本文關(guān)鍵詞：缺血性腦卒中相關(guān)易感基因及蛋白質(zhì)組學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分 缺血性腦卒中遺傳易感性研究(中文)腦卒中是一種發(fā)病率高、預(yù)后較差的急性腦血管病,隨著其發(fā)病率逐年上升,給不斷老年化的社會帶來嚴重健康問題。缺血性腦卒中占所有卒中的80%,是環(huán)境與遺傳因素相互作用的復(fù)雜性臨床疾病,對缺血性型腦卒中易感基因的發(fā)現(xiàn)則有助于對發(fā)病危險人群的篩查及疾病病因的解釋,為疾病的一級預(yù)防做出參考。目前,對于缺血性腦卒中的遺傳易感性的研究,國內(nèi)外已有一些全基因組關(guān)聯(lián)分析,及相關(guān)候選易感基因多態(tài)性分析。但由于地域環(huán)境、人種、實驗方法及疾病診斷等方面的差異導(dǎo)致研究結(jié)果并不完全相同。而已有的研究結(jié)果也需要在不同的人群中進行驗證,以不斷完善數(shù)據(jù)的真實性和可靠性,為不同人群建立疾病的早期篩查指標提供數(shù)據(jù)。因此,為闡明中國蘭州地區(qū)及周邊漢族人群中的缺血性腦卒中的遺傳易感性,我們展開了本項研究。本研究采用基于醫(yī)院住院患者病例資料的病例-對照回顧性研究方法,收集蘭州大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的的缺血性腦卒中患者515例,經(jīng)臨床及輔助檢查確診,并選取同期無心腦血管病史的體檢中心體檢人群中非缺血性腦卒中515例作為對照,兩組對照人群的性別及年齡相互匹配。利用時間飛行質(zhì)譜生物芯片分析系統(tǒng)(MassARRAY sequenom SNP)方法進行基因分型研究。研究結(jié)果顯示,有4個SNP位點的等位基因頻率與缺血性腦卒中的發(fā)生具有明顯的相關(guān)性,分別是rs10489177、rs1801133、rs2107595、rs2389995,其P值分別為0.004、0.047、0.007、0.012。7個SNP位點基因型頻率與缺血性腦卒中的發(fā)病具有明顯相關(guān)性,分別是rs10489177、rs17118、rs10887800、rs1801133、 rs2107595、rs2240419及rs2389995,P值分別為0.026、0.006、0.038、0.039、0.039、0.017及0.029。因此,本研究結(jié)果提示MTHFR基因(rs1801133),Clorf156基因(rs10489177), HDAC9基因(rs2107595, rs2240419, rs2389995)、RNLS基因(rs10887800)及XYLB基因(rs17118)與缺血性腦卒中的發(fā)生相關(guān)。本研究通過對中國蘭州及周邊人群缺血性腦卒中的危險基因進行分析,從而對為缺血性腦卒中危險人群的篩查提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù),從而對進一步闡釋缺血性腦卒中發(fā)生的分子遺傳學(xué)機制提供一定的啟示。第二部分MTHFR C677T多態(tài)性與缺血性腦卒中易感性之間關(guān)系的薈萃分析(中文)研究表明,亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因rs1801133位點與多種心腦血管疾病如缺血性腦卒中具有一定相關(guān)性。該位點的C677T變異體作為常見的多態(tài)能夠降低MTHFR的酶活性從而增加血漿中同型半胱氨酸的水平,而血漿中同型半胱氨酸水平的升高也被認為是缺血性腦卒中獨立危險因素。由于不同種族、地區(qū)、人群所具有的不同遺傳背景,致使疾病易感基因在不同種族的人群中研究的結(jié)果中并不完全一致。醫(yī)學(xué)薈萃分析可以對具有相似研究目的的多個研究項目進行綜合分析,可為易感性研究的關(guān)聯(lián)強度和特異性提供更準確的數(shù)據(jù)。因此,本研究通過薈萃分析的方法進一步評估MTHFR基因C677T多態(tài)性與缺血性腦卒中發(fā)生的關(guān)系。檢索PubMed,EMBASE,萬方數(shù)據(jù)以及CNKI數(shù)據(jù)庫收集所有相關(guān)研究,檢索時間截止到2014年10月。所有數(shù)據(jù)分析采用Stata v12.0軟件進行統(tǒng)計分析。采用優(yōu)勢比(OR)及其95%可信區(qū)間(CI)評價MTHFR基因C677T多態(tài)性與缺血性腦卒中之間的關(guān)聯(lián)強度。利用Q檢驗和I2統(tǒng)計量進行異質(zhì)性分析。采用多種遺傳模型,結(jié)合亞組分析,發(fā)表偏倚和敏感性分析的方法進行綜合評價。本文研究共納入34個病例-對照研究包含6535個缺血性腦卒中病例和7704個無缺血性腦卒中對照。總體來說,薈萃分析結(jié)果顯示,MTHFR基因C677T多態(tài)性與缺血性腦卒中易感性相關(guān),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(TC vs.CC:OR:1.29,95% CI 1.16-1.43,I2=35%,Pheterogeneity=0.025;TT vs.CC:OR=1.66,95% CI 1.38-2.01, I2=58.8%,Pheterogeneity0.001;T vs C:OR=1.29,95% CI 1.18-1.41,I2=62.9%, Pheterogeneity0.001;TT/CT vs CC:OR=1.38,95% CI 1.23-1.54,I2=51.4%, Pheterogeneity0.001;TT vs CT/CC:OR=1.41,95% CI 1.21-1.64,I2=50.7%, Pheterogeneity0.001)。由于研究間有較大異質(zhì)性,按照種族和對照組基因型是否符合HWE進行亞組分析�；诜N族的亞組分析結(jié)果表明,MTHFR基因C677T多態(tài)性與缺血性腦卒中在亞洲人群(TC vs.CC:OR=1.23,95% CI 1.11-1.37,I2= 26.4%,Pheterogeneity=0.117;TT vs.CC:OR=1.61,95% CI 1.30-2.00,I2=63.6%, Pheterogeneity0.001;T VS C:OR=1.27,95% CI 1.15-1.41,I2=66.7%,Pheterogeneity 0.001;TT/CT vs CC:OR=1.33,95% CI 1.17-1.51,I2=51.2%,Pheterogeneity=0.002;TT vs CT/CC:OR=1.41,95% CI 1.18-1.67,I2=55.5%,Pheterogeneity=0.001)和白種人群(TC vs.CC:OR=1.55,95% CI 1.23-1.96,I2=0％,Pheterogeneity=0.465；TT vs. CC:OR=2.02,95% CI 1.17-3.50,I2=58.1%,Pheterogeneity=0.036；T vs C:OR=1.42, 95% CI 1.12-1.82,I2=55.8%,Pheterogeneity=0.045；TT/CT vs CC:OR=1.63,95% CI 1.24-2.14,I2=31.4%,Pheterogeneity=0.200)中具有相關(guān)性,而在非洲人群中其結(jié)果不具有統(tǒng)計學(xué)意義�；贖WE的亞群分析結(jié)果表明,MTHFR基因C677T多態(tài)性與缺血性腦卒中易感性在兩個亞組(基因型符合/不符合HWE)中均具有統(tǒng)計學(xué)意義。敏感性分析結(jié)果表明,沒有哪個單一研究的結(jié)果影響總體OR值,本研究也沒有明顯的發(fā)表偏倚。本文的研究結(jié)果表明,MTHFR基因C677T多態(tài)性與缺血性腦卒中易感性相關(guān),MTHFR基因T等位基因能夠增加缺血性腦卒中的易感性。第三部分 缺血性腦卒中MTHFR C677T基因型的血漿蛋白質(zhì)組學(xué)研究(中文)在第一部分的研究結(jié)果中證實,亞甲基四氫葉酸還原酶催化區(qū)域的編碼基因中存在一個常見的多態(tài)性,基因序列第677位點的C-T替換,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)222位點的丙氨酸被纈氨酸所替換。亞甲基四氫葉酸還原酶基因677位的多態(tài)性一直被視為是心腦血管疾病的一個獨立危險因素。這主要是因為該酶的基因多態(tài)性與血漿同型半胱氨酸水平的升高有關(guān),而后者是心腦血管疾病及外周血管疾病的危險因素,并且也是引起靜脈血栓形成的危險因素。但在心腦血管疾病的發(fā)病過程中,其基因產(chǎn)物的作用沒有得到進一步證明。蛋白質(zhì)組學(xué)作為后基因組時代的一種系統(tǒng)生物學(xué)研究方法,為不同遺傳背景的整體動態(tài)研究中提供了嶄新的思路和技術(shù)支撐。為了探討C677T的多態(tài)性是否與一些不同于亞甲基四氫葉酸還原酶自身的血漿蛋白改變相關(guān),是否可以被用于心腦血管疾病的特異性預(yù)測或診斷標記,本文使用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),以雙向電泳及質(zhì)譜識別為基礎(chǔ)手段,來研究血漿中相關(guān)蛋白的差異表達。本研究收集已進行MTHFR分型的缺血性腦卒中病人血樣,進行高豐度蛋白的去除。Bradford法定量測定后,采用雙向凝膠電泳對血漿總蛋白進行分離,建立雙向凝膠電泳(2-DE)圖譜。利用PDQuest 8.0圖像分析系統(tǒng)對MTHFR基因T/T基因型和C/C基因型的血漿蛋白表達圖譜進行精確對比分析,篩選出二者之間的差異蛋白點,并對這些差異點進行分子量、近似等電點及三維結(jié)構(gòu)分析。通過串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀對差異蛋白點進行質(zhì)譜鑒定,應(yīng)用Mascot軟件對MALDI-TOF/TOF所得到的數(shù)據(jù),進行對比檢索,從中獲得差異蛋白質(zhì)的MS/MS解析圖譜和相關(guān)鑒定信息。并利用DAVID生物信息分析工具集和STRING軟件對蛋白質(zhì)的功能聚類、差異蛋白質(zhì)間相互作用進行分析。本文觀察到兩種基因型的缺血性腦卒中個體的2-DE圖譜中有28個蛋白點發(fā)生明顯變化,其中25個上調(diào),3個下調(diào),方法成功鑒定了5個蛋白質(zhì),其中3個為血漿白蛋白,1個為轉(zhuǎn)鐵蛋白、1個為結(jié)合珠蛋白,與SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫結(jié)果基本相符。利用DAVID工具集對差異蛋白進行聚類分析,其生物過程顯示大多數(shù)差異蛋白屬于炎癥免疫反應(yīng)。KEGG通路分析發(fā)現(xiàn)差異蛋白中有3個涉及到了補體系統(tǒng)的級聯(lián)反應(yīng)。STRING軟件交互作用分析表明,MTHFR基因多態(tài)性可能與DBP和apoa4的降低有關(guān)。上述結(jié)果初步揭示,MTHFR基因型的表現(xiàn)型作用可能與多個蛋白具有協(xié)同效應(yīng),這為進一步揭示缺血性腦卒中的發(fā)生的分子機理提供了基礎(chǔ)的參考資料。
【關(guān)鍵詞】：缺血性腦卒中 易感基因 單核苷酸多態(tài)性 缺血性腦卒中 亞甲基四氫葉酸還原酶 多態(tài)性 薈葶分析 亞甲基四氫葉酸還原酶 缺血性腦卒中 蛋白質(zhì)組 質(zhì)譜
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要3-8
• Abstract8-15
• 前言15-43
• 1 腦卒中背景概述15
• 2. 腦卒中發(fā)生的危險因素15-18
• 2.1 高血壓15-16
• 2.2 心臟病16
• 2.3 糖尿病16-17
• 2.4 動脈粥樣硬化17
• 2.5 不良生活方式17-18
• 2.6 其他因素18
• 3. 腦卒中發(fā)生的遺傳因素18-25
• 3.1 單基因遺傳因素18-19
• 3.2 多基因遺傳因素19-25
• 4. MTHFR基因特點及與缺血性腦卒中的相關(guān)性25-28
• 4.1 MTHFR基因特點26-27
• 4.2 MTHFR基因與缺血性腦卒中的相關(guān)性27-28
• 5. MTHFR蛋白特點及相關(guān)蛋白質(zhì)組學(xué)研究28-33
• 5.1 MTHFR蛋白特點29-30
• 5.2 相關(guān)蛋白質(zhì)組學(xué)30-33
• 參考文獻33-43
• 第一部分 中國漢族人群缺血性腦卒中遺傳易感性研究43-69
• 1.1 材料和方法44-49
• 1.1.1 材料44-45
• 1.1.2 方法45-49
• 1.2 結(jié)果49-61
• 1.2.1 研究對象基本信息49-50
• 1.2.2 Sequenom SNP基因分型結(jié)果50
• 1.2.3 SNP與缺血性腦卒中的相關(guān)性分析50-51
• 1.2.4 單倍域關(guān)聯(lián)分析51-61
• 1.3 討論61-65
• 1.4 結(jié)論65-66
• 參考文獻66-69
• 第二部分 MTHFRC677T多態(tài)性與缺血性腦卒中易感性之間關(guān)系的薈萃分析69-95
• 2.1 資料與方法70-71
• 2.1.1 文獻檢索70
• 2.1.2 文獻納入及排除標準70
• 2.1.3 文獻篩選與數(shù)據(jù)提取70
• 2.1.4 數(shù)據(jù)分析70-71
• 2.2 結(jié)果71-87
• 2.2.1 納入文獻特征71-77
• 2.2.2 Meta分析結(jié)果77-84
• 2.2.3 敏感性分析84-85
• 2.2.4 發(fā)表偏倚分析85-87
• 2.3 討論87-90
• 2.4 結(jié)論90-91
• 參考文獻91-95
• 第三部分 缺血性腦卒中MTHFR C677T基因型的血漿蛋白質(zhì)組學(xué)研究95-122
• 3.1 材料和方法96-102
• 3.1.1 材料96-99
• 3.1.2 方法99-102
• 3.2 結(jié)果102-115
• 3.2.1 采集樣本的一般情況及分組102
• 3.2.2 血漿總蛋白濃度測定102-103
• 3.2.3 MTHFR不同基因型的差異蛋白表達譜的建立103-104
• 3.2.4 MTHFR不同基因型的差異蛋白點的分析104-109
• 3.2.5 差異蛋白點的質(zhì)譜鑒定結(jié)果109-111
• 3.2.6 差異蛋白的生物信息學(xué)分析111-115
• 3.3 討論115-118
• 3.4 結(jié)論118-119
• 參考文獻119-122
• 綜述 缺血性腦卒中的分型及分子遺傳學(xué)研究進展122-134
• 參考文獻129-134
• 在讀期間科研成果及論文發(fā)表情況134-135
• 致謝135-136
• 附錄136-137

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：缺血性腦卒中相關(guān)易感基因及蛋白質(zhì)組學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：505881