本文關鍵詞：UHRF1在骨肉瘤細胞侵襲過程中的作用及其機制研究

  更多相關文章： UHRF1 骨肉瘤細胞 Rb1 E-Cadherin 上皮細胞向間葉細胞轉化 CXCL12 誘導耐藥 凋亡途徑 骨肉瘤

【摘要】：骨肉瘤作為最常見的原發(fā)于骨組織的惡性腫瘤,在兒童和青少年的腫瘤中較為常見,通常具有惡性程度高,易復發(fā)和轉移,預后差的特征。盡管隨著腫瘤切除術、生物治療和新輔助化療技術的聯(lián)合應用,骨肉瘤的治愈率在近年來是有所提高的,但在骨肉瘤患者中出現(xiàn)肺轉移的病人,總體生存率仍低于50%。因此新型的分子生物學治療成為未來治療骨肉瘤的必然選擇方向。UHRF1是一個具有多個結構域的核蛋白,其生理作用可以促進細胞增殖和促進細胞凋亡,在保持DNA的甲基化狀態(tài)及表觀修飾的遺傳起著重要作用。近年來發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤細胞中異常高表達,且密切地參與了腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉移及放化療敏感性抵抗,由此可能成為腫瘤基因治療的一個新靶點。但是UHRF1在骨肉瘤細胞中的作用并不明了,在本實驗中,我們研究UHRF1在骨肉瘤細胞中侵襲過程中的作用,及其相關作用機制。目的： 1.研究UHRF1在骨肉瘤細胞的侵襲過程中的所發(fā)揮的作用2.研究UHRF1在骨肉瘤細胞的侵襲過程中的作用機制方法： 1.檢測UHRF1在骨肉瘤細胞系MG-63,Saos-2,U2OS和HOS中的表達水平,然后利用CCK-8增殖實驗來檢測過表達UHRF1對骨肉瘤細胞系增殖能力的影響。2.利用Transwell侵襲實驗檢測UHRF1對骨肉瘤細胞MG-63,Saos-2,U2OS和HOS侵襲能力的作用3.Western blot檢測骨肉瘤細胞中Rb1基因的表達水平,然后采用慢病毒感染干擾Rb1基因陽性細胞中的Rb1基因表達,檢測UHRF1對其侵襲能力的影響。4.Western blot檢測過表達UHRF1對骨肉瘤細胞對Rb1和E-Cadherin的作用。5.檢測UHRF1在骨肉瘤細胞上皮細胞向間葉細胞的轉化中的作用。結果： 1.骨肉瘤細胞MG-63,Saos-2,U2OS和HOS均有UHRF1表達,而且過表達UHRF1促進了骨肉瘤細胞的增殖。2.UHRF1增加了Rb1基因陽性的MG-63的侵襲能力,而對于無Rb1基因的Saos-2則無明顯作用。3.干擾Rb1基因陽性細胞中的Rb1基因后,發(fā)現(xiàn)過表達UHRF1對其侵襲能力失去調控作用。4.UHRF1通過抑制Rb1基因來抑制E-Cadherin5.UHRF1促進了Rb1表達陽性細胞的上皮細胞向間葉細胞的轉化。結論： 1.UHRF1促進了骨肉瘤細胞的增殖能力并增加了骨肉瘤細胞的侵襲能力,促進了上皮細胞向間葉細胞的轉化。2.UHRF1增加了骨肉瘤細胞的侵襲能力是依賴Rb1表達狀態(tài)的。3.UHRF1通過抑制Rb1基因表達,進而下調E-Cadherin的表達,從而增加了骨肉瘤細胞的侵襲能力,促進了上皮細胞向間葉細胞的轉化在以往的研究中,MTX和docetaxel被證實對骨肉瘤的治療有很有意義的作用。而對化療耐藥,是影響化療療效的主要屏障。與普通耐藥的形成機制不同,藥物壓力性誘導有著不一樣的形成機制。我們在此研究中應用基因芯片技術高通量地篩選U2OS和MG63耐藥細胞細胞株與親本細胞株之間的公共差異基因表達.明確其發(fā)揮的主要調控作用及其下游通路,進一步了解骨肉瘤耐藥的可能機制,為骨肉瘤多藥耐藥的逆轉尋找新的靶點。目的： 1.探討 CXCL12在MTX和docetaxel誘導性骨肉瘤耐藥中的作用2.探討 CXCL12在MTX和docetaxel誘導性骨肉瘤耐藥中的作用機制。方法： 1.對MTX和docetaxel誘導性骨肉瘤耐藥細胞株進行體外連續(xù)培養(yǎng);2.基因芯片檢測基因表達變化;3.檢測其公共差異基因下游凋亡途徑。結果： 1.耐藥細胞構建成功;2.基因檢測提示CXCL12為唯一非passager基因;3.凋亡途徑檢測提示Bcl-xl的表達被下調。結論 ：1.CXCL12是MTX和docetaxel誘導性骨肉瘤耐藥的主動調控因子。2.CXCL12通過下調Bcl-xl來促進骨肉瘤耐藥。
【關鍵詞】：UHRF1 骨肉瘤細胞 Rb1 E-Cadherin 上皮細胞向間葉細胞轉化 CXCL12 誘導耐藥 凋亡途徑 骨肉瘤
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R738.1
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 常用縮寫詞中英文對照表14-16
• 第一部分 UHRF1在骨肉瘤細胞的侵襲過程中的作用及其機制16-68
• 前言16-19
• 1 材料和方法19-47
• 1.1 實驗儀器19-21
• 1.2 實驗試劑21-26
• 1.3 實驗方法26-46
• 1.4 統(tǒng)計方法46-47
• 2 結果47-57
• 3 討論57-60
• 4 結論60-61
• 參考文獻61-68
• 第二部分 CXCL12 在誘導骨肉瘤耐藥過程中的作用及其機制68-104
• 前言68-70
• 1 材料與方法70-96
• 1.1 實驗儀器70-72
• 1.2 實驗試劑72-81
• 1.3 實驗方法81-95
• 1.4 統(tǒng)計方法95-96
• 2 結果96-99
• 3 討論99-101
• 4 結論101-102
• 參考文獻102-104
• 綜述104-117
• 參考文獻112-117
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果117-118
• 致謝118-120
• 個人簡介120

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本文編號：758418