本文關(guān)鍵詞：巨細(xì)胞病毒逃逸體液免疫新機(jī)制—通過UL16介導(dǎo)將轉(zhuǎn)運(yùn)和保護(hù)IgG的受體FcRn在胞內(nèi)滯留

  更多相關(guān)文章： 新生兒Fc受體 巨細(xì)胞病毒 糖蛋白UL16 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) IgG 兔腸相關(guān)淋巴組織 活體腸袢結(jié)扎接種

【摘要】：巨細(xì)胞病毒(CMV)為皰疹病毒科的p皰疹病毒屬。人巨細(xì)胞病毒(HCMV)是引起世界范圍內(nèi)人類先天性感染的重要病毒之一,也是造成新生兒缺陷的首要因素,還會(huì)引起器官移植接受體的發(fā)病和死亡。近期有研究顯示人巨細(xì)胞病毒(HCMV)可以通過干擾MHC I和MHC I相關(guān)分子的形成逃避CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的殺傷作用。然而,對(duì)于HCMV能否逃避體液免疫還鮮有報(bào)道。新生兒Fc受體(FcRn)是IgG的Fc端受體,結(jié)構(gòu)與MHC I分子相似。FcRn可以在整個(gè)生命過程中,在極化的上皮細(xì)胞兩端轉(zhuǎn)運(yùn)回收IgG,保護(hù)IgG不被分解從而延長(zhǎng)IgG在血漿中的半衰期。因?yàn)镠CMV可以感染上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞,FcRn恰巧也在這些部位表達(dá)。所以HCMV可能會(huì)通過一定的方式干擾FcRn的結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)運(yùn)和功能。我們通過篩選HCMV 蛋白,發(fā)現(xiàn)了病毒糖蛋白UL16可以綁定FcRn,用同時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)了FcRn和UL16兩種蛋白的HeLa細(xì)胞的溶解產(chǎn)物進(jìn)行免疫共沉淀試驗(yàn)確證了這種綁定作用。而且,UL16和FcRn可以在感染了野生型病毒的Caco-2細(xì)胞中共定位,但在UL16敲除病毒感染后卻不能。轉(zhuǎn)染FcRn重鏈的β2m靜默細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示,UL16和FcRn在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的綁定發(fā)生在FcRn與β2m結(jié)合之前。激光共聚焦顯微鏡和內(nèi)切酶消化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)UL16選擇性地將FcRn禁錮在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,并影響FcRn在內(nèi)體中積聚,而酸性的內(nèi)體對(duì)IgG和FcRn的綁定是必須的。HCMV感染或UL16單獨(dú)作用都可以明顯減弱IgG在Caco-2單層腸道上皮細(xì)胞中的轉(zhuǎn)胞吞作用。因?yàn)楸狙芯恐邪l(fā)現(xiàn)FcRn的表達(dá)量與具有支撐HCMV復(fù)制能力的細(xì)胞數(shù)量相一致,所以,我們認(rèn)為本研究結(jié)果首次顯示了在感染細(xì)胞或組織中,HCMV可能是通過抑制FcRn與IgG的結(jié)合而阻礙IgG的轉(zhuǎn)胞吞作用,并提高IgG的分解代謝作用的。因此,本研究揭示了HCMV對(duì)抗體液免疫的免疫逃逸的一種新機(jī)制。綜上所述,本研究結(jié)果表明HCMV跨膜糖蛋白UL16可以通過與FcRn相互作用抑制其在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn),導(dǎo)致IgG胞吞作用降低,而且縮短IgG的半衰期；UL16可能有助于HCMV逃逸細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng)及體液免疫。本研究首次證實(shí)了UL16、FcRn及IgG在HCMV感染過程中的相互作用,HCMV可能是通過UL16綁定FcRn以減少或阻礙IgG的結(jié)合機(jī)制,而逃逸機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫的。兔活體腸袢結(jié)扎試驗(yàn)證實(shí)HCMV可以引起結(jié)扎腸袢的黏膜損傷,此兔動(dòng)物模型可以用于HCMV發(fā)病機(jī)制的研究。
【關(guān)鍵詞】：新生兒Fc受體 巨細(xì)胞病毒 糖蛋白UL16 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) IgG 兔腸相關(guān)淋巴組織 活體腸袢結(jié)扎接種
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-14
• 縮略詞一覽表14-16
• 第一章 文獻(xiàn)綜述16-35
• 1. 病毒的免疫逃逸(Viral Immune Evasion)研究進(jìn)展16-23
• 1.1 機(jī)體的免疫系統(tǒng)概述16-17
• 1.2 抗原遞呈17-18
• 1.3 病原逃避MHC Ⅰ抗原遞呈的方式18-21
• 1.4 病原逃避MHC Ⅱ的抗原遞呈21
• 1.5 病原逃避免疫的其他機(jī)制21-22
• 1.6 病原對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制22-23
• 2. 新生兒Fc受體(FcRn)的研究進(jìn)展23-28
• 2.1 FcRn的簡(jiǎn)介23-25
• 2.2 FcRn的表達(dá)和功能25-26
• 2.3 FcRn-IgG的結(jié)構(gòu)分析26-27
• 2.4 調(diào)節(jié)FcRn,IgG之間的相互作用27
• 2.5 FcRn與其他病毒互作關(guān)系的研究27-28
• 3. 人巨細(xì)胞病毒的免疫研究進(jìn)展28-32
• 3.1 HCMV結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)介28-29
• 3.2 HCMV對(duì)先天免疫的調(diào)控29-31
• 3.3 HCMV對(duì)獲得性免疫的影響31-32
• 4. 本研究的目的和意義32-35
• 第二章 HCMV糖蛋白與FcRn的相互作用35-54
• 試驗(yàn)一 HCMV糖蛋白UL16與FcRn在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的相互作用35-45
• 1. 材料與方法35-40
• 1.1 質(zhì)粒35-36
• 1.2 細(xì)胞36
• 1.3 抗體36
• 1.4 主要儀器36
• 1.5 主要試劑36
• 1.6 試驗(yàn)設(shè)計(jì)36-37
• 1.7 試劑配制37-38
• 1.8 試驗(yàn)方法38-40
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果40-45
• 2.1 FcRn和UL16在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞中共定位40-42
• 2.2 FcRn和UL16在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞中有相互作用42-43
• 2.3 FcRn和UL16的相互作用并非分子靜電效應(yīng)的驗(yàn)證試驗(yàn)43-44
• 2.4 FeRn和UL16的相互作用并非通過鈣連蛋白橋鏈接的驗(yàn)證試驗(yàn)44-45
• 3. 小結(jié)與討論45
• 試驗(yàn)二 UL16與FeRn在病毒感染的腸道細(xì)胞中的相互作用45-54
• 1. 材料與方法46-48
• 1.1 病毒和細(xì)胞46
• 1.2 引物46
• 1.3 抗體46
• 1.4 主要儀器46
• 1.5 主要試劑46
• 1.6 試驗(yàn)設(shè)計(jì)46
• 1.7 試驗(yàn)方法46-48
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果48-52
• 2.1 FcRn和UL16在HCMV感染的腸道細(xì)胞中共定位49-51
• 2.2 FcRn和UL16在HCMV感染的腸道細(xì)胞中有相互作用51-52
• 3. 小結(jié)與討論52-54
• 第三章 FcRn與HCMV UL16結(jié)合的分子機(jī)制54-77
• 試驗(yàn)一 UL16和FcRn相互作用后會(huì)影響后者的正確折疊54-59
• 1. 材料與方法54-55
• 1.1 細(xì)胞54
• 1.2 抗體54-55
• 1.3 主要儀器55
• 1.4 主要試劑55
• 1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)55
• 1.6 試驗(yàn)方法55
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果55-58
• 2.1 UL16只與未和輕鏈β2m結(jié)合的FcRn有相互作用55-57
• 2.2 在β2m缺失細(xì)胞系中,FeRn仍與UL16相互作用的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果57-58
• 3. 小結(jié)與討論58-59
• 試驗(yàn)二 FcRn與ULBPs結(jié)合UL16部位的對(duì)比59-61
• 1. 材料與方法59
• 1.1 蛋白序列資料來源59
• 1.2 氨基酸序列對(duì)齊試驗(yàn)軟件59
• 1.3 試驗(yàn)方法59
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果59-60
• 3. 小結(jié)與討論60-61
• 試驗(yàn)三 無β2m參與情況下UL16-FcRn重鏈結(jié)合體對(duì)IgG的綁定作用61-64
• 1. 材料與方法61-62
• 1.1 細(xì)胞61
• 1.2 抗體61
• 1.3 主要儀器61
• 1.4 主要試劑61-62
• 1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)62
• 1.6 試驗(yàn)方法62
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果62-63
• 2.1 FcRn與UL16結(jié)合后影響綁定IgG的功能62-63
• 3. 小結(jié)與討論63-64
• 試驗(yàn)四 FcRn和UL16結(jié)合部位探測(cè)64-69
• 1. 材料與方法64-67
• 1.1 質(zhì)粒64
• 1.2 細(xì)胞和抗體64
• 1.3 主要儀器64
• 1.4 主要試劑64
• 1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)64-65
• 1.6 試驗(yàn)方法65-67
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果67-69
• 2.1 UL16的N末端與FcRn重鏈才能有相互作用67-69
• 3. 小結(jié)與討論69
• 試驗(yàn)五 UL16與FcRn在胞內(nèi)的結(jié)合部位69-77
• 1. 材料與方法70-72
• 1.1 細(xì)胞和抗體70
• 1.2 標(biāo)記用同位素70
• 1.3 主要儀器與耗材70
• 1.4 主要試劑70
• 1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)70-71
• 1.6 試驗(yàn)方法71-72
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果72-75
• 2.1 UL16和FcRn在ER內(nèi)的相互作用觀察結(jié)果72-74
• 2.2 UL16和FcRn在ER內(nèi)共定位74-75
• 3. 小結(jié)與討論75-77
• 第四章 UL16對(duì)FcRn轉(zhuǎn)運(yùn)通路和功能的影響77-89
• 試驗(yàn)一 UL16影響FcRn進(jìn)入早期內(nèi)體77-84
• 1. 材料與方法77-78
• 1.1 病毒、細(xì)胞與抗體77
• 1.2 主要儀器77
• 1.3 主要試劑77
• 1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)77-78
• 1.5 試驗(yàn)方法78
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果78-83
• 2.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞中UL16影響FcRn進(jìn)入早期內(nèi)體78-79
• 2.2 HCMV感染的腸道細(xì)胞中UL16影響FcRn進(jìn)入早期內(nèi)體79-83
• 3. 小結(jié)與討論83-84
• 試驗(yàn)二 HCMV或UL16蛋白都能影響FcRn的功能84-89
• 1. 材料與方法84-86
• 1.1 病毒、細(xì)胞與抗體84
• 1.2 血清84
• 1.3 主要儀器及耗材84
• 1.4 主要試劑84-85
• 1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)85
• 1.6 試驗(yàn)方法85-86
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果86-88
• 2.1 HCMV感染的Caco2細(xì)胞中IgG轉(zhuǎn)胞吞作用及其定量檢測(cè)86-87
• 2.2 轉(zhuǎn)染UL16的Caco2細(xì)胞中IgG轉(zhuǎn)胞吞作用的ELISA定量檢測(cè)87-88
• 3. 小結(jié)與討論88-89
• 第五章 活體結(jié)扎兔圓小囊和盲腸蚓突接種HCMV與HEV試驗(yàn)研究89-115
• 試驗(yàn)一 活體腸袢結(jié)扎感染HCMV和HEV后圓小囊及蚓突組織中HCMV和HEV的PCR檢測(cè)89-94
• 1. 材料與方法90-92
• 1.1 材料90
• 1.2 方法90-92
• 2. 結(jié)果92-93
• 2.1 活體腸袢結(jié)扎感染圓小囊及蚓突組織中HCMV和HEV的PCR檢測(cè)結(jié)果92-93
• 2.2 Western-blot檢測(cè)病毒蛋白在感染組織中的表達(dá)93
• 3. 小結(jié)與討論93-94
• 試驗(yàn)二 活體腸袢結(jié)扎感染HCMV和HEV后圓小囊及蚓突病理學(xué)及HCMV和HEV抗原定位觀察94-110
• 1. 材料與方法94-96
• 1.1 材料94-95
• 1.2 方法95-96
• 2. 試驗(yàn)結(jié)果96-106
• 2.1. 活體結(jié)扎兔圓小囊及蚓突的組織病理學(xué)觀察結(jié)果96-99
• 2.2 活體結(jié)扎兔圓小囊及蚓突組織中HCMV和HEV ORF2抗原的免疫酶組織化學(xué)染色結(jié)果99-104
• 2.3 激光共聚焦掃描顯微鏡觀察HCMV和HEV ORF2抗原雙重免疫熒光共定位觀察結(jié)果104-106
• 3. 小結(jié)與討論106-110
• 3.1 腸相關(guān)淋巴組織的結(jié)構(gòu)及功能106-108
• 3.2 兔圓小囊的結(jié)構(gòu)及功能108-109
• 3.3 HCMV可通過兔圓小囊及蚓突感染109-110
• 試驗(yàn)三 活體腸袢結(jié)扎感染HCMV和HEV后圓小囊及蚓突黏膜IEL及IGC的定量檢測(cè)110-115
• 1. 材料與方法110
• 1.1. 材料110
• 1.2 方法110
• 2. 結(jié)果110-113
• 2.1 活體腸袢結(jié)扎感染HCMV和HEV后圓小囊及蚓突黏膜IEL數(shù)量變化110-111
• 2.2 活體腸袢結(jié)扎感染HCMV和HEV后圓小囊及蚓突黏膜IGC數(shù)量變化111-113
• 3 小結(jié)與討論113-115
• 結(jié)論115-116
• 創(chuàng)新點(diǎn)116
• 尚需進(jìn)一步深入研究的問題116-117
• 參考文獻(xiàn)117-133
• 致謝133-134
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷134-135

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 安湘杰;RasGRP3在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病中的作用及機(jī)制的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

2 童紅飛;新型疏水性電荷誘導(dǎo)配基設(shè)計(jì)及層析分離抗體研究[D];浙江大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：869499