本文關(guān)鍵詞：珠子參促進(jìn)造血活性及其多糖分析研究

  更多相關(guān)文章： 珠子參 白細(xì)胞減少癥 造血活性 多糖 結(jié)構(gòu)特征

【摘要】：珠子參為五加科植物珠子參或羽葉三七的干燥根莖,具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯,補(bǔ)肺養(yǎng)陰,活絡(luò)止血,補(bǔ)血的功效。主要用于氣陰兩虛,虛弱乏力,咳血,煩熱口渴,吐血,外傷出血,關(guān)節(jié)腫痛等癥,為民間常用中藥。研究表明,珠子參具有良好的促進(jìn)免疫和造血功能的作用,但其作用機(jī)制尚不明確。珠子參多糖具有良好的促進(jìn)免疫和抗腫瘤活性,但有關(guān)其結(jié)構(gòu)研究的報(bào)道較少。本研究以陜西省寶雞市紅河谷地區(qū)所產(chǎn)珠子參(Panax japonicus C. A. Mey. var. major(Burk.) C. Y. Wu et K. M. Feng)為研究對(duì)象,考察珠子參水溶性成分是否具有促進(jìn)造血活性,研究表明珠子參粗提物具有良好的升白作用,珠子參水提物、珠子參粗多糖、珠子參總皂苷均具有良好的促進(jìn)造血活性。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明珠子參多糖可能為珠子參活性組分,因此進(jìn)一步研究以珠子參粗多糖為研究對(duì)象,對(duì)其組成、結(jié)構(gòu)和活性進(jìn)行研究,結(jié)果從中分離得到五個(gè)組分：PJPS1、PJPS2、PJPS3、PJPS4、PJPS5,其中組分PJPS1含量最高,由兩種均一性多糖PJPS1-A和P JPS1-B組成,PJPS1-A為PJPS1主要組分,并對(duì)PJPS1-A的結(jié)構(gòu)和造血活性進(jìn)行研究。主要工作內(nèi)容和研究結(jié)果包括以下幾個(gè)方面：1.珠子參對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠白細(xì)胞減少的影響通過(guò)腹腔注射環(huán)磷酰胺(CPX)造成小鼠白細(xì)胞減少癥模型,灌胃給予珠子參粗提物后觀察小鼠體重、臟器指數(shù)變化,檢測(cè)每只小鼠血WBC、HGB、PLT、ALB、ALT、BUN、Crea等水平。結(jié)果顯示珠子參粗提物組小鼠血WBC、LY、PLT等水平均較模型對(duì)照組顯著提高,表明珠子參對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠白細(xì)胞減少癥有改善作用。2.珠子參對(duì)血虛模型小鼠造血功能的影響通過(guò)腹腔注射CPX和皮下注射乙酰苯肼(APH)聯(lián)合造模的方法造成小鼠血虛模型,分別灌胃給予不同劑量的珠子參粗提物(PJE)、珠子參總皂苷(PJSM)、珠子參粗多糖(PJPS)后觀察小鼠體重、臟器指數(shù)變化,檢測(cè)每只小鼠RBC、WBC、HGB等水平變化,酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清IL-3、IL-6、EPO、M-CSF、GM-CSF水平變化,并采用免疫組化法檢測(cè)脾臟中Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PJE、PJPS和PJSM都具有促進(jìn)造血活性,PJE、PJPS和PJSM可以加速血虛模型小鼠血RBC、WBC、HGB水平的恢復(fù),其促進(jìn)造血活性的機(jī)制可能與刺激血清IL-3、IL-6、EPO、GM-CSF、 M-CSF分泌和抗脾細(xì)胞凋亡有關(guān)。3.珠子參多糖的分離純化和部分理化·性質(zhì)研究通過(guò)水提醇沉、sevage法除蛋白、DEAE-52離子交換色譜和凝膠過(guò)濾色譜等方法從珠子參中提取分離得到五個(gè)組分：PJPS1、PJPS2、PJPS3、PJPS4、PJPS5,其中組分PJPS1含量最高,由多糖PJPS1-A和PJPS1-B組成,PJPS1-A為PJPS1主要組分,因此對(duì)PJPSl-A紫外和紅外吸收光譜、單糖組成以及糖含量等理化性質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果顯示其相對(duì)分子質(zhì)量為1.1×104Da,糖含量為93.1%,蛋白含量為1.5%,單糖組成為葡萄糖和半乳糖,摩爾比為9.1：1。4.珠子參多糖PJPS1-A的結(jié)構(gòu)研究采用酸水解、甲基化方法結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用、核磁共振等手段對(duì)PJPS1-A的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,推斷出PJPS1-A的結(jié)構(gòu)可能為：以(1→4)-Glc構(gòu)成主鏈,在C-6位存在分支,分支為(1→6)-Gal,末端為葡萄糖殘基,其糖苷鍵構(gòu)型均為a型。5.珠子參多糖PJPS1-A對(duì)血虛模型小鼠造血功能的影響通過(guò)腹腔注射CPX和皮下注射APH聯(lián)合造模的方法造成小鼠血虛模型,分別灌胃給予不同劑量的PJPS1-A后觀察小鼠體重、臟器指數(shù)的變化,檢測(cè)每只小鼠RBC、WBC、HGB、PLT等水平變化,酶聯(lián)免疫法檢測(cè)小鼠血清IL-3、IL-6、EPO、M-CSF、 GM-CSF水平變化,并采用免疫組化法檢測(cè)小鼠脾臟中Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PJPS1-A與PJPS作用一致,同樣具有促進(jìn)造血活性,可以加速血虛模型小鼠WBC、RBC、HGB水平的恢復(fù),其促進(jìn)造血活性的機(jī)制可能與刺激血清IL-3、IL-6、EPO、GM-CSF分泌和抗脾細(xì)胞凋亡有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：珠子參 白細(xì)胞減少癥 造血活性 多糖 結(jié)構(gòu)特征
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R284
【目錄】：

• 英文縮寫詞表3-5
• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 前言14-33
• 1.1 珠子參研究概述14-20
• 1.1.1 珠子參的來(lái)源14
• 1.1.2 珠子參的功效14
• 1.1.3 珠子參的植物形態(tài)14
• 1.1.4 珠子參的藥用歷史14-15
• 1.1.5 資源分布與生長(zhǎng)環(huán)境15
• 1.1.6 化學(xué)成分15-17
• 1.1.7 藥理作用17-20
• 1.2 細(xì)胞因子對(duì)造血功能的調(diào)控作用20-22
• 1.2.1 造血細(xì)胞因子對(duì)巨核系造血功能的調(diào)控作用21
• 1.2.2 造血細(xì)胞因子對(duì)紅系造血功能的調(diào)控作用21-22
• 1.2.3 造血細(xì)胞因子對(duì)淋巴系造血功能的調(diào)控作用22
• 1.3 多糖研究概述22-30
• 1.3.1 多糖分類22-23
• 1.3.2 多糖活性研究進(jìn)展23-26
• 1.3.3 多糖結(jié)構(gòu)解析方法26-30
• 1.4 本研究的目的和意義30-31
• 1.5 研究技術(shù)路線31-33
• 第二章 珠子參對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠白細(xì)胞減少的影響33-45
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 2.1.1 儀器與試劑33
• 2.1.2 藥材33
• 2.1.3 動(dòng)物33-34
• 2.1.4 樣品制備34
• 2.2 試驗(yàn)方法34
• 2.2.1 劑量的選擇34
• 2.2.2 分組及給藥34
• 2.2.3 統(tǒng)計(jì)方法34
• 2.3 結(jié)果34-41
• 2.3.1 PJE對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少小鼠體重的影響34-35
• 2.3.2 PJE對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少小鼠臟器指數(shù)的影響35-36
• 2.3.3 PJE對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少小鼠肝功能的影響36-37
• 2.3.4 PJE對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少小鼠血清蛋白代謝的影響37
• 2.3.5 PJE對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少小鼠腎功能的影響37-38
• 2.3.6 PJE對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少小鼠血清ALP水平的影響38
• 2.3.7 PJE對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響38-40
• 2.3.8 PJE對(duì)環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少小鼠血小板的影響40-41
• 2.4 討論41-45
• 第三章 珠子參對(duì)血虛模型小鼠造血功能的保護(hù)作用45-58
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料45-46
• 3.1.1 儀器與試劑45
• 3.1.2 藥材45-46
• 3.1.3 動(dòng)物46
• 3.1.4 樣品制備46
• 3.2 試驗(yàn)方法46-48
• 3.2.1 細(xì)胞因子ELISA檢測(cè)方法46-47
• 3.2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)47-48
• 3.3 結(jié)果48-56
• 3.3.1 PJE、PJPS、PJSM對(duì)血虛模型小鼠體重、臟器指數(shù)的影響48
• 3.3.2 PJE、PJPS、PJSM對(duì)血虛模型小鼠WBC、RBC、HGB水平的影響48-50
• 3.3.3 PJE、PJPS、PJSM對(duì)血虛模型小鼠脾臟Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響50-54
• 3.3.4 PJE、PJPS、PJSM對(duì)血虛模型小鼠血清造血細(xì)胞因子水平的影響54-56
• 3.4 討論56-58
• 第四章 珠子參多糖的分離純化及理化性質(zhì)研究58-69
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料58-59
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)藥物58
• 4.1.2 試劑58
• 4.1.3 儀器58-59
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法59-62
• 4.2.1 珠子參粗多糖的提取59
• 4.2.2 珠子參多糖的分離純化59-62
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果62-67
• 4.3.1 珠子參多糖的分離純化62-63
• 4.3.2 PJPS1-A純度與分子量測(cè)定63-64
• 4.3.3 單糖組成測(cè)定結(jié)果64-65
• 4.3.4 糖含量測(cè)定結(jié)果65
• 4.3.5 蛋白質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果65-66
• 4.3.6 紫外吸收光譜特征66
• 4.3.7 紅外吸收光譜特征66-67
• 4.4 討論67-69
• 第五章 水提珠子參多糖PJPS1-A的結(jié)構(gòu)研究69-77
• 5.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器69
• 5.1.1 試劑69
• 5.1.2 儀器69
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法69-70
• 5.2.1 PJPS1-A的甲基化69-70
• 5.2.2 PJPS1-A的核磁共振分析70
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果70-76
• 5.3.1 PJPS1-A的甲基化分析70-73
• 5.3.2 PJPS1-A的600 MHz ~1H NMR、~(13)C NMR譜圖分析73-76
• 5.4 討論76-77
• 第六章 珠子參多糖PJPS1-A對(duì)血虛模型小鼠造血功能的保護(hù)作用77-92
• 6.1 實(shí)驗(yàn)材料77
• 6.1.1 儀器與試劑77
• 6.1.2 藥物77
• 6.1.3 動(dòng)物77
• 6.2 實(shí)驗(yàn)方法77-78
• 6.2.1 細(xì)胞因子ELISA檢測(cè)方法77-78
• 6.2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)78
• 6.3 結(jié)果78-91
• 6.3.1 PJPS1-A對(duì)血虛模型小鼠體重、臟器指數(shù)的影響78-80
• 6.3.2 PJPS1-A對(duì)血虛模型小鼠WBC、RBC、HGB水平的影響80-82
• 6.3.3 PJPS1-A對(duì)血虛模型小鼠脾臟Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響82-89
• 6.3.4 PJPS1-A對(duì)血虛模型小鼠血清EPO、IL-3、IL-6、GM-CSF水平的影響89-90
• 6.3.5 PJPS1-A對(duì)血虛模型小鼠血清IgM、IgA水平的影響90-91
• 6.4 討論91-92
• 結(jié)論92-93
• 參考文獻(xiàn)93-102
• 致謝102-103
• 攻讀博士期間科研成果103-104
• 作者簡(jiǎn)介104-105

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：713303