本文關(guān)鍵詞：酸敏感離子通道2a在腦缺血和脊髓損傷中的作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著我國經(jīng)濟(jì)水平的提高、人們生活習(xí)慣的改變和交通情況的惡化,諸如腦缺血、脊髓損傷等神經(jīng)系統(tǒng)的損傷越來越多[1][2]。而此類的神經(jīng)系統(tǒng)損傷不僅給個(gè)人的生活質(zhì)量帶來極大的損害,同時(shí)也給家庭和社會(huì)帶來了巨大的負(fù)擔(dān)[3]。然而,目前對于腦缺血和脊髓損傷,臨床上并沒有有效的藥物及方法治愈。據(jù)研究者報(bào)道,在腦缺血和脊髓損傷后,均會(huì)由于炎癥和酸性產(chǎn)物堆積等原因引起局部環(huán)境酸化[4]。隨著局部環(huán)境的酸化,酸敏感離子通道(Acid Sensing Ion Channel,ASIC)就會(huì)被大量激活。ASIC通道家族有7個(gè)亞基,分別為1a、1b1、1b2、2a、2b、3和4[5]�，F(xiàn)在已經(jīng)有大量研究表明ASIC1a在神經(jīng)系統(tǒng)損傷中起著加速神經(jīng)元死亡的作用[6],我們科室研究也發(fā)現(xiàn)ASIC1a介導(dǎo)了脊髓損傷后神經(jīng)元的繼發(fā)損傷。而ASIC2a的作用至今還沒有明確的研究表明其在腦缺血及脊髓損傷中起著什么樣的作用。所以,本研究旨在研究ASIC2a在腦缺血及脊髓損傷后的作用及機(jī)制。目的:1.觀察ASIC2a在腦缺血后表達(dá)變化規(guī)律及其在腦缺血中的作用。2.觀察ASIC2a在脊髓損傷后表達(dá)變化規(guī)律及其在脊髓損傷中的作用。3.探討ASIC2a可能的作用機(jī)制。方法:1.采用大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型和脊髓損傷模型,應(yīng)用組織病理學(xué)及TTC染色等方法,觀察MCAO及SCI后組織病理變化過程。2.應(yīng)用westernblotting觀察MCAO及SCI后ASIC2a表達(dá)變化規(guī)律及其變化意義。3.應(yīng)用病毒轉(zhuǎn)染調(diào)節(jié)ASIC2a的表達(dá),然后通過MTT染色、行為學(xué)評分、誘發(fā)電位等技術(shù)探討ASIC2a在MCAO及SCI繼發(fā)損傷中的作用及其機(jī)制。結(jié)果:1.大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞后,腦組織出現(xiàn)水腫,并在24小時(shí)以內(nèi),水腫面積不斷擴(kuò)大,腦組織細(xì)胞核固縮、細(xì)胞皺縮。大鼠則出現(xiàn)病灶對側(cè)前爪屈曲、行走時(shí)轉(zhuǎn)圈、向癱瘓側(cè)摔倒并最終意識(shí)喪失及死亡,其中24小時(shí)死亡率高達(dá)45%。應(yīng)用western blotting的方法檢測發(fā)現(xiàn)asic2a水平在大腦中動(dòng)脈閉塞及脊髓損傷后呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢。其中在大腦中動(dòng)脈閉塞后,asic2a表現(xiàn)為持續(xù)升高,但是在損傷12小時(shí)后才出現(xiàn)明顯的升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。病毒轉(zhuǎn)染后asic2a水平受到明顯調(diào)節(jié)。asic2a下調(diào)后,組織水腫明顯加重,he染色提示組織損傷加重,細(xì)胞核固縮,細(xì)胞核數(shù)目減少。應(yīng)用ttc染色檢測方法發(fā)現(xiàn)大鼠在大腦中動(dòng)脈閉塞后,腦組織缺血面積在24小時(shí)內(nèi)逐漸增大,在24小時(shí)達(dá)到最大。但是在下調(diào)asic2a表達(dá)后,缺血面積明顯增大,其梗死率在12小時(shí)即達(dá)到37.4%,相對于mcao組及空病毒組明顯擴(kuò)大。應(yīng)用改良bederson評分評估大鼠mcao后神經(jīng)損傷情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),mcao后12小時(shí),評分為asic2a下調(diào)組3.2、mcao組2.3和空病毒組2.4,asic2a下調(diào)后神經(jīng)功能明顯下降。2.allen’s脊髓損傷模型參數(shù)為10g重物10mm下落砸擊,砸擊面積為2mm,砸擊后損傷處周圍即出現(xiàn)明顯水腫,大鼠后肢即完全喪失運(yùn)動(dòng)能力,并有尿儲(chǔ)留。在損傷后28天內(nèi),后肢運(yùn)動(dòng)能力呈現(xiàn)出逐漸恢復(fù)的趨勢,且趨勢較為穩(wěn)定。應(yīng)用westernblotting的方法檢測發(fā)現(xiàn)在脊髓損傷后,損傷中心0.5cm范圍的脊髓組織內(nèi)asic2a水平在3h后下降,然而,在損傷的頭端和尾端0.5cm內(nèi)asic2a則在3h后開始升高。asic2a改變有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。病毒轉(zhuǎn)染后asic2a水平受到明顯調(diào)節(jié)。asic2a上調(diào)后,組織損傷情況減輕,存活細(xì)胞數(shù)目增多,細(xì)胞水腫減輕。asic2a下調(diào)后,則損傷加重。體外實(shí)驗(yàn)表明在神經(jīng)元氧糖剝奪模型建立后,神經(jīng)元數(shù)目明顯下降,軸突明顯縮短,同時(shí)細(xì)胞間連接也減少。而asic2a下調(diào)加重了氧糖剝奪給神經(jīng)元帶來的損害,上調(diào)asic2a則保護(hù)神經(jīng)元減少受到氧糖剝奪的影響。mtt檢測在神經(jīng)元氧糖剝奪模型建立24小時(shí)后完成。實(shí)驗(yàn)表明氧糖剝奪模型減少了神經(jīng)元活性,但是上調(diào)asic2a可以減輕這種效果,而下調(diào)asic2a則加重了氧糖剝奪對神經(jīng)元的損傷。經(jīng)sep檢測,正常大鼠體感誘發(fā)電位潛伏期為5.5ms,在脊髓損傷后7天潛伏期延長至21ms。但是在上調(diào)asic2a表達(dá)后,脊髓損傷的大鼠sep潛伏期縮短至15.3ms,而下調(diào)asic2a表達(dá)后,潛伏期延長至25.6ms。大鼠脊髓損傷后28天內(nèi)bbb評分,從記錄結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn),假手術(shù)組無任何后肢運(yùn)動(dòng)功能障礙,28天內(nèi)評分均為21分;脊髓損傷+空病毒(對照組)大鼠在傷后第3天出現(xiàn)后肢功能恢復(fù),評分為1分,在第3天到第7天恢復(fù)速度較快,隨后又趨于平緩,在傷后第28天評分可達(dá)到10.0±0.2分。而轉(zhuǎn)染了asic2a干擾慢病毒的大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)能力較差,傷后第3天仍然無可見的后肢運(yùn)動(dòng),評分為0分,隨后后肢運(yùn)動(dòng)功能緩慢恢復(fù),到第28天時(shí)評分為5.8±0.1分;轉(zhuǎn)染了asic2a過表達(dá)慢病毒的大鼠后肢恢復(fù)情況相對較好,傷后第三天即可恢復(fù)至2.6分,在隨后到28天內(nèi),均有較多的恢復(fù),第28天時(shí)評分可達(dá)到12.6±0.2分。3.ASIC2a可以增加神經(jīng)元對缺氧缺糖的耐受,減少神經(jīng)系統(tǒng)酸中毒時(shí)的鈣離子內(nèi)流。結(jié)論:1.ASIC2a下調(diào)后MCAO后腦梗塞面積明顯增加,動(dòng)物也表現(xiàn)出更多的偏癱癥狀。下調(diào)ASIC2a后,動(dòng)物在SCI后明顯表現(xiàn)出更糟糕的運(yùn)動(dòng)障礙和感覺障礙,脊髓組織損傷加重,神經(jīng)元對缺氧的耐受也變差。反之上調(diào)ASIC2a則可以緩解這一系列癥狀,神經(jīng)元對缺氧也更加耐受。2.ASIC2a可能為一個(gè)內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù)因子,在腦缺血和脊髓損傷后都有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。有可能成為以后臨床上治療腦缺血和脊髓損傷的一個(gè)新的靶標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血 脊髓損傷 酸敏感離子通道 慢病毒轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.2
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-12
• 第一章 前言12-16
• 1.1 研究背景12-13
• 1.2 選題緣由13-16
• 第二章 ASIC2a在腦缺血中的作用機(jī)制的研究16-35
• 2.1 前言16-17
• 2.2 材料和方法17-24
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-31
• 2.4 討論31-35
• 第三章 ASIC2a在脊髓損傷中的作用機(jī)制的研究35-54
• 3.1 前言35-40
• 3.2 材料和方法40-43
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-49
• 3.4 討論49-54
• 全文總結(jié)54-56
• 參考文獻(xiàn)56-65
• 文獻(xiàn)綜述一 酸敏感離子通道ASIC在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的病理和生理功能65-80
• 參考文獻(xiàn)72-80
• 文獻(xiàn)綜述二 脊髓損傷的繼發(fā)損傷機(jī)制的研究進(jìn)展80-92
• 參考文獻(xiàn)86-92
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果92-93
• 致謝93

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙瑞峰,才書春,張強(qiáng),張杰,晉記龍,靳建明;低場強(qiáng)MRI掃描對脊髓損傷的評價(jià)[J];山西臨床醫(yī)藥;2000年12期

2 關(guān)驊,唐和虎;脊髓損傷早期康復(fù)[J];中國康復(fù)理論與實(shí)踐;2000年04期

3 吳文堅(jiān);脊髓損傷的心理效應(yīng)[J];國外醫(yī)學(xué)(創(chuàng)傷與外科基本問題分冊);2000年02期

4 詹海英;脊髓損傷患者的膀胱訓(xùn)練[J];現(xiàn)代康復(fù);2001年06期

5 于笑難,蔣品;脊髓損傷患者偏癱與血清瘦素的關(guān)系[J];現(xiàn)代康復(fù);2001年20期

6 鄧寧;脊髓損傷的治療及研究展望[J];醫(yī)學(xué)文選;2001年06期

7 任少華;脊髓損傷患者的咳嗽閾值[J];中國康復(fù);2001年04期

8 邱卓英 ,施紅梅 ,馬洪卓;脊髓損傷患者的心理特點(diǎn)及其康復(fù)策略[J];中華物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)雜志;2002年06期

9 ;修復(fù)脊髓損傷的新方法[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2002年04期

10 ;社區(qū)脊髓損傷患者對多方位擴(kuò)大服務(wù)范圍的需求[J];中國臨床康復(fù);2002年04期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于鐵強(qiáng);馮世慶;;216例外傷性脊髓損傷住院患者分析[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會(huì)議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

2 葉英;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療脊髓損傷的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)第十三次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)大會(huì)論文集[C];2010年

3 張澤華;許以秀;黃小虹;;脊髓損傷早期康復(fù)進(jìn)展[A];中國病理生理學(xué)會(huì)中專教育委員會(huì)會(huì)議論文集[C];2003年

4 呂衛(wèi)軍;;脊髓損傷康復(fù)的觀察[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國康復(fù)治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

5 孫陽;呂政;高敏;李勝活;;脊髓損傷早期康復(fù)在我院開展現(xiàn)狀及開展早期康復(fù)理由[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

6 吳波;任先軍;郭樹章;;少突膠質(zhì)前體細(xì)胞移植治療脊髓損傷[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

7 蔡培強(qiáng);湯遜;;脊髓損傷的移植治療研究現(xiàn)狀及進(jìn)展[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

8 白躍宏;;脊髓損傷的康復(fù)[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國老年康復(fù)學(xué)術(shù)大會(huì)上海市康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)成立20周年暨老年康復(fù)診療提高班論文匯編[C];2008年

9 萬里;史文博;廖利民;;夜間陰莖勃起測定系統(tǒng)對不同平面脊髓損傷者的觀測[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)男科學(xué)分會(huì)第十三次全國男科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

10 周謀望;;脊髓損傷康復(fù)進(jìn)展[A];2013浙江省物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第八屆浙江省康復(fù)醫(yī)學(xué)發(fā)展論壇論文集[C];2013年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 于亞軍;首屆全國脊髓損傷外科治療與康復(fù)研討會(huì)在我市召開[N];呼和浩特日報(bào)(漢);2009年

2 ;北京：脊髓損傷發(fā)病率過高[N];健康時(shí)報(bào);2003年

3 編譯 于娜;早期脊髓損傷有新療法[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

4 通訊員　陳亞偉　記者　徐丹鹿;我國每年脊髓損傷者數(shù)萬人[N];光明日報(bào);2003年

5 上海楊浦 朱群邦;脊髓損傷患者的家居環(huán)境改進(jìn)[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2012年

6 上海浦東 陸至順;脊髓損傷患者的心理特征[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

7 ;脊髓損傷康復(fù)趕早[N];保健時(shí)報(bào);2005年

8 鄭穎t，

本文編號：474316