本文關鍵詞：NF-κB信號通路介導的神經母細胞瘤增殖及侵襲、轉移的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分NF-κB(p65),COX-2與MMP-9在神經母細胞瘤組織的表達及臨床意義的研究目的探討NF-κB(p65),COX-2與MMP-9在神經母細胞瘤組織的表達及臨床意義。方法選取青島大學附屬醫(yī)院石蠟包埋標本80例神經母細胞瘤組織和20例節(jié)細胞神經瘤組織病理切片標本,免疫組化檢測神經母細胞瘤標本組織和節(jié)細胞神經瘤標本組織中NF-κB(p65),COX-2與MMP-9的表達,并比較年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤INSS分期、Shimada組織分型、淋巴結有無轉移、有無侵潤等與NF-κB,COX-2與MMP-9的表達的關系及NF-κB表達與COX-2與MMP-9的表達的關聯(lián)性。結果NF-κB(p65),COX,MMP-9表達在神經母細胞瘤組織高表達,在節(jié)細胞神經瘤組織病理表達量較低,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.01)。NF-κB(p65),COX-2,MMP-9表達均與患者腫瘤INSS分期、Shimada組織分型、淋巴結有無轉移、有無侵潤相關,而與患者年齡、性別、腫瘤大小無關,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.01);NF-κB(p65)表達與COX-2,MMP-9表達相關性分析,我們發(fā)現NF-κB(p65),COX-2,MMP-9蛋白的表達呈明顯正相關(R=0.626,P㩳0.01 AND R=0.612,P㩳0.01)。結論1.NF-κB(p65),COX-2,MMP-9蛋白在神經母細胞瘤均有陽性表達且高于節(jié)細胞神經瘤組織;2.NF-κB(p65),COX-2,MMP-9表達與患者腫瘤INSS分期、Shimada組織分型、淋巴結轉移、有無侵潤相關;3.NF-κB(p65)蛋白表達與COX-2,MMP-9蛋白表達呈明顯的正相關。第二部分NF-κB信號通路在神經母細胞瘤增殖、侵襲及轉移中的作用及機制探討目的探討NF-κB信號通路在神經母細胞瘤增殖、侵襲、轉移中的作用及機制方法利用transwell檢測并比較神經母細胞瘤細胞細胞QDDQ-NM1高轉移及QDDQ-NM2低轉移細胞系的不同侵襲能力,CCK-8檢測兩株細胞系增殖能力的不同,Western blort檢測NF-κB(p65)和p-IκB表達的差異。用不同濃度(5、10、20、40μmol/L)NF-κB信號通路抑制劑PDTC預處理QDDQ-NM1高轉移及QDDQ-NM2低轉移細胞系,transwell檢測觀察兩種細胞系侵襲能力變化,Real time PCR,Western blort檢測不同濃度PDTC預處理QDDQ-NM1高轉移及QDDQ-NM2低轉移細胞系NF-κB(p65),p-IκB,IκB,COX-2,MMP-9表達的差異。選擇神經母細胞瘤高轉移細胞系QDDQ-NM1,TNF-α不同時間和濃度預處理QDDQ-NM1,促進NF-κB信號通路活化,Real time PCR及Western blort檢測不同處理下NF-κB(p65),p-Ik Bα,IκB,COX-2,MMP-9基因表達變化,transwell檢測細胞系侵襲能力變化。THP-1細胞系誘導產生巨噬細胞和SH-SY5Y細胞系共培養(yǎng),模擬體內腫瘤微環(huán)境,Real time PCR及Western blort檢測不同處理下NF-κB(p65),p-Ik Bα,COX-2,MMP-9基因表達變化。結果神經母細胞瘤細胞細胞QDDQ-NM1高轉移細胞系增殖及侵襲能力高于QDDQ-NM2低轉移細胞系且QDDQ-NM1中NF-κB(p65)和p-Ik Bα蛋白表達高于QDDQ-NM2(P0.01)。不同濃度NF-κB抑制劑PDTC預處理QDDQ-NM1高轉移細胞系,隨濃度增大QDDQ-NM1增殖能力和侵襲能力減弱,p-IκB蛋白表達逐漸減弱,COX-2,MMP-9蛋白表達也逐漸減弱(P0.01)。不同劑量或時間TNF-α預處理QDDQ-NM1細胞系,p-Ik Bα蛋白,MMP-9,COX-2蛋白表現出劑量和時間依賴性,不同處理組間細胞侵襲能力差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。PMA處理THP-1細胞系和SH-SY5Y細胞系共培養(yǎng),共培養(yǎng)組與對照組或PDTC處理組相比,MMP-9,COX-2蛋白表達明顯增加(P0.01)。結論1.NF-κB信號通路在神經母細胞瘤高轉移侵襲細胞系活化增加;2.NF-κB的核轉錄啟動下游基因COX-2和MMP-9的表達,增強神經母細胞瘤增殖、侵襲及轉移能力;3.靶向阻斷NF-κB信號通路可作為治療和預防神經母細胞瘤增殖、侵襲及轉移新途徑。
【關鍵詞】：NF-κB COX-2 MMP-9 神經母細胞瘤 NF-κB 侵襲 轉移 神經母細胞瘤
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-10
• 第一部分NF-ΚB，COX-2 與MMP-9 在神經母細胞瘤組織的表達及臨床意義10-37
• 引言10-13
• 參考文獻12-13
• 1 材料與方法13-17
• 1.1 儀器、試劑和耗材13-14
• 1.2 方法14-16
• 1.3 統(tǒng)計學處理16-17
• 2 結果17-26
• 2.1 神經母細胞瘤組織與節(jié)細胞神經瘤組織HE染色鑒定17
• 2.2 NF-κB(p65)、COX-2 及MMP-9 在神經母細胞瘤及節(jié)細胞神經瘤的表達情況17-23
• 2.3 NF-κB(p65)、COX-2 及MMP-9 蛋白的表達與神經母細胞瘤臨床病理特征關系23-24
• 2.4 NF-κB(p65)、COX-2 及MMP-9 蛋白表達的相關性24-26
• 3 討論26-30
• 4 結論30-31
• 參考文獻31-37
• 第二部分NF-ΚB信號通路在神經母細胞瘤增殖、侵襲及轉移中的作用及機制探討37-78
• 引言37-38
• 1 材料與方法38-50
• 1.1 儀器、試劑和耗材38-41
• 1.2 方法41-49
• 1.3 統(tǒng)計分析49-50
• 2 結果50-65
• 2.1 QDDQ-NM1與QDDQ-NM2細胞的體外侵襲能力比較50-51
• 2.2 QDDQ-NM1與QDDQ-NM2細胞的NF-κB活性比較51-52
• 2.3 CCK-8 測定不同濃度PDTC對QDDQ-NM1與QDDQ-NM2細胞的增殖作用52
• 2.4 不同濃度PDTC對QDDQ-NM1與QDDQ-NM2細胞體外侵襲能力的影響52-55
• 2.5 PDTC對神經母細胞瘤細胞系QDDQ-NM1中NF-κB和p-IκBα蛋白表達的影響55
• 2.6 PDTC對神經母細胞瘤細胞系中COX-2 和MMP-9 蛋白表達的影響55-56
• 2.7 PDTC對神經母細胞瘤細胞系中COX-2 和MMP-9 mRNA表達的影響56-57
• 2.8 CCK-8 測定不同濃度TNF-α對QDDQ-NM1與QDDQ-NM2細胞的增殖作用57-58
• 2.9 不同濃度TNF-α對QDDQ-NM1與QDDQ-NM2細胞體外侵襲能力的影響58-61
• 2.10 TNF-α對神經母細胞瘤高轉移細胞系QDDQ-NM1中NF-κB,IκBα和p-IκBα蛋白表達影響61-62
• 2.11 TNF-α對神經母細胞瘤高轉移細胞系QDDQ-NM1中MMP-9,COX-2 蛋白表達的影響62-63
• 2.12 TNF-α對神經母細胞瘤高轉移細胞系QDDQ-NM1中COX-2 和MMP-9 mRNA表達的影響63-64
• 2.13 SH-SY5Y細胞與THP-1 細胞共培養(yǎng)實驗64-65
• 3 討論65-68
• 4 結論68-69
• 參考文獻69-78
• 綜述 NF-ΚB信號通路研究進展及與腫瘤的關系78-97
• 參考文獻91-97
• 攻讀學位期間的研究成果97-99
• 致謝99-100

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