本文關(guān)鍵詞：GLP-1抑制內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化及Compound 21調(diào)控骨骼肌微循環(huán)灌注的機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景和目的長期糖尿病可以導(dǎo)致器官及組織的纖維化,例如糖尿病心肌纖維化和糖尿病腎臟纖維化。過度纖維化可以破壞器官及組織的正常結(jié)構(gòu),最終引起臟器功能紊亂及衰竭。成纖維細(xì)胞可以分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì),高糖環(huán)境下過度增殖及活化的成纖維細(xì)胞被認(rèn)為是糖尿病器官及組織纖維化的罪魁禍?zhǔn)�。近期研究發(fā)現(xiàn)有相當(dāng)數(shù)量的成纖維細(xì)胞是由內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來,我們將這種現(xiàn)象稱之為內(nèi)皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(Endothelial-to-mesenchymal transition, EndMT)。內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化在糖尿病心肌病及糖尿病腎病的疾病進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。在糖尿病心肌病小鼠模型中,心肌中有15%到20%的成纖維細(xì)胞同時表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31及成纖維細(xì)胞標(biāo)志物FSP1,這一比例是正常小鼠的2-3倍。此外,在糖尿病腎病模型的腎組織中,這一比例比例高達(dá)30%到50%,是正常小鼠的5-6倍。因此如何有效的阻斷高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化已成為治療糖尿病心肌及腎臟纖維化的重要突破口。聚(ADP-核糖)聚合酶poly(ADP-ribose) polymerase, PARP是一種DNA修復(fù)酶,在調(diào)控細(xì)胞的生存、凋亡過程中發(fā)揮重要作用。正常情況下PARP-1的活性相對較低,然而在DNA損傷時PARP-1的活性迅速升高,催化相應(yīng)受體蛋白的聚ADP核糖基化反應(yīng),進(jìn)而參與DNA的修復(fù)。在病理狀態(tài)下,多種炎癥因子的刺激,例如活性氧簇(reactive oxygen species, ROS),腫瘤壞死因子α(TNFα)等,可導(dǎo)致DNA大量斷裂損傷,引起PARP-I過度激活,使細(xì)胞快速消耗NAD+,進(jìn)而引起ATP的耗竭,最終造成細(xì)胞的功能失調(diào)及壞死。此外還有研究發(fā)現(xiàn)PARP-1的活化可以增加促纖維化炎癥因子白介素1p(IL-1p)、腫瘤壞死因子a(TNFa)以及內(nèi)皮素1(endothelin-1)的表達(dá)。近期Kessler等研究發(fā)現(xiàn)TGF-1、IL-1、TNFα的聯(lián)合干預(yù)可誘導(dǎo)人腸道微循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。Widyantoro等亦證實(shí)內(nèi)皮素1基因敲除可以抑制高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮間充質(zhì)化,然而作為這些促纖維化因子的上游調(diào)控基因PARP-1與內(nèi)皮間充質(zhì)化的關(guān)系尚未有人研究。Glucagon-like peptide-1 (GLP-1)是由腸L細(xì)胞產(chǎn)生的腸促胰島素分泌肽。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)GLP-的1受體不僅表達(dá)于胰腺組織,還表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞以及心肌細(xì)胞上。新近研究顯示GLP-1激動劑可以顯著改善高脂誘導(dǎo)的心功能障礙及心肌纖維化。在我們前期研究亦發(fā)現(xiàn),GLP-1能夠通過抑制PARP-1/iNOS/NO途徑改善氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的胰島微循環(huán)內(nèi)皮損傷。因此上述研究表明GLP-1具有強(qiáng)大的心血管保護(hù)效應(yīng)。但是GLP-1能否通過抑制內(nèi)皮間充質(zhì)化來改善糖尿病心肌纖維化尚無人報道。綜上所述,我們圍繞GLP-1與內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化的關(guān)系及其潛在機(jī)制展開研究。本研究的研究目的為以下幾點(diǎn)：1.GLP-1能否在體內(nèi)及體外水平改善高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化。2.GLP-1抑制高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化的相關(guān)分子機(jī)制。研究方法1.細(xì)胞培養(yǎng)及分組：人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞分為72小時正常濃度葡萄糖(5mmol/1)干預(yù)組、72小時高糖(3Ommol/1)干預(yù)組、72小時高糖+PARP-1小干擾RNA組、72小時高糖+Snail小干擾RNA組、72小時高糖+GLP-1類似物組。2.動物飼養(yǎng)及分組：8周齡的C57BL/6小鼠經(jīng)相應(yīng)處理后分為以下三組：1.正常對照組；2.STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病鼠；3.STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病鼠+GLP-1 (24nmol/kg/day)受體激動劑組。3.心功能檢測：小鼠干預(yù)結(jié)束后,應(yīng)用經(jīng)胸壁超聲心動圖技術(shù)檢測心功能相應(yīng)指標(biāo)。4.ROS檢測：將細(xì)胞種植在6孔板內(nèi),干預(yù)3天后,用DCFH-DA孵育。孵育0.5h后,用激光共聚焦顯微鏡拍照。之后通過分析熒光的相對強(qiáng)度來評估細(xì)胞內(nèi)ROS的水平。5.Masson三色染色法檢測心肌纖維化：將甲醛固定的心肌組織,切片,脫蠟至水,用Masson復(fù)合染色液5分鐘,0.2%醋酸水溶液稍洗,然后用5%磷鎢酸浸潤5-10分鐘,再用0.2%醋酸水溶液浸洗2次,Devil亮綠染色液5分鐘,0.2%醋酸水溶液洗2次,無水乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。6.免疫熒光技術(shù)觀察體內(nèi)及體外水平內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化細(xì)胞及動物干預(yù)結(jié)束后,將相應(yīng)的細(xì)胞及組織固定于4%多聚甲醛中,用0.03% Triton X-100穿透細(xì)胞膜,之后用10%山羊血清封閉,一抗?jié)窈?℃冷庫中過夜,之后加入二抗。用激光共聚焦顯微鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞標(biāo)記物的分布及表達(dá)。7.Westernblot細(xì)胞干預(yù)后,裂解細(xì)胞并離心,提取離心后的上清蛋白。上樣之后,依次進(jìn)行跑膠,5%牛奶封閉,一抗4℃冷庫搖床過夜孵育,加入二抗孵育過后,依次加入顯影劑、定影劑進(jìn)行顯影定影。8.明膠酶譜先將預(yù)處理后的細(xì)胞上清液于含0.1%明膠的SDS-聚丙烯酰胺行電泳分離,之后將凝膠置于含有二價金屬離子的緩沖液中孵育,使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復(fù)酶活性,使其在相應(yīng)位置水解凝膠中所含有的明膠成分。之后用考馬斯亮藍(lán)染色凝膠,之后再脫色。在藍(lán)色的背景下,被水解明膠的部分可呈現(xiàn)出白色條帶。最后與上清蛋白濃度校正后得出最終結(jié)果。9.統(tǒng)計學(xué)分析每數(shù)據(jù)均應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)來表示,采用SPSS12.0軟件行統(tǒng)計學(xué)分析。每組實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次以上。采用Pearson雙變量相關(guān)分析來分析劑量依賴性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。對于多個組之間的比較,采用ANOVA檢驗(yàn),對于兩兩的比較應(yīng)用Tukeys't檢驗(yàn)。認(rèn)定P0.05具有顯著的統(tǒng)計學(xué)性差異。研究結(jié)果1.GLP-1治療顯著改善了STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病鼠的心肌纖維化及心功能障礙小鼠超聲心動圖顯示,相對于正常小鼠,糖尿病小鼠心功能指標(biāo)出現(xiàn)明顯惡化,GLP-1類似物治療后,心功能得到顯著改善。此外Masson三色及Westernblot顯示,與正常小鼠比較而言,糖尿病小鼠心肌纖維化及細(xì)胞外基質(zhì)明顯增加,GLP-1類似物治療組心肌纖維化程度顯著降低。2.GLP-1分別在體內(nèi)及體外水平抑制了高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化免疫熒光結(jié)果顯示糖尿病小鼠心肌組織中成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮源性成纖維細(xì)胞比例顯著高于正常。糖尿病小鼠經(jīng)過GLP-1類似物治療后,成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮源性成纖維細(xì)胞比例顯著降低。在體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,72h高糖處理過的人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上開始向成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化,即由典型的圓形變?yōu)樗笮?同時伴隨著內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物VE-cadherin的缺失及肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志物aSMA表達(dá)增加。3.GLP-1通過抑制ROS的產(chǎn)生抑制PARP-1的活化Westernblot顯示,GLP-1可以明顯抑制高糖引起人主動脈內(nèi)皮中PARP-1的活化。此外我們應(yīng)用免疫熒光技術(shù)證實(shí),GLP-1可以顯著降低高糖誘導(dǎo)過度生成的ROS。4.GLP-1通過抑制的PARP-1的活化降低高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的間充質(zhì)化我們應(yīng)用PARP-1小干擾RNA預(yù)處理細(xì)胞,然后在高糖環(huán)境下培養(yǎng)72h。我們應(yīng)用免疫熒光及Westernblot技術(shù)發(fā)現(xiàn)72h高糖培養(yǎng)可以促進(jìn)PARP-1的活化、Snail的表達(dá)以及PARP-1與Snail(內(nèi)皮間充質(zhì)化的關(guān)鍵調(diào)控因子)在細(xì)胞核內(nèi)共定位,PARP-1小干擾RNA處理后,高糖引起的上述變化得到顯著抑制。更為重要的是,PARP-1小干擾RNA處理徹底抑制了高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮間充質(zhì)化。與此同時我們發(fā)現(xiàn)GLP-1可以顯著降低PARP-1與Snail的表達(dá)及共定位。5.GLP-1可以通過抑制內(nèi)皮細(xì)胞問充質(zhì)化下調(diào)的Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白生成以及基質(zhì)金屬蛋白酶2、9的活性我們分別應(yīng)用Westernblot和明膠酶譜技術(shù)發(fā)現(xiàn),高糖可以明顯促進(jìn)Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的生成以及基質(zhì)金屬蛋白酶2、基質(zhì)金屬蛋白酶9的活性。而PARP-1小干擾RNA,Snail小干擾RNA和GLP-1可以顯著逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象。6.GLP-1可以抑制高糖引起的內(nèi)皮遷移能力的增加我們應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí),高糖可以引起內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的增加。免疫熒光技術(shù)顯示遷移能力增加的細(xì)胞主要是間充細(xì)胞質(zhì)化的內(nèi)皮細(xì)胞。GLP-1及PARP-1、干擾RNA可已顯著降低高糖引起的高遷移能力。研究結(jié)論1.GLP-1可以顯著改善糖尿病心肌纖維化和心功能障礙。2.GLP-1可以在體內(nèi)及體外水平顯著逆轉(zhuǎn)高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化。3.GLP-1下調(diào)高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)化可能與抑制PARP-1的活化有關(guān)。研究意義高糖可以引起內(nèi)皮細(xì)胞的間充質(zhì)化,進(jìn)而促進(jìn)心肌組織纖維化,導(dǎo)致心功能.惡化。GLP-1受體類似物可以通過下調(diào)PARP-1的活性顯著逆轉(zhuǎn)高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮間充質(zhì)化,進(jìn)而改善心肌纖維化及心功能。因此我們的研究為未來糖尿病器官纖維化的治療提供了新的思路及理論支持。研究背景和目的胰島素經(jīng)內(nèi)皮向骨骼肌間隙的轉(zhuǎn)運(yùn)是影響骨骼肌對葡萄糖攝取的“限速步驟”。有研究證實(shí),增加骨骼肌微循環(huán)再灌注(microvascular recruitment),可以增大肌肉毛細(xì)血管床交換面積,進(jìn)而促進(jìn)胰島素經(jīng)內(nèi)皮向骨骼肌間隙轉(zhuǎn)運(yùn),最終增加骨骼肌對葡萄糖的利用。在胰島素抵抗環(huán)境下(如肥胖,2型糖尿病等),胰島素介導(dǎo)的骨骼肌微循環(huán)再灌注出現(xiàn)嚴(yán)重障礙,這一障礙限制了胰島素經(jīng)內(nèi)皮向骨骼肌間隙轉(zhuǎn)運(yùn),最終加重外周胰島素抵抗。因此骨骼肌微循環(huán)系統(tǒng)己成為治療胰島素抵抗的新作用靶點(diǎn)。腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system, RAS)是人體內(nèi)重要的體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)。該系統(tǒng)在維持身體人體血壓及電解質(zhì)平衡方面發(fā)揮極為重要的作用。血管緊張素Ⅱ (Angiotensin Ⅱ, Ang ⅠI)是該系統(tǒng)中重要的組成部分,該因子可以通過結(jié)合2種G蛋白偶聯(lián)受體(血管緊張素1型受體(Angiotesin type 1 receptor,AT1R)和血管緊張素2型受體(Angiotesin type 2 receptor,AT2R))發(fā)揮相應(yīng)的血管效應(yīng)。例如在阻力血管(Resistance vessels)中,AngⅡ與AT1R相結(jié)合可以引起阻力血管的收縮以及平滑肌的增殖,AngⅡ與AT2R相結(jié)合則可通過激活下游的緩激肽/一氧化氮(bradykinin/NO)通路引起阻力血管的舒張進(jìn)而對抗1型受體介導(dǎo)的縮血管作用。目前大多數(shù)研究主要集中在AngⅡ?qū)Υ笱艿恼{(diào)節(jié)作用,其對微循環(huán)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)及其機(jī)制尚不清楚。早些時候Nora等研究發(fā)現(xiàn),在骨骼肌微循環(huán)系統(tǒng)上普遍存在著血管緊張素1型及2型受體。此外,我們的前期研究發(fā)現(xiàn),持續(xù)小劑量(1ng/kg/min)靜脈輸注血管緊張素Ⅱ可以在不引起血壓變化前提下增加骨骼肌微循環(huán)再灌注。上述研究結(jié)果充分說明血管緊張素Ⅱ在調(diào)節(jié)骨骼肌微循環(huán)再灌注過程中發(fā)揮重要作用。Compound 21是近年來新開發(fā)的一種高選擇非肽類血管緊張素2型受體激動劑,既往研究證實(shí),持續(xù)靜脈輸注Compound 21并不能降低正常SD大鼠的平均動脈血壓,只有在與血管緊張素II 1型受體阻滯劑聯(lián)合應(yīng)用時才能發(fā)揮其降壓效應(yīng)。近期研究發(fā)現(xiàn),持續(xù)靜脈輸注Compound 21雖然未影響血壓的變化,卻可以明顯增加局部組織(如腎動脈)的血流,且增加的幅度與性別密切相關(guān)。因此結(jié)合上述研究結(jié)果,我們提出假設(shè)應(yīng)用Compound 21可以在不改變血壓的前提下增加骨骼肌微循環(huán)再灌注。目前關(guān)于Compound21血管效應(yīng)機(jī)制方面存在較大爭議。Bonsnyak等在體外血管環(huán)實(shí)驗(yàn)(Myograph)中發(fā)現(xiàn)Compound21可以通過AT2R/NO通路發(fā)揮舒張血管的作用,與之相類似的是,Brouwers等在動物體內(nèi)證實(shí)Compound21可以通過AT2R/NO途徑舒張腎動脈,增加腎臟血流。但是近期erdonk等發(fā)現(xiàn),Compound 21確實(shí)可以在體外水平引起微血管及大血管舒張,但這一作用并非依賴于AT2R/NO途徑,而是通過直接抑制平滑肌鈣離子內(nèi)流直接實(shí)現(xiàn)的。更為有趣的是,Shao等研究報到Compound21可以通過直接作用于胰島B細(xì)胞AT2R受體增加胰島素的分泌,我們知道胰島素可以通過NO途徑增加骨骼肌微循環(huán)再灌注,因此Compound 21介導(dǎo)的體內(nèi)舒血管效應(yīng)是否與胰島素的分泌增加有關(guān)亦值得探討。綜上所述,我們圍繞Compound 21能否擴(kuò)張骨骼肌微循環(huán)進(jìn)及其潛在機(jī)制展開研究,本研究的研究目的為以下幾點(diǎn)：1. Compound 21能否增加骨骼肌微循環(huán)再灌注。2. Compound 21是否通過AT2R/NO途徑增加骨骼肌微循環(huán)再灌注。研究方法：1.動物飼養(yǎng)及分組將體重220-350g的成年雄性SD大鼠,置于22±2℃無菌飼養(yǎng)室喂養(yǎng),饑餓過夜后用于實(shí)驗(yàn)。大鼠分為以下4組：1.鹽水對照組；2.Compound21(300ng/kg/min)持續(xù)靜脈注射組；3.Compound21加AT2R拮抗劑PD123319(50μg/kg/min); 4. Compound21加一氧化氮合酶抑制劑L-NAME(50μg/kg/min)組。2.麻醉及手術(shù)Inactin于腹腔內(nèi)注射麻醉,之后將大鼠取仰臥位置放于操作臺上,將加熱墊置于其背部,以保證在整個實(shí)驗(yàn)過程中大鼠的體溫在生理范圍內(nèi)。于頸部行正中切口,用鑷子鈍性分離肌肉和筋膜,然后暴露氣管,切開氣管并插入通氣導(dǎo)管。分離兩側(cè)頸外靜脈及頸動脈,置入導(dǎo)管。頸動脈插管連接到動態(tài)血壓監(jiān)測器上。左側(cè)頸外靜脈的插管用于之后實(shí)驗(yàn)的相應(yīng)藥物輸入,右頸外靜脈插管用于實(shí)驗(yàn)過程中超聲造微球造影劑的輸入。手術(shù)完成后,等待60分鐘,以保證大鼠麻醉狀態(tài)的穩(wěn)定。3.動態(tài)監(jiān)測骨骼肌間隙氧分壓應(yīng)用光導(dǎo)纖維氧檢測系統(tǒng)動態(tài)監(jiān)測骨骼肌間隙的氧分壓。將氧分壓感受器的針頭插入大鼠右大腿內(nèi)收肌及半膜肌的肌間隙中,之后輕輕推出帶有氧敏感探頭的玻璃纖維,使其輕輕進(jìn)入到肌間隙中,穩(wěn)定30分鐘。實(shí)驗(yàn)開始后每10秒鐘記錄1次氧分壓的數(shù)值,每分鐘取均值。4.對照增強(qiáng)超聲(CEU)檢測骨骼肌微循環(huán)灌注情況應(yīng)用對照增強(qiáng)超聲影像可以檢測到骨骼肌的微循環(huán)容量(Microvascular Blood Volume,MBV)、微循環(huán)血流速度(Microvascular Flow Velocity,MFV)、織微循環(huán)的血流量(Microvascular Blood Flow, MBF)。5.細(xì)胞培養(yǎng)及分組大鼠原代主動脈內(nèi)皮細(xì)胞分為以下8組干預(yù)30分鐘：空白對照組、胰島素(10nmol/1)處理組、Compound 2110-9mol/l處理組、Compound 2110-8mol/l處理組、Compound 2110-7mol/l處理組、Compound 2110'6mol/l處理組、Compound 2110-5mol/l處理組、Compound 2110-4mol/l處理組。6.Westernblot細(xì)胞干預(yù)后,提取上清蛋白,上樣跑膠,牛奶封閉,一抗過夜孵育,二抗加入顯影劑定影劑。7.離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn)(Myograph)在體式顯微鏡下分離大鼠隱動脈遠(yuǎn)支(≤50μm),清除周圍結(jié)締組織及脂肪組織,將分離后的動脈切成2mm的小段,將剪好的2mm動脈段懸掛于含有6m1生理鹽溶液緩沖液(Physiological salt solution buffer, PSS)Multi Myograph System裝置上,持續(xù)向裝置內(nèi)給予95%02-5%CO2并維持裝置溫度在37℃左右。在去內(nèi)皮實(shí)驗(yàn)中,用頭發(fā)絲去除血管環(huán)的內(nèi)皮細(xì)胞,并用1μmol/L乙酰膽堿驗(yàn)證內(nèi)皮是否被徹底去除。實(shí)驗(yàn)開始后先用11μmol/L苯腎上腺素預(yù)收縮血管,然后先后加入不同濃度的Compound 21 (10-9mol/l、10-8mol/l、10-7mol/l、10-6mol/l、 10-5mol/l、10-4mol/l)觀察其舒張血管的效應(yīng),選擇舒張血管作用最明顯的濃度用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中我們分別用PD123319 (10-4mol/l)、L-NAME (10-5mol/l)、洛沙坦鉀(10-5Smol/1)預(yù)處理血管環(huán)30分鐘,再加入Compound 21并觀察其對血管環(huán)張力的影響。8.統(tǒng)計學(xué)分析所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用均數(shù)±SEM來表示,采用SigmaStat3.1.1統(tǒng)計軟件(Systat Software,Inc)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。對于多個組之間的比較,采用ANOVA檢驗(yàn),對于兩兩的比較應(yīng)用Tukeys't檢驗(yàn)。以P0.05為有顯著性差異。研究結(jié)果：1.Compound 21增加呈濃度依賴性增加內(nèi)皮細(xì)胞eNOS磷酸化我們應(yīng)用濃度梯度的(10-9mol/l、10-8mol/l、10-7mol/l、10-6mol/l、10-5mol/l、 10-4mol/l) Compound 21及i1(?)sulin (10nmol/l)干預(yù)大鼠原代主動脈內(nèi)皮30分鐘,Westernblot結(jié)果顯示C ompound21在10-6mol/1濃度,可以顯著增加eNOS磷酸化。2.超生理劑量的Compound 21通過AT2R非內(nèi)皮依賴途徑舒張遠(yuǎn)端隱動脈環(huán)我們應(yīng)用濃度梯度的(10-9mol/l、10-8mol/l、10-7mol/l、10-6mol/l、10-5mol/l、 10-4mol/l) Compound 21干預(yù)血管環(huán),我們發(fā)現(xiàn)只有在10-4mol/l, Compound 21可以顯著舒張血管,且這一作用是非內(nèi)皮依賴的。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)PD123319可以顯著抑制Compound 21的舒血管效應(yīng),而L-NAME及洛沙坦鉀無明顯作用。3.Compound 21在未影響血壓的前提下增加骨骼肌微循環(huán)的再灌注及骨骼肌間隙氧分壓。在體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)中,我們應(yīng)用對照增強(qiáng)超聲技術(shù)觀察骨(即微循環(huán)灌注情況。在整個實(shí)驗(yàn)過程中,與鹽水對照組相比,Compound21處理組血壓無明顯差異,但是Compound21靜脈輸注可以明顯增加骨骼肌微循環(huán)再灌注。此外我們還發(fā)現(xiàn)Compound21靜脈輸注可以顯著增加骨骼肌間隙氧分壓。4.Compound 21增加骨骼肌微循環(huán)灌注是通過于AT2R/NO途徑實(shí)現(xiàn)的為進(jìn)一步探討Compound 21在體內(nèi)增加骨骼肌微循環(huán)灌注的機(jī)制,我們在靜脈輸注Compound2130分鐘前,分別輸注AT2R拮抗劑(50μg/kg/min)PD123319或一氧化氮合酶抑制劑L-NAME(50μg/kg/min)。我們發(fā)現(xiàn)PD123319和L-NAME顯著的抑制了Compound 21誘導(dǎo)增加的骨骼肌微循環(huán)再灌注及骨骼肌間隙氧分壓。研究結(jié)論：1. Compound 21在未影響血壓的前提下增加骨骼肌微循環(huán)的再灌注及骨骼肌間隙氧分壓。2. Compound 21介導(dǎo)的骨骼肌微循環(huán)再灌注效應(yīng)可能是通過AT2R/NO途徑實(shí)現(xiàn)的。研究意義：應(yīng)用Compound 21直接激活骨骼肌微循環(huán)系統(tǒng)的血管緊張素2型受體可以擴(kuò)張骨骼肌微循環(huán),進(jìn)而開放更多毛細(xì)血管床,增大血液及組織間隙的交換面積。因此我們推測Compound21具有促進(jìn)胰島素向骨骼肌間隙轉(zhuǎn)運(yùn),增加胰島素敏感性的潛在價值。這一發(fā)現(xiàn)為胰島素抵抗的治療提供了新思路及理論支持。
【關(guān)鍵詞】：高糖 內(nèi)皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 聚(ADP-核糖)聚合酶1 胰高血糖素樣肽-1 Compound 21 骨骼肌微循環(huán) 骨骼肌間隙氧分壓
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要一8-13
• 英文摘要一13-19
• 中文摘要二19-24
• 英文摘要二24-29
• 符號說明29-31
• 第一部分：GLP-1抑制高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究31-62
• 一、前言31-34
• 二、材料和方法34-42
• 三、結(jié)果42-44
• 四、討論44-48
• 五、結(jié)論48-49
• 附圖49-58
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 第二部分 ：血管緊張素2型受體激動劑Compound 21調(diào)控骨骼肌微循環(huán)灌注的機(jī)制研究62-87
• 一、前言62-66
• 二、材料和方法66-71
• 三、結(jié)果71-72
• 四、討論72-75
• 五、結(jié)論75-76
• 附圖76-81
• 參考文獻(xiàn)81-87
• 英文論著Ⅰ87-120
• 英文論著Ⅱ120-132
• 致謝132-134
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文134-135
• 學(xué)位論文評擁及答辯情況表135

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃婭茜;王憲;孔煒;;糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2010年01期

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本文編號：663962