多相關文章： 熒光納米量子點 Aβ 星型膠質細胞 循環(huán)腫瘤細胞 免疫磁球 硒化鋅量子點 Fluo Zin-3

【摘要】：神經系統(tǒng)疾病和腫瘤是當前人類面臨的兩類重大而又未能攻克的疾病,嚴重影響著人類的健康和生活質量。納米科技的發(fā)展為這兩類疾病的診療發(fā)展提供了新的契機。本論文圍繞神經系統(tǒng)疾病和腫瘤中的兩個重要問題:星型膠質細胞對β-淀粉樣肽的內化降解過程以及循環(huán)腫瘤細胞的快速高靈敏檢測,研究新型納米生物探針的構建及其應用。首先,分別采用物理包覆法,共價偶聯(lián)法及生物親和法將淀粉肽(Aβ)結合到量子點(QDs)表面制備納米生物探針。通過多種手段對這些探針進行了表征,結果證明三種探針均保持了QDs優(yōu)良的熒光性質也保留了Aβ的生物免疫活性,可進一步應用;其后利用原代培養(yǎng)的星型膠質細胞對三類生物探針進行內化實驗,在優(yōu)化實驗條件的基礎上,證明了物理包覆法所制得的QDs-Aβ探針對Aβ的入胞事件示蹤效果最好,且利用該探針對Aβ“入胞-被降解-降解完畢”的過程進行了初步示蹤觀察,證明了QDs-Aβ作為該方面研究工具的可行性。其次,以快速、簡便且高效地分離并檢測循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)為目標,分別構建基于超順磁性γ-Fe2O3納米材料的免疫磁富集探針,以及基于水溶性Zn Se/Zn S QDs的免疫熒光探針,進而將這兩類探針聯(lián)合應用,并采用對Zn2+具有特異性熒光放大信號作用的Fluo Zin-3染料對CTCs進行定量檢測。結果表明,利用修飾有Ep CAM抗體的免疫磁球(IMNs)可以特異性捕獲乳腺癌細胞MCF-7(104個/m L或1-100個/m L),捕獲率達95%以上;通過溫和的無銅催化點擊化學反應構建的CTCs靶向的免疫熒光探針具有對MCF-7細胞的特異識別能力;通過條件優(yōu)化后,Fluo Zin-3染料不但可以對經過離子置換的Zn Se/Zn S QDs進行定量檢測,而且可以對經免疫磁富集探針分離富集并被Zn Se/Zn S QDs特異性標記的MCF-7細胞進行定量檢測,檢測的線性范圍為100-1000個細胞/m L。這些研究結果可以推動星型膠質細胞內化和降解β-淀粉樣肽的過程和機理研究以及循環(huán)腫瘤細胞的快速高靈敏檢測技術的發(fā)展,也將促進納米生物探針在生物醫(yī)學領域應用的發(fā)展。
【關鍵詞】：熒光納米量子點 Aβ 星型膠質細胞 循環(huán)腫瘤細胞 免疫磁球 硒化鋅量子點 Fluo Zin-3
【學位授予單位】：北京理工大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R44;O657.3;TB383.1
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 第1章 緒論12-40
• 1.1 癌癥與神經退行性疾病的社會現(xiàn)狀12
• 1.2 阿爾茲海默疾病及其現(xiàn)狀12-24
• 1.2.1 阿茲海默癥及其危害12-13
• 1.2.2 β-淀粉肽與阿茲海默癥的發(fā)病機制13-14
• 1.2.3 Aβ 的酶降解代謝途徑14-15
• 1.2.4 神經膠質細胞對Aβ 的內化與清除15-18
• 1.2.5 神經膠質細胞對Aβ 肽的內化機制18-20
• 1.2.6 納米技術在阿茲海默疾病研究中的應用20-24
• 1.3 循環(huán)腫瘤細胞及其檢測技術的研究現(xiàn)狀24-37
• 1.3.1 循環(huán)腫瘤細胞在癌癥診療領域的應用24-31
• 1.3.2 循環(huán)腫瘤細胞檢測方法的發(fā)展及納米技術在其中的應用31-37
• 1.4 納米生物探針概述37-38
• 1.5 課題研究思路38-40
• 1.5.1 課題研究目的及意義38
• 1.5.2 具體方法與策略38-40
• 第2章 量子點標記Aβ 生物熒光探針的制備及其在星形膠質細胞內化Aβ 中的應用40-69
• 2.1 引言40-41
• 2.2 實驗部分41-49
• 2.2.1 實驗材料與試劑41
• 2.2.2 實驗儀器41-49
• 2.3 結果與討論49-67
• 2.3.1 量子點作為淀粉肽研究工具的可行性探索49-53
• 2.3.2 多方法制備量子點標記Aβ 的生物熒光探針53-63
• 2.3.3 神經膠質細胞對QDs-Aβ 的吞噬63-67
• 2.4 小結67-69
• 第3章 γ-Fe_2O_3納米磁球免疫探針的構建及其對循環(huán)腫瘤細胞捕獲方法的建立69-85
• 3.1 引言69
• 3.2 實驗部分69-74
• 3.2.1 實驗材料、試劑與儀器69
• 3.2.2 實驗儀器69-70
• 3.2.3 實驗方法70-74
• 3.3 實驗結果與討論74-83
• 3.3.1 羧基納米磁球濃度標準曲線的建立及其磁回收效率-時間曲線檢測74-75
• 3.3.2 羧基納米磁球表面的EpCAM抗體功能化75-77
• 3.3.3 免疫磁球（IMNs）對乳腺癌細胞的特異性識別77-79
• 3.3.4 免疫磁球對乳腺癌細胞的高效特異性捕獲79-83
• 3.4 小結83-85
• 第4章 量子點免疫熒光探針的構建及基于磁富集和熒光信號放大的CTCS檢測新方法85-112
• 4.1 引言85
• 4.2 實驗部分85-92
• 4.2.1 實驗材料與試劑耗材85-86
• 4.2.2 實驗儀器86-87
• 4.2.3 實驗方法87-92
• 4.3 結果與討論92-110
• 4.3.1 基于點擊化學的量子點免疫熒光探針的構建及其對CTCs的識別與標記92-103
• 4.3.2 鋅離子特異性染料對ZnSe/ZnS量子點的熒光放大檢測103-109
• 4.3.3 免疫磁富集聯(lián)合Zn2+熒光放大檢測CTCs方法的建立109-110
• 4.4 小結110-112
• 結論112-113
• 參考文獻113-126
• 攻讀學位期間發(fā)表論文與研究成果清單126-127
• 致謝127

【共引文獻】

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本文編號：901558