本文關(guān)鍵詞：從桃紅芪術(shù)軟肝煎抗肝纖維化探討孫桂芝教授防治肝癌經(jīng)驗(yàn)內(nèi)涵

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【摘要】：孫桂芝教授是著名的中西醫(yī)結(jié)合腫瘤專家,從事臨床腫瘤防治工作近60年,診治中晚期腫瘤患者幾十萬人,尤以治療消化道腫瘤而著稱,運(yùn)用“治未病”思想治療肝纖維化/肝硬化、防治肝癌積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)。肝癌死亡率位居我國腫瘤死亡率第3位,并且肝癌發(fā)展迅速,患者生存期較短。我國是乙肝大國,“肝炎-肝纖維化/肝硬化-肝癌”是肝癌發(fā)展的3部曲,研究發(fā)現(xiàn)80%肝癌患者發(fā)病于肝纖維化,結(jié)合祖國醫(yī)學(xué)“治未病”思想,孫桂芝教授認(rèn)為對(duì)于肝癌的防治應(yīng)當(dāng)以防為主,防治結(jié)合,具體表現(xiàn)為：“未病先防”即防治肝纖維化/肝硬化：“既病防變”即積極治療肝纖維化/肝硬化,防止向肝癌進(jìn)展；“治病于初”,即積極治療肝纖維化/早期肝硬化。本課題通過總結(jié)孫桂芝教授臨床治療肝纖維化/肝硬化經(jīng)驗(yàn),選取具有肝纖維化/肝硬化病史的原發(fā)性肝癌35例進(jìn)行前瞻性臨床研究,采用“無尺度網(wǎng)絡(luò)”和主題模型技術(shù)進(jìn)行挖掘分析,對(duì)孫桂芝老師治療肝纖維化防治肝癌臨床辨證施治特點(diǎn)及遣方用藥規(guī)律進(jìn)行深度解析,在此基礎(chǔ)上,采用體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合方法,對(duì)孫桂芝治療肝纖維化防治肝癌經(jīng)驗(yàn)方“桃紅芪術(shù)軟肝煎”從阻斷肝纖維化生成、TGF-β /Smad信號(hào)通路調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)研究,從一個(gè)側(cè)面闡釋孫桂芝老師學(xué)術(shù)思想的科學(xué)內(nèi)涵。論文主要內(nèi)容分為三部分：第一部分：對(duì)孫桂芝教授辨治肝纖維化/肝硬化,防治肝癌的學(xué)術(shù)思想及診療特點(diǎn)進(jìn)行理論挖掘。從肝纖維化古今文獻(xiàn)挖掘和臨床跟師學(xué)習(xí),深入領(lǐng)會(huì)孫桂芝老師治療肝纖維化/肝硬化,防治肝癌的學(xué)術(shù)思想。1.基于孫桂芝老師的“未病先防”思想從“益氣活血,軟堅(jiān)散結(jié)”“補(bǔ)益脾胃”治療肝纖維化。2.孫桂芝老師認(rèn)為肝癌的治療應(yīng)當(dāng)以“益氣活血軟堅(jiān)解毒”為治療大法,常用黃芪建中湯、藤虎湯、活血利水方等治療。第二部分 臨床研究：對(duì)孫桂芝教授臨床抗肝纖維化防治肝癌診療特點(diǎn)進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘和療效分析。分析35例既往有肝硬化/肝纖維化病史的原發(fā)性肝癌患者的臨床信息,進(jìn)行前瞻性分析,采用“無尺度網(wǎng)絡(luò)”和主題模型技術(shù)挖掘,對(duì)孫桂芝老師臨床辯治特點(diǎn)、遣方用藥規(guī)律等進(jìn)行進(jìn)深入研究。1.臨床療效：患者客觀療效治療后穩(wěn)定率高于治療前：乏力、神疲懶言、皮膚瘙癢、口干口苦、腹脹痛、急躁易怒、太息、脅痛、水腫等癥狀均有好轉(zhuǎn)；谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、甲胎蛋白均下降；白蛋白較治療前上升；紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板均較治療前升高；生命質(zhì)量評(píng)分有明顯提高。2.數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果：在孫桂芝師診治的35例肝癌伴肝纖維化／肝硬化的患者中,總結(jié)出位居前4位的證候-“核心證候”,同時(shí),根據(jù)藥物節(jié)點(diǎn)、緊密度及使用頻次,總結(jié)出對(duì)應(yīng)4個(gè)核心證候的4個(gè)“核心方劑”,其中,“氣滯血瘀核心方劑”對(duì)應(yīng)藥物為：醋山甲、醋鱉甲、白芍、玫瑰花、綠鄂梅、陳皮、水紅花子、地龍等�！岸拘扒忠u核心方劑”對(duì)應(yīng)藥物為：虎杖、藤梨根、白花蛇舌草、重樓、土茯苓�！把龀煞e核心方劑”對(duì)應(yīng)藥物為：醋鱉甲、醋山甲、虎杖、水紅花子、地龍、桃仁、雞內(nèi)金、莪術(shù)等�！捌⒛I不足核心方劑”對(duì)應(yīng)藥物為：黃芪、白芍、太子參、制何首烏、枸杞子、女貞子等。根據(jù)主題模型的研究,得出證候與中藥對(duì)應(yīng)的概率值較高的5組主題,分別是：心脾兩虛證：多用太子參、當(dāng)歸、土茯苓、遠(yuǎn)志、麩炒白術(shù)等藥物；毒邪侵襲證：常加用虎杖、重樓、醋龜甲等藥物；氣滯血郁證多用桃仁、地龍、醋鱉甲、蜈蚣等藥物；血瘀成積證多用炮山甲、醋鱉甲等藥物；脾腎不足證多用黃芪、制何首烏、白芍等藥物；脾虛水停證常用生白術(shù)、豬苓、黃芪等藥物。根據(jù)臨床研究及數(shù)據(jù)挖掘技術(shù),將數(shù)據(jù)結(jié)果與孫桂芝老師通過提交紙質(zhì)文檔、訪談探討、審閱修改等方式,總結(jié)出孫桂芝老師治療肝癌伴肝纖維化／肝硬化的經(jīng)驗(yàn)方藥,主要藥物包括：生黃芪、炒白術(shù)、太子參、桃仁、莪術(shù)等藥物。全方有健脾益氣、活血化瘀、軟堅(jiān)消瘤之意,體現(xiàn)孫桂芝老師扶正培本、益氣活血、軟堅(jiān)散結(jié)的臨證診治思路。第三部分體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證：揭示孫桂芝教授辨治肝纖維化臨床療效的分子機(jī)制,闡釋孫桂芝經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)內(nèi)涵。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)擬采用50%CCL4橄欖油溶液腹腔注射Wistar大鼠制備肝纖維化大鼠模型,制備肝纖維化模型,造模同時(shí)使用“桃紅芪術(shù)軟肝煎”低、中、高劑量干預(yù)治療,并與和秋水仙堿、扶正化瘀膠囊進(jìn)行對(duì)照觀察。于造模給藥3、6、9周3個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行阻斷肝纖維化進(jìn)展的動(dòng)態(tài)觀察,和與TGF-β/Smad言號(hào)通路調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化直接相關(guān)指標(biāo)的免疫組化蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)選擇Hep-G2作為低分化的肝臟干細(xì)胞,體外加人重組TGF-β蛋白干預(yù),造體外肝纖維化模型,用“桃紅芪術(shù)軟肝煎”含藥血清體外干預(yù),免疫熒光法和Western Blot方法檢測(cè)桃紅芪術(shù)軟肝煎對(duì)Hep-G2細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)量的影響。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合,探討“桃紅芪術(shù)軟肝煎”治療肝纖維化的療效與機(jī)制,為闡釋孫桂芝老師臨床經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)內(nèi)涵提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)療效分析：1.1藥物干預(yù)治療后,不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)大鼠肝纖維化程度比較第3、6、9周的大鼠肝臟HE染色及Masson染色提示：第3周大鼠肝臟組織發(fā)生部分纖維化,桃紅芪術(shù)中劑量組及高劑量組改善最為明顯；第6周模型組大鼠肝臟組織形成假小葉,提示造模成功,桃紅芪術(shù)軟肝煎及扶正化瘀膠囊、秋水仙堿對(duì)于大鼠肝纖維化均具有明顯的緩解作用,桃紅芪術(shù)高劑量組改善較其他組顯著；第9周各組大鼠肝臟組織均形成假小葉,桃紅芪術(shù)中劑量組及高劑量組肝組織結(jié)構(gòu)改善最為明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,隨著造模給藥時(shí)間的延長,各給藥組均有阻斷模型大鼠肝組織纖維化進(jìn)展的功效。與模型對(duì)照組比,第9周時(shí)桃紅芪術(shù)高劑量組作用最為明顯。1.2不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)大鼠肝組織免疫組化蛋白表達(dá)結(jié)果。第3、6、9周的大鼠肝臟免疫組化染色病理圖片提示：與空白組相比較,模型組E-cadherin較空白組表達(dá)減弱,而TGF-β1、Vimentin、Smad2的表達(dá)較空白組表達(dá)增強(qiáng),提示大鼠肝臟組織持續(xù)發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,說明大鼠肝臟纖維化可能是通過發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)發(fā)形成的；與模型對(duì)照組比,桃紅芪術(shù)軟肝煎可上調(diào)E-cadherin,下調(diào)TGF-β1及Vimentin.Smad2蛋白表達(dá),提示桃紅芪術(shù)軟肝煎可能通過調(diào)節(jié)TGF-β/Smad信號(hào)通路,降低Smad2蛋白表達(dá),從而下調(diào)TGF-β1,上調(diào)E-cadherin,下調(diào)Vimentin表達(dá),發(fā)揮改善上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,治療肝纖維化的作用,其中以桃紅芪術(shù)軟肝煎中劑量組及高劑量組效果最為顯著。1.3熒光定量PCR檢測(cè)肝組織E-cadherin、TGF-β1、Vimentin、Smad2 mRNA表達(dá)：第3、6、9周大鼠肝臟組織mRNA表達(dá)說明：與空白組相比,模型組E-cadherin mRNA表達(dá)量下降,TGF-β1mRNA、Smad2 mRNA、Vimentin mRNA表達(dá)量上升,提示肝纖維化形成過程中,大鼠肝臟組織持續(xù)發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,可能是通過TGF-β/Smad信號(hào)調(diào)節(jié)發(fā)生的：與模型對(duì)照組比,桃紅芪術(shù)軟肝煎可上調(diào)E-cadherinmRNA,下調(diào)TGF-β1mRNA及Vimentin mRNA表達(dá)、Smad2 mRNA表達(dá),桃紅芪術(shù)軟肝煎各劑量組均有較好的療效提示桃紅芪術(shù)軟肝煎可能通過調(diào)節(jié)TGF-β/Smad信號(hào)通路,影響調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT),發(fā)揮治療肝纖維化作用。2.體外實(shí)驗(yàn)研究體外研究Hep-G2細(xì)胞,使用Recombinant Human TGF-β1誘導(dǎo)制作肝纖維化體外模型,從免疫熒光和Western Blot研究探討桃紅芪術(shù)軟肝煎抗肝纖維化的分子機(jī)制。2.1免疫熒光結(jié)果顯示：與空白組比較,模型組細(xì)胞E-cadherin表達(dá)減弱,Smad2、TGF-βR1、Vimentin表達(dá)增強(qiáng)；與模型組比,用藥組可以上調(diào)E-cadherin表達(dá),下調(diào)Smad2、TGF-βR1、 Vimentin表達(dá),說明桃紅芪術(shù)軟肝煎低劑量組、桃紅芪術(shù)軟肝煎中劑量組、桃紅芪術(shù)高劑量組及扶正化瘀膠囊組、秋水仙堿組均具有較好療效。2.2 Western Blot蛋白定量分析顯示：與空白組比較,模型組E-cadherin表達(dá)下降,Vimentin、TGF-βR1表達(dá)上升,說明體外肝纖維化細(xì)胞模型造模成功,并且Smad2表達(dá)增強(qiáng),促進(jìn)TGF-βR1表達(dá)增強(qiáng),從而促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化；與模型組相比,桃紅芪術(shù)低、中、高劑量組可以上調(diào)E-cadherin表達(dá),下調(diào)Vimentin、TGF-βR1、Smad2表達(dá),其中以桃紅芪術(shù)軟肝煎中劑量和高劑量組療效最好,扶正化瘀膠囊和秋水仙堿也有相似療效。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)從阻斷肝纖維化組織病理變化,肝組織免疫組化蛋白表達(dá)、mRNA表達(dá),以及體外實(shí)驗(yàn)Hep-G2細(xì)胞免疫熒光和Western Blot研究,均取得了比較一致的結(jié)果：經(jīng)驗(yàn)方桃紅芪術(shù)軟肝煎抗肝纖維化療效作用明顯、肯定。研究結(jié)果從一個(gè)側(cè)面闡釋了孫桂芝老師治療肝纖維化防治肝癌經(jīng)驗(yàn)的理論內(nèi)涵。本課題特色與創(chuàng)新之處：1.引入現(xiàn)代生物信息學(xué)技術(shù),采用“無尺度網(wǎng)絡(luò)”和“主題模型”技術(shù)分析對(duì)35例既往有肝纖維化／肝硬化病史的原發(fā)性肝癌,總結(jié)出“核心證候”對(duì)應(yīng)的治則治法及“核心方藥”,通過對(duì)孫桂芝老師臨床學(xué)習(xí)、提交紙質(zhì)文檔、訪談探討及審閱批改,對(duì)孫桂芝老師治療肝纖維化的辨證特點(diǎn)、病因病機(jī)、治療策略、遣方用藥特點(diǎn)進(jìn)行深層次解析,提出了孫桂芝老師治療肝纖維化運(yùn)用“益氣活血,軟堅(jiān)散結(jié)”“補(bǔ)益脾胃”辨治原則和核心方藥,為傳承挖掘名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)提供新思路。2.本研究采用大鼠肝纖維化模型和人Hep-G2細(xì)胞模型,體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合,從肝纖維化病理組織形態(tài)、E-cadherin、Vimentin、Smad2、TGF-β1、TGF-βR1免疫組化蛋白及RT-PCR測(cè)定mRNA基因表達(dá)、體外檢測(cè)中藥含藥血清干預(yù)誘導(dǎo)后E-cadherin、Vimentin、Smad2、TGF-βR1免疫熒光及Western Blot蛋白表達(dá)等,通過對(duì)經(jīng)驗(yàn)方-“桃紅芪術(shù)軟肝煎”抗肝纖維化進(jìn)行機(jī)制研究,探討了名老中醫(yī)治療肝纖維化防治肝癌臨床經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)性和理論的內(nèi)涵,未見同類報(bào)道。
【關(guān)鍵詞】：孫桂芝經(jīng)驗(yàn) 肝纖維化治療 桃紅芪術(shù)軟肝煎 機(jī)制 治未病 TGF-β/Smad信號(hào)通路 上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R249;R273
【目錄】：

• 中文摘要8-13
• ABSTRACT13-22
• 英文縮略詞表22-24
• 前言24-26
• 第一部分 理論研究26-47
• 1. 西醫(yī)研究進(jìn)展26-30
• 1.1 關(guān)于EMT26-27
• 1.1.1 EMT定義26
• 1.1.2 EMT分類26-27
• 1.1.3 EMT的特征27
• 1.1.4 EMT的過程27
• 1.2 EMT與肝纖維化27-29
• 1.2.1 EMT與肝纖維化體內(nèi)研究28
• 1.2.2 EMT與肝纖維化體外研究28-29
• 1.3 肝源EMT相關(guān)信號(hào)通路29-30
• 1.3.1 TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路29-30
• 1.3.1.1 TGF-β/Smad信號(hào)通路介導(dǎo)EMT29-30
• 1.3.1.2 Non-Smad信號(hào)通路30
• 2. 肝纖維化中醫(yī)認(rèn)識(shí)30-40
• 2.1 古代文獻(xiàn)溯源30-32
• 2.1.1 中醫(yī)病名30-31
• 2.1.2 病因病機(jī)分析31
• 2.1.3 治法論述31-32
• 2.2 現(xiàn)代認(rèn)識(shí)32-34
• 2.2.1 辨證論治32-33
• 2.2.2 相關(guān)研究33-34
• 參考文獻(xiàn)34-40
• 3. 孫桂芝教授治療肝纖維化理論研究40-43
• 3.1 肝纖維化定義40
• 3.2 肝纖維化病因病機(jī)40
• 3.3 肝纖維化辨證論治40-42
• 3.3.1 未病先防41
• 3.3.2 重視脾胃41-42
• 3.4 經(jīng)典醫(yī)案42-43
• 4. 孫桂芝治療肝癌理論研究43-46
• 4.1 肝癌病因病機(jī)43
• 4.2 肝癌治則治法43-44
• 4.3 肝癌常用方劑44-45
• 4.3.1 黃芪建中湯44
• 4.3.2 健脾益腎方44
• 4.3.3 柴胡疏肝散44-45
• 4.3.4 活血利水方45
• 4.3.5 藤虎湯45
• 4.3.6 軟肝煎45
• 4.4 靶向用藥理論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-47
• 第二部分 臨床研究47-70
• 1. 臨床診療及入組方案47-48
• 1.1 研究對(duì)象47
• 1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)47
• 1.3 入選與排除標(biāo)準(zhǔn)；47-48
• 1.4 研究方法48
• 2. 療效評(píng)價(jià)方法48
• 2.1 癥狀評(píng)價(jià)48
• 2.2 生化指標(biāo)評(píng)價(jià)48
• 2.3 生命質(zhì)量評(píng)價(jià)48
• 3. 數(shù)據(jù)挖掘方法48-49
• 4. 統(tǒng)計(jì)方法49
• 5. 臨床研究結(jié)果49-67
• 5.1 臨床一般資料情況49-51
• 5.2 患者治療前后療效評(píng)價(jià)51-53
• 5.3 數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果53-67
• 5.4 總結(jié)經(jīng)驗(yàn)方67
• 6. 討論67-68
• 參考文獻(xiàn)68-70
• 第三部分 桃紅芪術(shù)軟肝煎治療肝纖維化實(shí)驗(yàn)研究70-162
• 第一章 桃紅芪術(shù)軟肝煎治療肝纖維化體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究70-128
• 1. 桃紅芪術(shù)軟肝煎對(duì)肝纖維化療效觀察70-89
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料70-72
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物70
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑70-71
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)藥物71-72
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器72
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)耗材72
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法72-76
• 1.2.1 動(dòng)物分組及造模72-73
• 1.2.2 試劑及藥物配制73
• 1.2.3 造模方法73-74
• 1.2.4 給藥方法74
• 1.2.5 取材方法74
• 1.2.6 肝、脾指數(shù)計(jì)算74
• 1.2.7 肝臟病理切片制作74-76
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果76-89
• 1.3.1 肝纖維化大鼠一般情況觀察76-77
• 1.3.2 肝纖維化大鼠體重77-79
• 1.3.3 肝纖維化大鼠肝、脾指數(shù)79-83
• 1.3.4 肝纖維化大鼠肝纖維化程度比較83-89
• 1.3.4.1 第3周83-85
• 1.3.4.2 第6周85-87
• 1.3.4.3 第9周87-89
• 2. 桃紅芪術(shù)軟肝煎通過TGF-β/Smad信號(hào)通路調(diào)節(jié)EMT機(jī)制研究89-123
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料89-90
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物89
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑89-90
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)藥物90
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器90
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)耗材90
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法90-95
• 2.2.1 動(dòng)物分組及造模90
• 2.2.2 試劑及藥物配制90-91
• 2.2.3 造模方式91
• 2.2.4 給藥方式91
• 2.2.5 取材方式91
• 2.2.6 病理切片制作91
• 2.2.7 免疫組織化學(xué)檢測(cè)方法91-92
• 2.2.8 肝纖維化大鼠RT-PCR指標(biāo)檢測(cè)方法92-95
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果95-123
• 2.3.1 免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果95-109
• 2.3.1.1 第3周95-100
• 2.3.1.2 第6周100-104
• 2.3.1.3 第9周104-109
• 2.3.2 RT-PCR檢測(cè)相關(guān)基因結(jié)果109-123
• 2.3.2.1 第3周mRNA表達(dá)情況109-113
• 2.3.2.2 第6周mRNA表達(dá)情況113-119
• 2.3.2.3 第9周mRNA表達(dá)情況119-123
• 3. 討論123-126
• 4. 參考文獻(xiàn)126-128
• 第二章 桃紅芪術(shù)軟肝煎治療肝纖維化體外實(shí)驗(yàn)研究128-162
• 1. 桃紅芪術(shù)軟肝煎含藥血清的制備128-131
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料128-129
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物128
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物128
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑128-129
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器129
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)耗材129
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法129-131
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組129
• 1.2.2 配制藥物129-130
• 1.2.3 給藥方式130
• 1.2.4 取血方式130
• 1.2.5 離心130
• 1.2.6 保存130
• 1.2.7 結(jié)果130-131
• 2. 桃紅芪術(shù)軟肝煎對(duì)Hep-G2細(xì)胞形態(tài)的影響131-139
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料131-132
• 2.1.1 細(xì)胞株131
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物131
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑131
• 2.1.4 主要試劑耗材131
• 2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器131-132
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法132-134
• 2.2.1 Hep-G2細(xì)胞培養(yǎng)與傳代132-133
• 2.2.2 Hep-G2細(xì)胞體外模型建立133-134
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果134-139
• 2.3.1 細(xì)胞誘導(dǎo)前后甲胎蛋白變化134-135
• 2.3.2 轉(zhuǎn)氨酶變化135-137
• 2.3.3 形態(tài)變化137-139
• 3. 桃紅芪術(shù)軟肝煎對(duì)Hep-G2細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響139-149
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料139-140
• 3.1.1 細(xì)胞株139
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物139
• 3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑139-140
• 3.1.4 主要試劑耗材140
• 3.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器140
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法140-141
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果141-149
• 4. 桃紅芪術(shù)軟肝煎對(duì)Hep-G2細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)量的影響149-156
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料149-151
• 4.1.1 細(xì)胞株149
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物149
• 4.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑149-150
• 4.1.4 主要試劑耗材150
• 4.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器150-151
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法151-156
• 4.2.1 Hep-G2細(xì)胞培養(yǎng)與傳代同2.2.1151
• 4.2.2 細(xì)胞肝纖維化模型誘導(dǎo)、實(shí)驗(yàn)分組同2.2.1.4151
• 4.2.3 細(xì)胞總蛋白的提取151
• 4.2.4 BCA法測(cè)定細(xì)胞蛋白濃度151-152
• 4.2.5 蛋白濃度調(diào)整152
• 4.2.6 Western blot實(shí)驗(yàn)152-156
• 5. 討論156-159
• 參考文獻(xiàn)159-162
• 全文總結(jié)162-164
• 參考文獻(xiàn)163-164
• 本研究創(chuàng)新點(diǎn)164-165
• 存在問題及進(jìn)一步研究方向165-166
• 致謝166-168
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷168-171
• 附件171-187

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉翔;;江一平治療慢性肝炎肝纖維化經(jīng)驗(yàn)[J];江西中醫(yī)藥;2007年04期

2 張貴陽;楊衛(wèi)平;陳皓;;肝硬化動(dòng)物模型構(gòu)建的研究進(jìn)展[J];外科理論與實(shí)踐;2008年03期

3 華忠;李q詮，

本文編號(hào)：795831