本文關(guān)鍵詞：NK細(xì)胞活化性受體NKp80的融合表達(dá)與功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：NK細(xì)胞(Natural Killer Cells,NK Cells)是一群參與機(jī)體天然免疫的重要淋巴細(xì)胞亞群,由于其在殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞中的作用在機(jī)體天然免疫中占有重要位置。NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞以及病毒感染細(xì)胞的殺傷活性主要取決于NK細(xì)胞識別靶細(xì)胞之后所產(chǎn)生的活化性和抑制性信號的整合和輸出,而這兩種信號則分別是由NK細(xì)胞表面活化性受體和抑制性受體及他們所識別的配體所介導(dǎo)的。天然免疫細(xì)胞表面膜蛋白在殺傷細(xì)胞識別腫瘤和病毒感染細(xì)胞的過程中有著至關(guān)重要的作用,而對膜蛋白的識別及殺傷機(jī)制的研究一直是免疫學(xué)研究的熱點問題。NKp80是最近發(fā)現(xiàn)的一個重要的NK細(xì)胞表面活化性受體,也稱為殺傷細(xì)胞凝集素樣受體亞家族F成員1,是二型跨膜糖蛋白,其胞外端包含一個C型凝集素結(jié)構(gòu)域(CTLD),與NKG2D同屬于NKC編碼的C型凝集素樣受體家族的一員。NKp80以分子量為80kD的二聚體形式主要表達(dá)于幾乎所有人的NK細(xì)胞表面以及一部分效應(yīng)記憶性的CD8+T細(xì)胞,能激活NK細(xì)胞毒效應(yīng)和細(xì)胞因子的釋放,并且能夠與其他活化性受體協(xié)同作用誘導(dǎo)NK細(xì)胞的活化。NKp80存在的已證實的唯一配體AICL是活化誘導(dǎo)的C型凝集素的簡稱,同樣也被稱作CLEC2B,其作為髓樣特異性的活化性受體表達(dá)于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和某些非造血細(xì)胞上。AICL與NKp80的相互作用被證實不僅能促進(jìn)NK細(xì)胞對惡性的骨髓細(xì)胞的細(xì)胞毒性反應(yīng),而且還能促使NK細(xì)胞和單核細(xì)胞的共同活化。在我們的研究中,主要獲得的結(jié)果包括以下兩個部分：1.NKp80分子參與NK細(xì)胞活化并增強(qiáng)NK細(xì)胞抗腫瘤功能NK細(xì)胞的活化及對靶細(xì)胞的裂解主要依賴于其表面存在的大量自然殺傷性受體(Natural Cytotoxicity Receptors, NCRs)和NKG2D分子,但是NK細(xì)胞同樣受其他一些活化性或者共刺激性受體所調(diào)控。在這部分研究中我們發(fā)現(xiàn),NKp80作為NK細(xì)胞的活化性受體,主要表達(dá)在人源的NK細(xì)胞上而不表達(dá)于人NK細(xì)胞系中。通過NKp80抗體介導(dǎo)NKp80受體進(jìn)行交聯(lián)后NK細(xì)胞上活化性標(biāo)志分子CD69的表達(dá)顯著上調(diào),而再導(dǎo)向殺傷實驗也進(jìn)一步證明了NKp80的交聯(lián)會強(qiáng)烈活化NK細(xì)胞,表現(xiàn)為脫顆�；钚院蜌钚缘娘@著增加,這種活化的水平甚至與經(jīng)典的NK細(xì)胞活化性受體如NCRs和NKG2D等分子所引起的活化水平相當(dāng)。NKp80與其他活化性受體分子共同交聯(lián)時還能表現(xiàn)出協(xié)同活化NK細(xì)胞的作用。另外通過對NK細(xì)胞殺傷功能的檢測也證明了NKp80的交聯(lián)能顯著增強(qiáng)NK細(xì)胞的腫瘤殺傷活性。細(xì)胞結(jié)合實驗證明了NKp80能特異性結(jié)合白血病細(xì)胞上的AICL分子。通過AICL抗體以及AICL肽段特異性阻斷NKp80-AICL相互作用之后觀察到NK細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間結(jié)合形成率受到明顯抑制,而反過來通過過表達(dá)AICL分子來促進(jìn)NKp80-AICL相互作用又能顯著促進(jìn)兩種細(xì)胞結(jié)合的形成,這些結(jié)果說明NKp80-AICL相互作用參與并促進(jìn)NK細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞免疫突觸的形成。而進(jìn)一步的殺傷功能實驗結(jié)果表明不論單獨阻斷NKp80還是單獨阻斷AICL分子均能顯著抑制NK細(xì)胞對白血病細(xì)胞的殺傷活性,而同時聯(lián)合阻斷兩種分子對NK細(xì)胞殺傷能力的抑制作用比單獨阻斷更為明顯,說明了NKp80-AICL相互作用能促進(jìn)NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷功能。因此,上述結(jié)果證明了NKp80的交聯(lián)不僅能強(qiáng)烈激發(fā)NK細(xì)胞的活化以及脫顆粒效應(yīng),而且還能與AICL分子相互作用,通過促進(jìn)NK細(xì)胞與白血病細(xì)胞之間免疫突觸的形成來增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷功能,從而給我們提示了NKp80-AICL受配體系統(tǒng)能幫助NK細(xì)胞治療白血病的可能性及可行性。2. NKp80-Fc融合蛋白的制備及介導(dǎo)NK細(xì)胞ADCC功能的研究NK細(xì)胞通過Fc受體所介導(dǎo)的效應(yīng)功能在臨床中已得到重要應(yīng)用,比如抗體介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷作用(Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity, ADCC)。AICL作為NKp80分子已被證實的配體分子高表達(dá)于惡性白血病細(xì)胞表面(如AML或CML),同時目前臨床上也缺乏治療性的AICL特異性抗體,基于以上原因我們希望尋找能靶向AICL陽性的白血病細(xì)胞同時還能誘導(dǎo)NK細(xì)胞對其發(fā)生ADCC作用的一種有效增強(qiáng)NK細(xì)胞抗腫瘤能力的策略,于是我們制備了NKp80-Fc融合蛋白。流式結(jié)果顯示NKp80-Fc融合蛋白能夠特異性結(jié)合白血病細(xì)胞上的AICL分子,細(xì)胞結(jié)合實驗則證明了NKp80-Fc融合蛋白能夠通過ADCC效應(yīng)顯著增強(qiáng)NK細(xì)胞和白血病細(xì)胞之間免疫突觸的形成。在功能實驗中,這一融合蛋白的ADCC功能進(jìn)一步被證實。細(xì)胞凋亡及后續(xù)的裂解實驗表明NKp80-Fc融合蛋白不僅能在細(xì)胞結(jié)合形成的早期促進(jìn)NK細(xì)胞介導(dǎo)的靶細(xì)胞的凋亡,還能在結(jié)合后續(xù)階段增強(qiáng)NK細(xì)胞脫顆�；钚院蜌籽〖�(xì)胞的功能。這種具有雙重功能的融合蛋白通過同時結(jié)合NK細(xì)胞和白血病細(xì)胞,不僅能特異性靶向腫瘤細(xì)胞,還能通過ADCC功能介導(dǎo)NK細(xì)胞對白血病細(xì)胞行使強(qiáng)烈的殺傷功能。綜上結(jié)果,本文中的研究方法對后續(xù)研究人員探尋分子靶向治療措施提供了很好的借鑒,并且這一融合蛋白也將可能會在白血病的免疫治療方面具有非常廣闊的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：NK細(xì)胞 NKp80 AICL 白血病 ADCC
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-16
• 符號說明16-17
• 第一章 緒論17-37
• 1.1 前言17-21
• 1.2 NK細(xì)胞的免疫學(xué)功能綜述21-23
• 1.2.1 NK細(xì)胞亞群分布以及特性21-22
• 1.2.2 NK細(xì)胞的效應(yīng)功能22
• 1.2.3 靶細(xì)胞的識別22-23
• 1.2.4 NK細(xì)胞抑制性和活化性受體23
• 1.3 NK細(xì)胞活化性受體NKp80分子綜述23-30
• 1.3.1 NKp80分子特征簡介23-26
• 1.3.2 NKp80分子的發(fā)現(xiàn)及功能26-28
• 1.3.3 NKp80與病毒感染免疫28-30
• 1.4 NKP80配體AICL分子綜述30-34
• 1.4.1 NKp80配體AICL的發(fā)現(xiàn)及功能30-32
• 1.4.2 NKp80與AICL的相互作用32-34
• 1.5 結(jié)語34-37
• 第二章 材料與方法37-45
• 2.1 實驗材料與試劑37-39
• 2.1.1 分子生物學(xué)相關(guān)試劑37-38
• 2.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑38
• 2.1.3 抗體試劑38
• 2.1.4 細(xì)胞分選試劑38-39
• 2.1.5 蛋白質(zhì)技術(shù)相關(guān)試劑39
• 2.2 實驗儀器39-40
• 2.3 實驗方法40-45
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)40-41
• 2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)41
• 2.3.3 ~(51)Cr釋放法檢測NK細(xì)胞的殺傷活性41-42
• 2.3.4 NK細(xì)胞脫顆粒功能檢測42
• 2.3.5 細(xì)胞凋亡檢測42
• 2.3.6 細(xì)胞結(jié)合檢測42-43
• 2.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計43-45
• 第三章 NKP80參與NK細(xì)胞活化并增強(qiáng)NK細(xì)胞抗腫瘤功能45-81
• 3.1 引言45-46
• 3.2 實驗結(jié)果46-81
• 3.2.1 NKp80分子的mRNA及細(xì)胞表達(dá)情況46-54
• 3.2.2 NKP80分子的交聯(lián)激發(fā)NK細(xì)胞活化54-59
• 3.2.3 NKp80協(xié)同其他NK受體分子增強(qiáng)NK細(xì)胞腫瘤殺傷活性59-63
• 3.2.4 NKp80配體AICL分子的mRNA及細(xì)胞表達(dá)情況63-66
• 3.2.5 NKp80特異性結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的AICL配體66-68
• 3.2.6 NKp80-AICL相互作用參與并促進(jìn)NK細(xì)胞免疫突觸的形成68-76
• 3.2.7 NKp80-AICL相互作用增強(qiáng)NK細(xì)胞抗腫瘤功能76-81
• 第四章 NKP80-FC融合蛋白的制備及介導(dǎo)NK細(xì)胞ADCC功能的研究81-107
• 4.1 引言81-82
• 4.2 實驗結(jié)果82-105
• 4.2.1 NKp80_Fc融合蛋白單克隆表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建82-88
• 4.2.2 NKp80-Fc融合蛋白的表達(dá)及純化88-92
• 4.2.3 NKp80-Fc融合蛋白能特異性結(jié)合白血病細(xì)胞表面的AICL配體92-95
• 4.2.4 NKp80-Fc融合蛋白能有效促進(jìn)NK細(xì)胞與白血病細(xì)胞免疫突觸的形成95-100
• 4.2.5 NKp80-Fc融合蛋白能促進(jìn)NK細(xì)胞介導(dǎo)的白血病細(xì)胞的凋亡100-102
• 4.2.6 NKp80-Fc融合蛋白能增強(qiáng)NK細(xì)胞的脫顆粒能力102-103
• 4.2.7 NKp80-Fc融合蛋白能顯著誘導(dǎo)NK細(xì)胞對白血病細(xì)胞的ADCC殺傷功能103-105
• 4.3 討論105-107
• 參考文獻(xiàn)107-113
• 致謝113-115
• 攻讀博士學(xué)位期間的主要研究成果115-116
• 論文發(fā)表情況及專利成果115
• 會議論文115-116

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6 張運濤,劉凡,姜茹,谷仲平,汪涌,張順,劉榮福,李玉梅;外源性p27與GRC-1細(xì)胞端粒酶活性及細(xì)胞凋亡關(guān)系的實驗研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2002年09期

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10 張晨,黃世林,馬東初,孫英慧,馬小鋒;硫化砷誘導(dǎo)NB_4細(xì)胞調(diào)亡[J];白血病;2000年06期

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1 鄒萍;;血液系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞來源膜微粒的特征及生物學(xué)作用研究[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

2 蔣爭凡;卞婕;翟中和;;非細(xì)胞體系誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞核凋亡的超微觀察[A];第十次全國電子顯微學(xué)會議論文集（Ⅰ）[C];1998年

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10 吳耀輝;鄒萍;;Sunrivin基因沉默對K562細(xì)胞調(diào)亡影響的研究[A];第11次中國實驗血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

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1 張?zhí)锟?細(xì)胞調(diào)亡的意義[N];中國人口報;2002年

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1 羅曉明;載藥聚合物超細(xì)纖維作為腫瘤局部制劑的研究[D];西南交通大學(xué);2014年

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3 宋楊;抗CD25單抗對腎移植患者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞生存和功能改變影響的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

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5 肖林林;巨噬細(xì)胞對血管細(xì)胞的輻射旁效應(yīng)及其分子機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 張峰;戊型肝炎病毒基因4型在PLC/PRF/5細(xì)胞中的培養(yǎng)及其特征研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

7 陳鳳華;Tat-SmacN7融合肽對腫瘤細(xì)胞輻射增敏作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 虞志新;Th17/Treg失衡及其與中性粒細(xì)胞相互影響在ARDS發(fā)病中的作用和機(jī)制研究[D];江蘇大學(xué);2015年

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1 王帥帥;Marc-145細(xì)胞中豬繁殖與呼吸綜合癥病毒粒子與胞外體的分離與鑒定[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

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  本文關(guān)鍵詞：NK細(xì)胞活化性受體NKp80的融合表達(dá)與功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：506659