本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)導(dǎo)向因子netrin-1聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細胞對動脈硬化閉塞癥大鼠血管生成能力影響的研究

  更多相關(guān)文章： 間充質(zhì)干細胞 netrin-1 動脈硬化閉塞癥 血管新生 外周血

【摘要】：背景：周圍血管疾病(peripheral arterial disease, PAD)是指發(fā)生于除了心、腦血管之外的疾病,主要包括動脈狹窄和阻塞性疾病。近年來周圍血管疾病隨著高危因素的不斷升高其發(fā)病率有愈來愈高的趨勢[1]。動脈粥樣硬化可發(fā)生于全身任何動脈血管,動脈硬化閉塞癥(arteriosclerosis obliterans, ASO)只是其在肢體局部的表現(xiàn),隨著病情的進展,可使肢體出現(xiàn)相應(yīng)的缺血癥狀,影響患者的生活質(zhì)量和預(yù)后。動脈硬化閉塞癥的治療主要包括非手術(shù)治療和手術(shù)治療。雖然手術(shù)和介入治療已成為外周動脈疾病治療的首選方案,但仍有約30%的患者因為治療風(fēng)險過大而不得不放棄[2]。Asahara等人早在1997年便發(fā)現(xiàn)了一種新的促進血管生成的療法,并且拉開了干細胞治療的序幕[3]。隨著干細胞移植的深入開展,發(fā)現(xiàn)通過具有多向分化潛能的間充質(zhì)干細胞移植可以促進缺血肢體的血管新生,使缺血肢體的血供得到部分改善,從而緩解臨床癥狀[2,4-8]。雖然干細胞用手臨床治療已有超過10年的經(jīng)驗,但現(xiàn)階段也有亟需克服的困難,比如需要反復(fù)多次移植。近年來一些原本認為與血管新生無關(guān)的物質(zhì),隨著研究的深入,也被發(fā)現(xiàn)有促血管新生的功能,比如netrins蛋白家族。研究表明,netrins家族及其受體在許多非神經(jīng)組織中均有表達,比如血管,提示netrins蛋白并不只在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用[9,10]。雖然netrins能發(fā)揮促血管生成作用,但其機制目前尚未完全明確。目的：將間充質(zhì)干細胞從動脈硬化閉塞癥SD大鼠的外周血中分離出來,并在體外進行培養(yǎng),再應(yīng)用重組netrin-1蛋白聯(lián)合培養(yǎng)的外周血間充質(zhì)干細胞移植到動脈硬化性閉塞癥大鼠模型局部缺血組織,觀察局部缺血肢體的血供恢復(fù)情況。同時在體外通Transwell細胞遷移實驗和小管形成實驗來觀察netrin-1對血管的促生成作用,探討netrin-1對于動脈硬化閉塞癥可能產(chǎn)生的作用,為動脈硬化閉塞癥的非手術(shù)療法提供新的思路和理論依據(jù)。方法：在體內(nèi)研究中,將36只老年大鼠制成重度缺血的動脈硬化閉塞癥模型后,分為4組,netrin-1+干細胞組(采用netrin-1+間充質(zhì)干細胞聯(lián)合治療)、干細胞組(單獨使用間充質(zhì)干細胞治療)、netrin-1組(單獨使用netrin-1治療)和空白對照組(使用0.9%氯化鈉注射液治療)。將分離并培養(yǎng)的外周血間充質(zhì)干細胞以及netrin-1根據(jù)分組局部注射到缺血組織中。在治療后第7、14和28天分別觀察Tarlov評分、應(yīng)用的實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測定組織內(nèi)血管內(nèi)皮生長因子的表達以及應(yīng)用免疫熒光染色測定毛細血管密度。在治療第28天時,測定各組的腓腸肌平均最大等長收縮力的測定。在體外研究中,通過Transwell細胞遷移實驗來觀察不同濃度的netrin-1對間充質(zhì)干細胞遷移的影響,同時通過小管形成實驗觀察不同濃度的netrin-1對人臍靜脈內(nèi)皮細胞小管形成作用的影響。結(jié)果：在體內(nèi)研究中,治療后第7天和第14天,各組之間的Tarlov評分相比較,P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)差異。治療后第28天,netrin-1組、干細胞組、netrin-1--干細胞組的行為評分分別為3.1±0.6、3.4±0.5、4.1±0.6,均高于對照組的評分2.2±0.4,P0.01,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。干細胞組和netrin-1干細胞組的行為評分在第28天有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.024)。治療后第7、14、28天,各實驗組的血管內(nèi)皮生長因子表達均比對照組高,P0.01,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。同時Netrin-l+干細胞組在第7、14、28天的血管內(nèi)皮生長因子表達水平顯著高于nettin-1組和干細胞組的血管內(nèi)皮生長因子表達水平,P0.01,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。治療后第14、28天,各實驗組的平均毛細血管密度均比對照組高,P0.01,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。在治療后第28天,netrin-1+干細胞組的平均毛細血管密度要顯著高于干細胞組的平均毛細血管密度,P0.01,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。同時,netrin-1+干細胞組的平均最大收縮力要高于干細胞組的平均最大收縮力,P=0.014,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在體外研究中,不同濃度netrin-1組的細胞遷移數(shù)量和小管形成數(shù)量要比對照組明顯增多,P0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。隨著netrin-1濃度的升高,發(fā)生遷移的間充質(zhì)干細胞數(shù)量和和小管形成數(shù)量也隨之增加。結(jié)論：Netrin-1聯(lián)合自體間充質(zhì)干細胞移植治療能夠提高單純自體間充質(zhì)干細胞移植治療的效果,聯(lián)合治療的動脈硬化閉塞癥大鼠能獲得更高的Tarlov評分,擁有更高的血管內(nèi)皮生長因子表達,通過治療,其缺血組織內(nèi)的毛細血管密度更高,而且肌力恢復(fù)的更快速。通過體外實驗觀察到,netrin-1能誘導(dǎo)趨化間充質(zhì)干細胞并能促進其血管生成過程。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細胞 netrin-1 動脈硬化閉塞癥 血管新生 外周血
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543
【目錄】：

• 縮略詞表7-8
• 目錄8-9
• 中文摘要9-11
• ABSTRACT11-12
• 引言12-17
• 第一部分 netrin-1聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細胞對動脈硬化閉塞癥大鼠的血管新生觀察17-43
• 1 前言17-20
• 2 材料和方法20-30
• 3 結(jié)果30-36
• 4 討論36-43
• 第二部分 體外觀察netrin-1對動脈硬化閉塞癥大鼠間充質(zhì)干細胞的血管新生的影響43-61
• 1 前言43-46
• 2 材料與方法46-53
• 3 結(jié)果53-58
• 4 討論58-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻62-66
• 綜述66-81
• 參考文獻77-81
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的科研論文81

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本刊編輯部;;我國首家間充質(zhì)干細胞庫在天津落成[J];中國藥業(yè);2006年07期

2 張鑫;趙桂秋;;間充質(zhì)干細胞在眼科領(lǐng)域的研究與應(yīng)用[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年06期

3 史春夢;;間充質(zhì)干細胞表述中需要注意的幾個問題[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2009年14期

4 瞿海龍;邊劍飛;張冰;王穎;周英蓮;;間充質(zhì)干細胞臨床應(yīng)用的前景與困惑[J];醫(yī)學(xué)研究與教育;2011年05期

5 郭子寬;;間充質(zhì)干細胞及其臨床應(yīng)用中的幾個問題[J];中國組織工程研究;2012年01期

6 李炳堯;武曉云;吳巖;;間充質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng):從實驗室到臨床[J];中國組織工程研究;2013年14期

7 吳實;鄧列華;;皮膚間充質(zhì)干細胞在促進皮膚愈合中的作用[J];實用皮膚病學(xué)雜志;2013年03期

8 吳清法,王立生,吳祖澤;間充質(zhì)干細胞的來源及臨床應(yīng)用[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2002年03期

9 黃定強;間充質(zhì)干細胞的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué)(耳鼻咽喉科學(xué)分冊);2003年03期

10 付文玉,路艷蒙,喬東訪,樸英杰;運用組織工程學(xué)原理構(gòu)建間充質(zhì)干細胞的三維培養(yǎng)體系[J];濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳可;王丁;韓之波;朱德林;韓忠朝;;人臍帶間充質(zhì)干細胞體外發(fā)揮免疫活性的研究[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

2 金明順;張毅;賈秀芬;周燕華;閆妍;劉慧雯;;小鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)以及多潛能分化的研究[A];中國解剖學(xué)會第十一屆全國組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

3 李爭艷;劉楊;翟麗麗;楊迷玲;王立峰;;間充質(zhì)干細胞在腫瘤發(fā)展過程中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

4 張彥;李尚珠;;間充質(zhì)干細胞在血管工程中的機制及應(yīng)用[A];2009全國中西醫(yī)結(jié)合周圍血管疾病學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2009年

5 石玉;戴\戎;;周期性拉應(yīng)力對間充質(zhì)干細胞分化影響的研究[A];第九屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

6 黎嬌;朱爭艷;杜智;駱瑩;王鵬;高英堂;;人臍帶間充質(zhì)干細胞分泌物對肝細胞增殖和凋亡的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第30次學(xué)術(shù)年會暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2010年

7 譚遠超;Kevin;姜紅江;黃相杰;周紀(jì)平;;間充質(zhì)干細胞在骨傷疾病治療中的應(yīng)用[A];首屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨科微創(chuàng)學(xué)術(shù)交流會暨專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2011年

8 唐佩弦;;間充質(zhì)干細胞及其臨床應(yīng)用前景[A];第三屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2003年

9 戴育成;;間充質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性和應(yīng)用[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

10 胡琳莉;王昕榮;錢坤;李舟;楊薇;朱桂金;;小鼠間充質(zhì)干細胞向子宮內(nèi)膜分化的實驗研究[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 滿學(xué)杰;天津濱海新區(qū)建最大間充質(zhì)干細胞生產(chǎn)基地[N];新華每日電訊;2008年

2 滿學(xué)杰;津昂賽打造間充質(zhì)干細胞生產(chǎn)基地[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2008年

3 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院輸血科 李忠俊 整理 吳劉佳;間充質(zhì)干細胞研究又見新方法[N];健康報;2013年

4 上海生科院 上海交大醫(yī)學(xué)院健康科學(xué)研究所 曹楷;間充質(zhì)干細胞：干細胞中的孫悟空[N];上海科技報;2014年

5 記者　陳建強;首家間充質(zhì)干細胞庫在津建成[N];光明日報;2006年

6 記者　馮國梧;細胞產(chǎn)品國家工程中心建設(shè)方案獲準(zhǔn)[N];科技日報;2007年

7 實習(xí)生 劉霞;間充質(zhì)干細胞有望用于面部整形[N];科技日報;2007年

8 本報記者 王新佳;我國“原始間充質(zhì)干細胞”注射液進入臨床研究[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2005年

9 馮國梧;全球首個臍帶間充質(zhì)干細胞庫規(guī)�；\營[N];科技日報;2008年

10 劉瑩清;全球首個臍帶間充質(zhì)干細胞庫泰達規(guī)模運營[N];北方經(jīng)濟時報;2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王皓;五指山小型豬OCT-4、SOX-2基因在骨髓間充質(zhì)與臍帶間充質(zhì)干細胞中的過表達研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

2 孔德曉;間充質(zhì)干細胞及胰島素分泌細胞治療糖尿病的臨床及應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];山東大學(xué);2015年

3 董苑;SDF-1復(fù)合PDPBB的構(gòu)建及對間充質(zhì)干細胞趨化影響的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王磊;誘導(dǎo)胎盤來源間充質(zhì)干細胞向成牙骨質(zhì)細胞分化的實驗研究[D];山東大學(xué);2015年

5 房賀;連接黏附分子A在促進MSC修復(fù)CC14肝損傷中的作用及其機制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 陳潔;間充質(zhì)干細胞外泌體對急性肺損傷小鼠的影響及相關(guān)機制的實驗研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

7 許婷;轉(zhuǎn)化生長因子β1在蟑螂過敏原誘導(dǎo)的哮喘中對間充質(zhì)干細胞募集遷移的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

8 周雅麗;攜氧間充質(zhì)干細胞對胃癌化療效果的影響及其機制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

9 沈舒寧;CKIP-1負調(diào)控間充質(zhì)干細胞成骨分化研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 姚惟琦;脂肪來源間充質(zhì)干細胞治療急性腎損傷[D];武漢大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李超;小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞中AC基因亞型的表達及AC3對其纖毛長度的影響[D];河北大學(xué);2015年

2 林濤;殼聚糖水凝膠復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細胞修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實驗研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 彭龍英;心肌營養(yǎng)素1促進人臍血間充質(zhì)干細胞神經(jīng)分化存活及PI3K/Akt信號通路機制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

4 喬曉慧;酸性環(huán)境對人臍帶間充質(zhì)干細胞的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

5 張紅霞;人臍帶間充質(zhì)干細胞的分離、鑒定及其對人肺癌細胞惡性表型的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

6 顧立超;BTK抑制劑對間充質(zhì)干細胞miR-21的調(diào)節(jié)作用[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

7 王文杰;鴨胚間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性及其移植修復(fù)肝損傷研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

8 張猛;血管內(nèi)皮前體細胞對間充質(zhì)干細胞分化潛能的影響[D];石河子大學(xué);2015年

9 馬麗媛;利用MyoD基因誘導(dǎo)綿羊臍帶間充質(zhì)干細胞分化為成肌細胞的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 宋維文;MicroRNA-133誘導(dǎo)綿羊間充質(zhì)干細胞分化為成肌細胞的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號：821831