本文關(guān)鍵詞：酸敏感離子通道2a在腦缺血和脊髓損傷中的作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)水平的提高、人們生活習(xí)慣的改變和交通情況的惡化,諸如腦缺血、脊髓損傷等神經(jīng)系統(tǒng)的損傷越來(lái)越多[1][2]。而此類的神經(jīng)系統(tǒng)損傷不僅給個(gè)人的生活質(zhì)量帶來(lái)極大的損害,同時(shí)也給家庭和社會(huì)帶來(lái)了巨大的負(fù)擔(dān)[3]。然而,目前對(duì)于腦缺血和脊髓損傷,臨床上并沒(méi)有有效的藥物及方法治愈。據(jù)研究者報(bào)道,在腦缺血和脊髓損傷后,均會(huì)由于炎癥和酸性產(chǎn)物堆積等原因引起局部環(huán)境酸化[4]。隨著局部環(huán)境的酸化,酸敏感離子通道(Acid Sensing Ion Channel,ASIC)就會(huì)被大量激活。ASIC通道家族有7個(gè)亞基,分別為1a、1b1、1b2、2a、2b、3和4[5]。現(xiàn)在已經(jīng)有大量研究表明ASIC1a在神經(jīng)系統(tǒng)損傷中起著加速神經(jīng)元死亡的作用[6],我們科室研究也發(fā)現(xiàn)ASIC1a介導(dǎo)了脊髓損傷后神經(jīng)元的繼發(fā)損傷。而ASIC2a的作用至今還沒(méi)有明確的研究表明其在腦缺血及脊髓損傷中起著什么樣的作用。所以,本研究旨在研究ASIC2a在腦缺血及脊髓損傷后的作用及機(jī)制。目的:1.觀察ASIC2a在腦缺血后表達(dá)變化規(guī)律及其在腦缺血中的作用。2.觀察ASIC2a在脊髓損傷后表達(dá)變化規(guī)律及其在脊髓損傷中的作用。3.探討ASIC2a可能的作用機(jī)制。方法:1.采用大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型和脊髓損傷模型,應(yīng)用組織病理學(xué)及TTC染色等方法,觀察MCAO及SCI后組織病理變化過(guò)程。2.應(yīng)用westernblotting觀察MCAO及SCI后ASIC2a表達(dá)變化規(guī)律及其變化意義。3.應(yīng)用病毒轉(zhuǎn)染調(diào)節(jié)ASIC2a的表達(dá),然后通過(guò)MTT染色、行為學(xué)評(píng)分、誘發(fā)電位等技術(shù)探討ASIC2a在MCAO及SCI繼發(fā)損傷中的作用及其機(jī)制。結(jié)果:1.大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞后,腦組織出現(xiàn)水腫,并在24小時(shí)以內(nèi),水腫面積不斷擴(kuò)大,腦組織細(xì)胞核固縮、細(xì)胞皺縮。大鼠則出現(xiàn)病灶對(duì)側(cè)前爪屈曲、行走時(shí)轉(zhuǎn)圈、向癱瘓側(cè)摔倒并最終意識(shí)喪失及死亡,其中24小時(shí)死亡率高達(dá)45%。應(yīng)用western blotting的方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)asic2a水平在大腦中動(dòng)脈閉塞及脊髓損傷后呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)。其中在大腦中動(dòng)脈閉塞后,asic2a表現(xiàn)為持續(xù)升高,但是在損傷12小時(shí)后才出現(xiàn)明顯的升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。病毒轉(zhuǎn)染后asic2a水平受到明顯調(diào)節(jié)。asic2a下調(diào)后,組織水腫明顯加重,he染色提示組織損傷加重,細(xì)胞核固縮,細(xì)胞核數(shù)目減少。應(yīng)用ttc染色檢測(cè)方法發(fā)現(xiàn)大鼠在大腦中動(dòng)脈閉塞后,腦組織缺血面積在24小時(shí)內(nèi)逐漸增大,在24小時(shí)達(dá)到最大。但是在下調(diào)asic2a表達(dá)后,缺血面積明顯增大,其梗死率在12小時(shí)即達(dá)到37.4%,相對(duì)于mcao組及空病毒組明顯擴(kuò)大。應(yīng)用改良bederson評(píng)分評(píng)估大鼠mcao后神經(jīng)損傷情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),mcao后12小時(shí),評(píng)分為asic2a下調(diào)組3.2、mcao組2.3和空病毒組2.4,asic2a下調(diào)后神經(jīng)功能明顯下降。2.allen’s脊髓損傷模型參數(shù)為10g重物10mm下落砸擊,砸擊面積為2mm,砸擊后損傷處周圍即出現(xiàn)明顯水腫,大鼠后肢即完全喪失運(yùn)動(dòng)能力,并有尿儲(chǔ)留。在損傷后28天內(nèi),后肢運(yùn)動(dòng)能力呈現(xiàn)出逐漸恢復(fù)的趨勢(shì),且趨勢(shì)較為穩(wěn)定。應(yīng)用westernblotting的方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在脊髓損傷后,損傷中心0.5cm范圍的脊髓組織內(nèi)asic2a水平在3h后下降,然而,在損傷的頭端和尾端0.5cm內(nèi)asic2a則在3h后開(kāi)始升高。asic2a改變有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。病毒轉(zhuǎn)染后asic2a水平受到明顯調(diào)節(jié)。asic2a上調(diào)后,組織損傷情況減輕,存活細(xì)胞數(shù)目增多,細(xì)胞水腫減輕。asic2a下調(diào)后,則損傷加重。體外實(shí)驗(yàn)表明在神經(jīng)元氧糖剝奪模型建立后,神經(jīng)元數(shù)目明顯下降,軸突明顯縮短,同時(shí)細(xì)胞間連接也減少。而asic2a下調(diào)加重了氧糖剝奪給神經(jīng)元帶來(lái)的損害,上調(diào)asic2a則保護(hù)神經(jīng)元減少受到氧糖剝奪的影響。mtt檢測(cè)在神經(jīng)元氧糖剝奪模型建立24小時(shí)后完成。實(shí)驗(yàn)表明氧糖剝奪模型減少了神經(jīng)元活性,但是上調(diào)asic2a可以減輕這種效果,而下調(diào)asic2a則加重了氧糖剝奪對(duì)神經(jīng)元的損傷。經(jīng)sep檢測(cè),正常大鼠體感誘發(fā)電位潛伏期為5.5ms,在脊髓損傷后7天潛伏期延長(zhǎng)至21ms。但是在上調(diào)asic2a表達(dá)后,脊髓損傷的大鼠sep潛伏期縮短至15.3ms,而下調(diào)asic2a表達(dá)后,潛伏期延長(zhǎng)至25.6ms。大鼠脊髓損傷后28天內(nèi)bbb評(píng)分,從記錄結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn),假手術(shù)組無(wú)任何后肢運(yùn)動(dòng)功能障礙,28天內(nèi)評(píng)分均為21分;脊髓損傷+空病毒(對(duì)照組)大鼠在傷后第3天出現(xiàn)后肢功能恢復(fù),評(píng)分為1分,在第3天到第7天恢復(fù)速度較快,隨后又趨于平緩,在傷后第28天評(píng)分可達(dá)到10.0±0.2分。而轉(zhuǎn)染了asic2a干擾慢病毒的大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)能力較差,傷后第3天仍然無(wú)可見(jiàn)的后肢運(yùn)動(dòng),評(píng)分為0分,隨后后肢運(yùn)動(dòng)功能緩慢恢復(fù),到第28天時(shí)評(píng)分為5.8±0.1分;轉(zhuǎn)染了asic2a過(guò)表達(dá)慢病毒的大鼠后肢恢復(fù)情況相對(duì)較好,傷后第三天即可恢復(fù)至2.6分,在隨后到28天內(nèi),均有較多的恢復(fù),第28天時(shí)評(píng)分可達(dá)到12.6±0.2分。3.ASIC2a可以增加神經(jīng)元對(duì)缺氧缺糖的耐受,減少神經(jīng)系統(tǒng)酸中毒時(shí)的鈣離子內(nèi)流。結(jié)論:1.ASIC2a下調(diào)后MCAO后腦梗塞面積明顯增加,動(dòng)物也表現(xiàn)出更多的偏癱癥狀。下調(diào)ASIC2a后,動(dòng)物在SCI后明顯表現(xiàn)出更糟糕的運(yùn)動(dòng)障礙和感覺(jué)障礙,脊髓組織損傷加重,神經(jīng)元對(duì)缺氧的耐受也變差。反之上調(diào)ASIC2a則可以緩解這一系列癥狀,神經(jīng)元對(duì)缺氧也更加耐受。2.ASIC2a可能為一個(gè)內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù)因子,在腦缺血和脊髓損傷后都有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。有可能成為以后臨床上治療腦缺血和脊髓損傷的一個(gè)新的靶標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血 脊髓損傷 酸敏感離子通道 慢病毒轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R651.2
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-12
• 第一章 前言12-16
• 1.1 研究背景12-13
• 1.2 選題緣由13-16
• 第二章 ASIC2a在腦缺血中的作用機(jī)制的研究16-35
• 2.1 前言16-17
• 2.2 材料和方法17-24
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-31
• 2.4 討論31-35
• 第三章 ASIC2a在脊髓損傷中的作用機(jī)制的研究35-54
• 3.1 前言35-40
• 3.2 材料和方法40-43
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-49
• 3.4 討論49-54
• 全文總結(jié)54-56
• 參考文獻(xiàn)56-65
• 文獻(xiàn)綜述一 酸敏感離子通道ASIC在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的病理和生理功能65-80
• 參考文獻(xiàn)72-80
• 文獻(xiàn)綜述二 脊髓損傷的繼發(fā)損傷機(jī)制的研究進(jìn)展80-92
• 參考文獻(xiàn)86-92
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果92-93
• 致謝93

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本文編號(hào)：474316