發(fā)布時(shí)間：2017-08-31 19:29

  本文關(guān)鍵詞：TLR5靶向同種移植物放射性實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)及自噬在同種排斥中的調(diào)節(jié)機(jī)制

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【摘要】：研究目的：迄今為止,器官移植仍是挽救終末期臟器功能衰竭而又缺乏有效替代療法患者生命的唯一手段。隨著免疫抑制療法的不斷改善和廣泛應(yīng)用,術(shù)后移植物的短期存活率得到明顯提高。然而,持續(xù)的免疫損傷和長(zhǎng)期應(yīng)用免疫抑制劑產(chǎn)生的毒副作用仍然嚴(yán)重影響著移植物的長(zhǎng)期存活和受體患者生活質(zhì)量。因此術(shù)后對(duì)移植物耐受狀態(tài)的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)和機(jī)體免疫耐受新的調(diào)節(jié)機(jī)制的進(jìn)一步探索闡明對(duì)移植排斥反應(yīng)早期診斷和治療方案的及時(shí)調(diào)整都具有重要意義。目前,除了活檢以外,移植物狀態(tài)的無(wú)創(chuàng)性檢測(cè)方法大多依賴與對(duì)急性排斥反應(yīng)的生物學(xué)特征或者炎癥反應(yīng)的早期檢測(cè)。然而,移植術(shù)后臨床上免疫抑制劑的廣泛使用,使急性排斥反應(yīng)的監(jiān)測(cè)受到了嚴(yán)重影響,如18F-FDG(18氟標(biāo)記的氟代脫氧葡萄糖)的PET/CT檢查。18F-FDG是一種在正電子發(fā)射斷層掃描成像常用的放射性藥物,近年來(lái)它被應(yīng)用于移植術(shù)后移植物排斥的檢測(cè)和評(píng)價(jià)免疫抑制劑的療效。當(dāng)發(fā)生急性排斥反應(yīng)時(shí),移植物對(duì)18F-FDG的攝取明顯升高,然而這種PET圖像上的強(qiáng)信號(hào)卻因?yàn)槊庖咭种苿┑氖褂枚艿絿?yán)重影響,有可能誤導(dǎo)臨床判斷。研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)用了免疫抑制劑后,模型動(dòng)物的移植物對(duì)18F-FDG的攝取均很低,表明18F-FDG可用來(lái)評(píng)價(jià)免疫制劑的療效,但是對(duì)評(píng)估移植物存活的長(zhǎng)期檢測(cè)卻并不適用。由于誘導(dǎo)和維持供體特異性的免疫耐受是器官移植后的首要目標(biāo),因此探討發(fā)現(xiàn)高靈敏高特異的的與移植物耐受狀態(tài)相關(guān)的標(biāo)志物對(duì)臨床器官移植后的預(yù)后判斷和及治療措施調(diào)整十分重要。TLR樣受體(Toll-like Receptor)家族是一種表達(dá)在白細(xì)胞和固有免疫細(xì)胞中的模式識(shí)別受體(PRR, pattern recognition receptor),不僅在天然免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,而且還調(diào)節(jié)獲得性免疫。近期研究表明,TLR5很可能是一個(gè)潛在的具有免疫調(diào)節(jié)功能靶點(diǎn)。TLR5識(shí)別細(xì)菌表達(dá)的鞭毛蛋白,通過(guò)MyD88的級(jí)聯(lián)信號(hào)作用激活NF-κB。研究證明,TLR5在CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cell, Treg)高表達(dá)并且與之免疫抑制能力有潛在的聯(lián)系。鞭毛蛋白通過(guò)活化TLR5信號(hào)同路能夠減輕在異基因造血干細(xì)胞移植引起的急性移植物抗宿主病(acute Graft-versus-host disease, aGVHD)。我們實(shí)驗(yàn)室的前期研究結(jié)果顯示在同種異體移植模型中,免疫抑制劑雷帕霉素的使用可以上調(diào)移植物TLR5和Foxp3 (Forkhead transcription factors 3,叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子3)的表達(dá)。繼而又證實(shí)在同種異體移植模型中應(yīng)用基因重組表達(dá)的鞭毛蛋白rFlic可以擴(kuò)增受體CD4+CD25+Treg細(xì)胞的比例、上調(diào)Foxp3的表達(dá)、增強(qiáng)其抑制功能,從而達(dá)到協(xié)同誘導(dǎo)免疫耐受的作用。因此,我們提出科學(xué)假設(shè)：TLR5的表達(dá)有可能與雷帕霉素誘導(dǎo)的移植物耐受相關(guān)并且參與對(duì)移植耐受分子機(jī)制的調(diào)節(jié)。在研究過(guò)程中,我們發(fā)現(xiàn)自噬與TLR5和雷帕霉素均相關(guān)。自噬是一種細(xì)胞內(nèi)的分解代謝過(guò)程,參與胞質(zhì)內(nèi)蛋白和細(xì)胞器的降解與更新。它既調(diào)節(jié)固有免疫應(yīng)答,也參與調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn),自噬在中央耐受和外周耐受中更是起了十分關(guān)鍵的作用。在基因敲除Beclinl基因后的CD4+T細(xì)胞,缺少了自噬,在TCR刺激后,與細(xì)胞死亡相關(guān)蛋白(如procaspase-3, procaspase-8和Bim)的表達(dá)升高,更易發(fā)生凋亡。然而自噬是否在同種移植排斥過(guò)程中的發(fā)生變化,有何作用,目前仍不明確。綜上所述,本論文分為三部分對(duì)TLR5與Autophagy在同種移植耐受的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)顯像和分子調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)的深入研究。1、選擇免疫抑制劑雷帕霉素誘導(dǎo)的小鼠同種移植模型,以TLR5為靶點(diǎn),制備放射性核素131-I標(biāo)記的抗TLR5單克隆抗體為分子顯像劑,通過(guò)體內(nèi)注射,對(duì)移植排斥模型進(jìn)行動(dòng)態(tài)對(duì)比監(jiān)測(cè),為無(wú)創(chuàng)性移植耐受后的移植物實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)探索新的途徑;2、在同種移植模型中,通過(guò)與非特異性顯像劑18F-FDG和同種型IgG進(jìn)行對(duì)比,評(píng)價(jià)TLR5作為特異性耐受顯像劑在雷帕霉素使用后對(duì)移植物的顯像價(jià)值；3、對(duì)比研究自噬在同種移植模型移植排斥過(guò)程中變化及意義,初步探討其影響同種移植排斥的可能的分子機(jī)制。第一部分 靶向TLR5的放射性核素標(biāo)記抗體對(duì)雷帕霉素治療的同種移植物動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)研究方法1、小鼠同種移植模型的建立以C57BL/6小鼠為供體,將其背部全厚度皮膚移植到受體BALB/c小鼠,建立同種移植排斥模型；分為對(duì)照組和雷帕霉素處理組,處理組在移植術(shù)后每日腹腔注射雷帕霉素1.5mg/Kg直至對(duì)照組移植皮膚完全被排斥,對(duì)照組術(shù)后每日腹腔注射等量的PBS(phosphate buffered saline)。2、131I標(biāo)記的放射性示蹤劑的制備和體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)Iogogen法制備并純化131Ⅰ-anti TLR5 mAb。分別將131Ⅰ-anti TLR5 mAb置于小鼠血清和生理鹽水中,37℃水浴,0h,12 h,24 h,48 h,72 h和96h分別檢測(cè)標(biāo)記物體外穩(wěn)定性。通過(guò)BALB/c小鼠脾細(xì)胞的單位點(diǎn)放射性配體與受體結(jié)合分析檢測(cè)131Ⅰ-anti TLR5 mAb r Kd,, Bmax和KI值。3、131Ⅰ-anti TLR5 mAb在同種移植模型中的體內(nèi)生物學(xué)分布研究在移植術(shù)后第7天向2組實(shí)驗(yàn)小鼠尾靜脈分別注射131Ⅰ-anti TLR5 mAb(0.37MBq/只),在注射后1h,12h,24 h,48 h和72 h,分別各取5只小鼠,脫頸椎處死,收集血液、移植皮膚、對(duì)側(cè)正常皮膚以及各個(gè)器官組織,稱重,測(cè)量放射性,研究131Ⅰ-anti TLR5 mAb在模型小鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布狀況,并計(jì)算靶(移植皮膚)與非靶(對(duì)側(cè)正常皮膚)放射性分布的比值。4、131Ⅰ-anti TLR5 mAb在同種移植模型中的動(dòng)態(tài)磷屏自顯影顯像研究在移植術(shù)后第7天向兩組實(shí)驗(yàn)小鼠尾靜脈分別注射131Ⅰ-anti TLR5 mAb (0.37MBq/150 μl只),在注射后1h,12 h,24 h,48 h和72 h進(jìn)行放射性磷屏自顯影顯像,觀察131Ⅰ-anti TLR5 mAb及對(duì)照抗體在移植部位的攝取狀況。另有一組雷帕霉素治療小鼠在尾靜脈注射131Ⅰ-anti TLR5 mAb前半個(gè)小時(shí)尾靜脈注射未標(biāo)記的anti TLR5 mAb,進(jìn)行阻斷實(shí)驗(yàn),確定131Ⅰ-anti TLR5 mAb攝取的特異性。5、免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)TLR5的表達(dá)及與131Ⅰ-anti TLR5 mAb在移植皮膚部位攝取的相關(guān)性分析將注射131Ⅰ-anti TLR5 mAb的72 h兩組行放射性磷屏自顯影小鼠脫椎處死,完整取下其移植皮膚及受體移植床部分組織,福爾馬林固定并制成石蠟切片,進(jìn)行TLR5染色。分析TLR5表達(dá)與該移植皮片攝取131Ⅰ-anti TLR5 mAb的相關(guān)性。研究結(jié)果1、131Ⅰ-anti-TLR5 mAb標(biāo)記率為96.9%,比活度為458.6 MBq/mg,并且有良好的免疫學(xué)活性,Kd值為3.672 nM,最大結(jié)合量Bmax為5.388μM,半抑制濃度(IC50)和抑制常數(shù)(Ki)分別為8.89 nM和40.38 nM。131Ⅰ-anti-TLR5 mAb體外放置72 h,放射化學(xué)純度大于90%。2、體內(nèi)生物學(xué)分布結(jié)果顯示,雷帕霉素治療組,注射131Ⅰ-anti-TLR5 mAb 1 h移植皮膚的%ID/g值達(dá)到最大值,為12.05±1.86,注射后72 h, T/NT值達(dá)到最大,為8.10±0.10；而131Ⅰ-anti-TLR5 mAb雖然也在排斥對(duì)照組移植部位聚集,但是明顯低于耐受組(p0.001)。TLR5阻斷組全身組織器官放射性比活度明顯降低,移植皮片部位%ID/g降低92%,表明移植部位的131Ⅰ-anti-TLR5 mAb攝取是特異性的。3、動(dòng)態(tài)全身放射性自顯影圖像的結(jié)果與體內(nèi)生物學(xué)分布相一致,顯示在注射12h后,’31Ⅰ-anti-TLR5 mAb在雷帕霉素耐受組移植物部位明顯濃聚且明顯高于對(duì)照組,在72 h獲得移植皮膚對(duì)比度最為清晰顯像。移植部位放射性活度分別為26,448±904 DLU/mm2(雷帕霉素治療組),9176 ± 576 DLU/mm2(移植排斥組)和3881.5±62.6 DLU/mm2(阻斷組)(p0.05)。TLR5阻斷組移植皮膚放射性濃聚圖像幾乎不可見(jiàn)。4,131Ⅰ-anti-TLR5 mAb在兩組實(shí)驗(yàn)小鼠移植物皮膚部位的攝取與同一組織TLR5的表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r2=0.93,P0.0001)。第二部分131Ⅰ-anti TLR5 mAb/131Ⅰ-IgG/18F-FDG在雷帕霉素治療的同種移植模型中顯像價(jià)值的評(píng)價(jià)研究方法1、建立小鼠同種移植模型以C57BL/6小鼠為供體,將其背部全厚度皮膚移植到受體BALB/c小鼠,建立同種移植排斥模型。將模型小鼠分為對(duì)照組和雷帕霉素治療組；治療組在移植術(shù)后每日腹腔注射雷帕霉素1.5 mg/Kg,直至對(duì)照組小鼠移植皮膚完全排斥,對(duì)照組術(shù)后每日腹腔注射等量的PBS。2、131I標(biāo)記的放射性示蹤劑的制備和生物學(xué)活性檢測(cè)131 Ⅰ-anti TLR5 mAb制備及鑒定方法同第一部分；Iogogen法制備并純化對(duì)照同種型示蹤劑131 Ⅰ-IgG。分別將131 Ⅰ-IgG放入小鼠血清和生理鹽水中,37℃水浴,0h,12 h,24h,48 h,72 h和96 h分別檢測(cè)標(biāo)記物體外穩(wěn)定性。3,131Ⅰ-anti TLR5 mAb,131Ⅰ-IgG和18F-FDG在同種移植模型動(dòng)態(tài)分子顯像中的對(duì)比研究在移植術(shù)后第7天分別向兩組實(shí)驗(yàn)小鼠通過(guò)尾靜脈分別注射131Ⅰ-anti TLR5mAb和131Ⅰ-IgG (0.37 MBq/150μ1只),在注射后1 h,12 h,24 h,48 h和72 h進(jìn)行放射性自顯影顯像。在移植術(shù)后第10天選取兩組實(shí)驗(yàn)小鼠腹腔注射18F-FDG (5.55 MBq),在注射后30 min,60 min和90 min的時(shí)間進(jìn)行放射性自顯影顯像。OptiQuantTM圖像分析軟件檢測(cè)131Ⅰ-anti TLR5 mAb,131Ⅰ-IgG與18F-FDG在移植皮膚部位的濃聚狀況并進(jìn)行對(duì)比分析。研究結(jié)果1、131Ⅰ-IgG標(biāo)記率為96.2%,比活度為407.2 MBq/mg,在小鼠血清和生理鹽水中測(cè)定的體外穩(wěn)定性在72 h后均高于90%。2、在注射131Ⅰ-IgG 12h后顯示其在雷帕霉素治療組移植皮膚部位出現(xiàn)濃聚,但是其放射性活度明顯低于131Ⅰ-anti TLR5 mAb,表明131Ⅰ-anti TLR5 mAb在移植皮膚部位濃聚是標(biāo)記物與TLR5受體特異性結(jié)合的結(jié)果,而非同種型IgG Fc段的非特異性結(jié)合所致。3、18F-FDG的高攝取圖像僅出現(xiàn)在對(duì)照組,而雷帕霉素治療組移植物對(duì)18F-FDG的攝取量很低,圖像上幾乎不可見(jiàn)。31Ⅰ-anti-TLR5 mAb則在雷帕霉素治療組持續(xù)高攝取。131Ⅰ-anti-TLR5 mAb與18F-FDG最高T/NT比值分別為(7.68和1.16)(p0.001)。這表明131Ⅰ-anti-TLR5 mAb對(duì)雷帕霉素應(yīng)用后的移植物分子影像檢測(cè)與非特異性顯像劑相比有明顯的優(yōu)勢(shì)。第三部分同種移植排斥過(guò)程中自噬分子的表達(dá)及意義研究方法1、建立小鼠同種移植模型和雷帕霉素治療組模型方法見(jiàn)第一部分。2、自噬水平以及自噬發(fā)生相關(guān)基因和蛋白在移植模型盡力過(guò)程中的表達(dá)變化在小鼠同種移植模型術(shù)后的第4天,第8天,第12天和第16天,脫椎處死小鼠,分別取移植皮膚和脾,提取總mRNA和總蛋白。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)檢測(cè)移植皮膚和脾細(xì)胞中自噬相關(guān)基因Beclinl,ATG5的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平。Western blot技術(shù)檢測(cè)移植皮膚和脾細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白Belcinl,ATG5和LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ表達(dá)檢測(cè)自噬發(fā)生水平。3、同種移植小鼠移植皮膚部位131 Ⅰ-anti-TLR5 mAb攝取與自噬發(fā)生水平的相關(guān)性分析以同種移植排斥組和雷帕霉素治療組小鼠移植皮膚部位免疫組織化學(xué)TLR5染色測(cè)得的TLR5表達(dá)量與相應(yīng)自噬的水平做相關(guān)性分析。研究結(jié)果1、實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示在同種排斥組中,自噬相關(guān)基因Becln1和ATG5均從移植術(shù)后第8天起升高,在第12天達(dá)到高峰,在第16天下降。在雷帕霉素治療組出現(xiàn)同樣的趨勢(shì),從第8天起的表達(dá)明顯高于同種移植組。而且兩組移植皮膚部位的表達(dá)均明顯高于脾細(xì)胞(p0.01)。2.Western blOt結(jié)果顯示Beclin1和ATG5蛋白表達(dá)與其基因表達(dá)水平一致：Becln1和ATG5均從移植術(shù)后第8天起升高,第12天達(dá)到高峰,第16天下降。在同種移植組,自噬相關(guān)分子LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(自噬發(fā)生水平)在雷帕霉素治療組最高,而且在同種移植急性排斥反應(yīng)較強(qiáng)時(shí)明顯升高,在同種移植急性排斥反應(yīng)減弱后隨之降低(p0.01),表明自噬與移植排斥反應(yīng)呈明顯相關(guān)。更重要的是我們發(fā)現(xiàn)自噬相關(guān)基因與蛋白的變化在移植皮膚部位的變化比在脾臟的變化更加顯著。3、自噬分子與TLR5表達(dá)相關(guān)性分析：同種移植排斥模型中,移植皮膚部位自噬發(fā)生水平與TLR5的表達(dá)成正相關(guān)(r2=0.79)。全文結(jié)論1.制備了131Ⅰ-anti-TLR5 mAb,經(jīng)鑒定具有良好的特異性和生物學(xué)活性2.體內(nèi)生物學(xué)分布結(jié)果顯示,在同種移植模型中,131Ⅰ-anti-TLR5 mAb被移植皮膚部位高攝取,顯著高于對(duì)側(cè)正常皮膚；與同種移植模型相比,雷帕霉素治療后移植皮膚部位對(duì)131Ⅰ-anti-TLR5 mAb的攝取的T/NT值更高。全身磷屏放射自顯影結(jié)果與體內(nèi)生物學(xué)分布結(jié)果一致,在雷帕霉素應(yīng)用后,131Ⅰ-anti-TLR5 mAb對(duì)移植物清晰顯像。3. Anti-TLR5 mAb可顯著阻斷131Ⅰ-anti-TLR5 mAb在移植皮膚部位的濃聚,證明131Ⅰ-anti-TLR5 mAb在移植皮膚部位的特異性攝取,而不是非特異性的聚集。4.同種移植皮膚部位對(duì)131Ⅰ-anti-TLR5 mAb的特異性攝取與該部位TLR5的表達(dá)成明顯正相關(guān)。5.與同種型對(duì)照抗體131Ⅰ-IgG和非特異性顯像劑18F-FDG影像學(xué)研究進(jìn)行比較,131Ⅰ-anti-TLR5 mAb在雷帕霉素治療后的移植物有更高的T/NT值,具有明顯的影像學(xué)顯像優(yōu)勢(shì)和特異性。6.通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)在同種移植模型中,自噬的相關(guān)基因、蛋白和發(fā)生水平與移植排斥反應(yīng)密切相關(guān),雷帕霉素的應(yīng)用在調(diào)節(jié)移植排斥反應(yīng)的同時(shí)也引起自噬水平發(fā)生相應(yīng)改變。7.同種移植排斥過(guò)程中TLR5的表達(dá)和自噬的水平變化與移植排斥反應(yīng)成顯著相關(guān),可能是參與同種移植排斥的免疫調(diào)節(jié)的新機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：同種移植 TLR5 ~(131)I-anti-TLR5 mAb ~(18)F-FDG 自噬
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R617
【目錄】：

• 中文摘要12-20
• 英文摘要20-28
• 符號(hào)說(shuō)明28-31
• 第一部分 靶向TLR5的放射性核素標(biāo)記抗體對(duì)雷帕霉素治療的同種移植物動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)31-47
• 序言31-33
• 材料和方法33-41
• 一、實(shí)驗(yàn)材料33-35
• 二、實(shí)驗(yàn)儀器35-36
• 三、實(shí)驗(yàn)方法36-41
• 1. 建立小鼠同種異體皮膚移植模型36
• 2. 同種移植模型分組36
• 3. Iodogen法制備~(131)I碘化標(biāo)記TLR5單抗及放射化學(xué)純度分析36-37
• 4. 脾單個(gè)核細(xì)胞懸液制備37
• 5. 放射性配體與受體結(jié)合分析實(shí)驗(yàn)(RBA)鑒定標(biāo)記化合物生物學(xué)活性37-38
• 6. ~(131)I-anti-TLR5 mAb在同種移植模型中的體內(nèi)生物學(xué)分布38-39
• 7. ~(131)Ianti-TLR5 mAb同種移植模型動(dòng)態(tài)全身磷屏自顯影顯像39
• 8. TLR5在移植皮膚部位免疫組織化學(xué)染色39-40
• 9. TLR5表達(dá)與~(131)I-anti-TLR5 mAb的放射性活度相關(guān)性分析40
• 10. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析40-41
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-44
• 一、~(131)I-anti-TLR5 mAb制備和生物學(xué)活性鑒定41
• 1. 放射性碘化標(biāo)記anti-TLR5 mAb41
• 2. ~(131)I-anti-TLR5 mAb的生物學(xué)活性檢測(cè)41
• 3. ~(131)I-anti-TLR5 mAb體外穩(wěn)定性41
• 二、~(131)I-anti-TLR5 mAb在同種異體移植模型中生物學(xué)分布41-42
• 1. 雷帕霉素治療組41-42
• 2. 同種排斥對(duì)照組42
• 3. Anti-TLR5 mAb阻斷組42
• 三 ~(131)I-anti-TLR5 mAb在同種異體移植模型中的動(dòng)態(tài)磷屏自顯影顯像42-43
• 1. 雷帕霉素治療組42
• 2. 同種排斥對(duì)照組42
• 3. Anti-TLR5 mAb阻斷組42-43
• 4. 圖像半定量分析43
• 四、TLR5在移植皮膚部位免疫組織化學(xué)染色43
• 五、TLR5表達(dá)與~(131)I-anti-TLR5 mAb放射性活度值的相關(guān)性分析43-44
• 討論44-47
• 第二部分 ~(131)I-anti TLR5 mAb/~(131)I-IgG/~(18)F-FDG在雷帕霉素處理的同種移植模型中顯像價(jià)值的評(píng)價(jià)47-59
• 前言47-49
• 材料和方法49-54
• 一、實(shí)驗(yàn)材料49-50
• 二、實(shí)驗(yàn)儀器50-51
• 三、實(shí)驗(yàn)方法51-54
• 1. 建立小鼠同種異體皮膚移植模型51
• 2. 同種移植模型分組51
• 3. Iodogen法制備~(131)I碘化標(biāo)記TLR5及對(duì)照同種型IgG51-52
• 4. ~(131)I-IgG在同種移植模型中的體內(nèi)生物學(xué)分布52
• 5. ~(131)I-anti-TLR5 mAb在同種移植模型中動(dòng)態(tài)全身磷屏自顯影顯像分析52
• 6. ~(131)I-IgG在同種移植模型中的動(dòng)態(tài)全身磷屏自顯影顯像分析52-53
• 7. ~(18)F-FDG在同種移植模型中的動(dòng)態(tài)全身磷屏自顯影顯像分析53
• 8. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析53-54
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-56
• 一、~(131)I-anti-TLR5 mAb制備54
• 二、~(131)I-IgG制備和體外穩(wěn)定性54
• 1. ~(131)I-IgG的放射性碘化標(biāo)記結(jié)果54
• 2. 體外穩(wěn)定性54
• 三、~(131)I-IgG在雷帕霉素治療的同種移植模型中的體內(nèi)生物學(xué)分布54
• 四、~(131)I-IgG在同種移植模型中的動(dòng)態(tài)全身磷屏自顯影顯像分析54-55
• 1. 雷帕霉素治療組54
• 2. 排斥對(duì)照組54-55
• 五、~(18)F-FDG在同種移植模型中的動(dòng)態(tài)全身磷屏自顯影顯像分析55
• 1. 雷帕霉素治療組55
• 2. 排斥對(duì)照組55
• 六、動(dòng)態(tài)全身磷屏自顯影顯像半定量分析55-56
• 討論56-59
• 第三部分 同種移植排斥過(guò)程中自噬分子的表達(dá)及意義59-77
• 前言59-62
• 材料與方法62-71
• 一、實(shí)驗(yàn)材料62-66
• 二、實(shí)驗(yàn)儀器66-67
• 三、實(shí)驗(yàn)方法67-71
• 1. 小鼠同種皮膚移植模型的建立67
• 2. 受體小鼠脾細(xì)胞提取67
• 3. 移植皮膚和受體脾細(xì)胞RNA的提取67-68
• 4. cDNA的合成68-69
• 5. 熒光實(shí)時(shí)定量PCR69
• 6. 移植皮膚和受體脾細(xì)胞總蛋白的提取69-70
• 7. SDS-PAGE電泳70-71
• 8. 同種移植排斥過(guò)程中移植皮膚部位TLR5的表達(dá)與自噬發(fā)生水平的相關(guān)性分析71
• 9. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析71
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果71-74
• 一、熒光實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定自噬相關(guān)基因Beclin1和Atg5的表達(dá)71-72
• 1. Beclin1在同種移植和雷帕霉素治療組模型脾細(xì)胞的表達(dá)71-72
• 2. Atg5在同種移植和雷帕霉素治療組模型脾細(xì)胞的表達(dá)72
• 3. Beclin1在同種移植和雷帕霉素治療組模型皮膚的表達(dá)72
• 4. Atg5在同種移植和雷帕霉素治療組模型皮膚的表達(dá)72
• 二、熒光實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定自噬相關(guān)蛋白Beclin1、Atg5、LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ的表達(dá)72-73
• 1. 在同種移植模型和雷帕霉素治療組模型脾細(xì)胞的表達(dá)72-73
• 2. 在同種移植模型和雷帕霉素治療組模型移植皮膚部位的表達(dá)73
• 三.同種移植排斥過(guò)程中移植皮膚部位TLR5的表達(dá)與自噬發(fā)生水平的相關(guān)性分析73-74
• 討論74-77
• 全文小結(jié)77-78
• 論文創(chuàng)新點(diǎn)78-79
• 附圖表79-98
• 參考文獻(xiàn)98-107
• 致謝107-108
• 攻讀碩博研究生期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄108-109
• 攻讀碩博研究生期間參與科研項(xiàng)目情況109-110
• 攻讀碩博研究生期間獲得獎(jiǎng)勵(lì)情況110-111
• 已發(fā)表SCI論文111-150
• Paper One111-132
• Paper Two132-150
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表150

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 鄭永先;侯桂華;宋靜;張超;梁婷;;雷帕霉素對(duì)同種移植耐受模型CD4~+CD25~+ T細(xì)胞活性的影響[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2007年04期

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本文編號(hào)：767477