本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)化生長因子β1在蟑螂過敏原誘導(dǎo)的哮喘中對間充質(zhì)干細(xì)胞募集遷移的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的哮喘是一個嚴(yán)重的慢性炎癥疾病,在全球范圍內(nèi)約有3億人群有嚴(yán)重的哮喘,給國家、家庭、個人造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。美國每年因哮喘死亡約200-3000例,且有增加趨勢。支氣管哮喘是由各種炎癥細(xì)胞、結(jié)構(gòu)細(xì)胞及細(xì)胞組分參與的氣道慢性過敏反應(yīng)性炎癥性疾病,長期慢性氣道炎癥導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性、可逆性氣流阻塞及氣道重塑。氣道慢性炎癥持續(xù)存在并構(gòu)成哮喘發(fā)病的核心因素,主要表現(xiàn)為：①支氣管粘膜上皮組織中大量的嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤；②支氣管內(nèi)膜纖毛細(xì)胞受損或壞死、上皮壞死脫落。粘膜水腫和充血,粘膜上皮層杯狀細(xì)胞增多,粘液腺增生、大量分泌物和粘液存留；③器官平滑肌增生肥厚、支氣管壁增厚和基底膜增厚。近期的研究讓我們認(rèn)識到哮喘不僅僅是單純的氣道炎癥,還涉及到氣道結(jié)構(gòu)重塑。支氣管哮喘導(dǎo)致氣道結(jié)構(gòu)重塑是以氣道上皮損傷,管壁增厚和皮下纖維化為特點(diǎn)。氣道重構(gòu)是引起慢性哮喘患者氣道不可逆或部分不可逆阻塞的病理基礎(chǔ),是誘發(fā)氣道高反應(yīng)性和哮喘慢性化的主要因素。支氣管哮喘多發(fā)于市中心的居住人群中,最主要的原因可能是由于長期暴露于過敏原中,尤其早期暴露于蟑螂過敏原中可以導(dǎo)致過敏性氣道炎癥和哮喘的發(fā)病率增加。一項(xiàng)國際合作市區(qū)哮喘研究(NCICAS)發(fā)現(xiàn)有60-80%的兒童被蟑螂過敏原致敏,提示蟑螂過敏原是市區(qū)中支氣管哮喘發(fā)生的重要因素[7]。然而關(guān)于蟑螂過敏原誘導(dǎo)的哮喘的機(jī)制尚未完全闡明。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)是屬于中胚層的具有強(qiáng)大自我更新和多項(xiàng)分化潛能的一類多能干細(xì)胞[8,9],可在一定條件下分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪組織、肝臟細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞等中胚層及中胚層來源以外的細(xì)胞[10,11]間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs主要來源于骨髓,還廣泛分布于肌肉、滑膜、肺臟、肝臟、臍帶血、外周血以及脂肪組織中。此外間充質(zhì)干細(xì)胞具有免疫原性低,表面表達(dá)各種黏附分子和趨化因子,故容易遷移并存留于不同的組織中。研究表明,間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs具有很強(qiáng)的免疫抑制能力,起作用對象幾乎涉及所有的免疫細(xì)胞,包括NK細(xì)胞、T細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞及DC等[12-14]。因此從理論上講,間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs可減輕肺炎癥反應(yīng),并有免疫調(diào)節(jié)功能,對哮喘應(yīng)有治療作用。對哮喘的治療作用可能是通過間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs對哮喘氣道炎癥及氣道重塑的作用和間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs對哮喘炎癥因子分泌的影響。但目前間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs治療哮喘的機(jī)制尚不明確。轉(zhuǎn)化生長因子TGFβ1是個多功能的細(xì)胞因子,它在細(xì)胞生長,分化、免疫調(diào)節(jié)、炎癥和損傷修復(fù)等方面發(fā)揮重要的作用[15-17]。乳動物體內(nèi)至少發(fā)現(xiàn)有轉(zhuǎn)化生長因子β1、轉(zhuǎn)化生長因子β2、轉(zhuǎn)化生長因子β33個亞型,其中以轉(zhuǎn)化生長因子β1在人體細(xì)胞所占比例最高,并可由多種細(xì)胞合成和分泌[18,19]。轉(zhuǎn)化生長因子TGFβ1最初以潛活性復(fù)合物形式存在于細(xì)胞外基質(zhì)中,當(dāng)機(jī)體受到機(jī)械應(yīng)力、創(chuàng)面修復(fù)、組織損傷和炎癥時,轉(zhuǎn)化生長因子TGFβ1在體內(nèi)纖溶酶或其他蛋白酶作用下,使?jié)摶钚詮?fù)合物中的潛活性相關(guān)肽(latency associated peptide, LAP)與TGFβ二聚體分開,釋放活性TGFβ發(fā)揮生物學(xué)效[20,21]�；罨腡GFβ的二聚體先與兩個Ⅱ型受體的二聚體結(jié)合,此復(fù)合物接著再募集兩個Ⅰ型受體�；罨蘑裥褪荏w可以磷酸化其下游信號分子-受體活化Smad2和Smad3。被磷酸化的Smad2和Smad3接著與Smad4形成三聚體復(fù)合物,這一復(fù)合物可進(jìn)入細(xì)胞核,在DNA結(jié)合輔助因子的幫助下與DNA上被Smad結(jié)合元件的區(qū)域結(jié)合后誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄。近期研究發(fā)現(xiàn)TGFβ1也在氣道修復(fù)重塑中起重要,而且發(fā)現(xiàn)在哮喘病人及過敏原誘導(dǎo)的哮喘小鼠的氣道中發(fā)現(xiàn)活化的TGFβ1明顯增加[7,22]。因此,本研究的主要目的是：1.蟑螂過敏原建立哮喘小鼠模型并觀察肺內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞的募集和TGFβ1的活化；2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定；3.TGFβ1對間充質(zhì)干細(xì)胞在蟑螂過敏原誘導(dǎo)下的募集與遷移的影響；4.間充質(zhì)干細(xì)胞在蟑螂過敏原誘導(dǎo)的過敏性炎癥中的作用及機(jī)制以及TGFβ1在這個過程中的作用。材料和方法1.在本研究中以6-8周體重相匹配的雌性C57BL/6J、Nes-GFP、鼠為研究對象。小鼠通過蟑螂過敏原致敏和激發(fā)建立哮喘模型。所有的小鼠嚴(yán)格依照霍普金斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院對動物的要求,所有小鼠均需在無特異性病原體的環(huán)境下生長。動物實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目已獲得了霍普金斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院的各項(xiàng)許可(動物項(xiàng)目：M013M308)。2. 通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA檢測肺泡灌洗液、血清中以及條件培養(yǎng)基中活化型TGFβ1表達(dá)水平及IL-4、IL-13、INFy和IL-17A等細(xì)胞因子在肺泡灌洗液中的表達(dá)。3.通過流式細(xì)胞學(xué)分析肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及粒細(xì)胞各自占細(xì)胞總數(shù)的百分比；鑒定從骨髓中分離培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞；檢測肺門淋巴結(jié)中調(diào)節(jié)T細(xì)胞所占的百分比。4.肺組織HE染色觀察肺組織炎癥；免疫組織化學(xué)染色觀察間充質(zhì)干細(xì)胞在肺組織募集及p-Smad2/3在肺組織的表達(dá)；免疫熒光染色觀察p-Smad2／3在蟑螂過敏原刺激后的間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)；追蹤間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs在體內(nèi)募集和遷移；5.通過全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并對第三代細(xì)胞進(jìn)行茜素紅Alizarin Red、油紅O和甲苯胺藍(lán)染色,鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞在是否分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞。6. Western blot檢測p-Smad2/3和Smad2/3在蟑螂過敏原刺激后的間充質(zhì)干細(xì)胞中的蛋白表達(dá)水平。7.通過Real- time PCR檢測M1型和M2型巨噬細(xì)胞的細(xì)胞因子和表面分子的表達(dá)。8.通過體外細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)觀察間充質(zhì)干細(xì)胞在體外遷移。9.統(tǒng)計學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±S E)表示,應(yīng)用IBM SPSS Statistics22軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。樣本均數(shù)采用單樣本t檢驗(yàn)(one-sample t test)和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(Independent-sample t test)。滿足方差齊性要求時,多組樣本均數(shù)采用方差分析(One-Way ANOVA).多重比較采用bonferroni法；不滿足方差齊性要求時,多組樣本采用Welch法,多重比較采用Dunnett's T3法。P0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果1.蟑螂過敏原明顯增加氣道炎癥建立蟑螂過敏原提取物CRE誘導(dǎo)的哮喘模型。與PBS對照組相比,實(shí)驗(yàn)組經(jīng)過CRE致敏和激發(fā)后明顯增加炎癥細(xì)胞總數(shù),其中嗜酸性粒細(xì)胞,中性粒細(xì)胞,肥大細(xì)胞和淋巴細(xì)胞也顯著增加。而且組織學(xué)染色也發(fā)現(xiàn)與對照組相比,CRE誘導(dǎo)的小鼠模型肺中招募了較多的炎癥細(xì)胞,同時也增加了血清中蟑螂過敏原特異性IgE。2間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs在蟑螂過敏原刺激的小鼠肺組織中募集增加為了研究是否經(jīng)過CRE致敏和刺激后間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs能遷移到氣道中。已有體外研究報道巢蛋白nestin可以作為骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCs的標(biāo)記物。組織切片分析顯示與對照組PBS刺激相比,經(jīng)CRE刺激后小鼠肺組織上皮和皮下細(xì)胞中有較多數(shù)量的nestin+細(xì)胞。3 TGF β1信號通路在CRE刺激的小鼠肺組織中和CRE刺激的間充質(zhì)干細(xì)胞中被激活我們最近的研究已經(jīng)證明從損傷血管中激活的TGFβ1能夠調(diào)節(jié)間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs的動員和募集來參與組織的修復(fù)和重塑[23]。為了研究是否TGFβ1信號通路參與間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs在哮喘肺組織的遷移,我們檢測CRE誘導(dǎo)的小鼠的肺泡灌洗液(BALF)和血液中活化的TGFβ1的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照PBS組小鼠相比,CRE刺激的小鼠肺泡灌洗液和外周血中活化的TGFβ1表達(dá)水平顯著增加,組織學(xué)染色發(fā)現(xiàn)有較多的磷酸化Smad2/3+的氣道上皮及上皮下的炎癥細(xì)胞。同樣發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs經(jīng)過蟑螂過敏原刺激后能分泌較多激活的TGFβ1。Western Blot顯示與對照組相比,經(jīng)過CRE刺激后間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs上 p-Smad2/3表達(dá)增加。免疫熒光進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)蟑螂過敏原CRE能增加間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs激活的TGFβ1信號。4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCs的形態(tài)間充質(zhì)干細(xì)胞為貼壁生長細(xì)胞,且可以聚集成均勻的細(xì)胞集落,形成纖維樣的細(xì)胞克隆。原代間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)時,細(xì)胞接種3-4小時后開始貼壁,24小時大量貼壁；2-3天形成部分集落,7-10天開始迅速擴(kuò)增,顯微鏡下觀察到以梭形細(xì)胞為主,胞漿豐富,核大,細(xì)胞平行或呈渦旋狀盤旋排列；14天左右細(xì)胞融合達(dá)80%-90%,可傳代培養(yǎng)。5骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCs的鑒定及分化由于間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs缺乏特異性的表面標(biāo)志物,因而骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng)較難獲得純的間充質(zhì)干細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs通過熒光激活細(xì)胞分選法(fluorescence activated cell sorting,FACS)Sca-1,CD29,CD45和CD11b四種抗體分離,表達(dá)出Sca-1+ CD29+ CD11b-CD45-的細(xì)胞即為間充質(zhì)干細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs在不同的條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)下能夠分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞。通過檢測α-SMC(abcam)表達(dá)來評價間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs分化為平滑肌樣細(xì)胞,間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs經(jīng)過TGFβ1(2.5ng/m1)誘導(dǎo)72小時后,免疫熒光染色,DAPI染核后發(fā)現(xiàn)表達(dá)較多α-smooth muscle actin(α-SMA)。6 轉(zhuǎn)化生長因子TGF β 1介導(dǎo)由人上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移為了檢測在外界環(huán)境過敏原的刺激下上皮細(xì)胞釋放的活化的TGFβ1能夠誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs遷移,我們進(jìn)行了細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。與未經(jīng)CRE刺激的人上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基相比,經(jīng)CRE刺激的人氣道上皮條件培養(yǎng)基組里面遷移了較多的間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs,而且TGFβ1的表達(dá)水平也增加。為了進(jìn)一步檢測是否TGFβ1在間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs的遷移中起重要作用,我們首先檢測了人上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基中激活的TGFp1的表達(dá)水平。與DMEM和未經(jīng)CRE刺激的人上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基相比,經(jīng)過CRE刺激的人上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基表達(dá)了較多的激活的TGFβ1。進(jìn)一步為了檢測在人上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基中活化的TGFβ1在間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs的遷移中起重要作用,在人上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基中加入TGFβ1中和抗體后間充質(zhì)干細(xì)胞遷移數(shù)量顯著減少。然而在人上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基中加入對照抗體IgG或加入能誘導(dǎo)多種類型細(xì)胞遷移的趨化因子SDF-1a/CXCL12抗體后對間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs的遷移沒有影響。進(jìn)一步當(dāng)在人上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基中加入不同濃度的TGFβ受體TβRI激酶抑制劑SB50512(0.5,1.0,和2.0μM)后,間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移顯著被抑制(以濃度依賴性方式)。為了進(jìn)一步確認(rèn)TGFβ1在間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs遷移中的直接作用,在DMEM中加入不同濃度的重組的TGFβ1(5,10 和 20ng/ml)后加入到遷移系統(tǒng)小室下層,發(fā)現(xiàn)DMEM中加入重組TGFβ1后有較多的間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs發(fā)生遷移,且以濃度依賴的方式。7 TGFβ1介導(dǎo)內(nèi)源性間充質(zhì)干細(xì)胞向肺組織募集和遷移為了在體內(nèi)追蹤內(nèi)源性間充質(zhì)干細(xì)胞的募集和遷移,我們用Nes-GFP轉(zhuǎn)基因小鼠,分為3組：PBS組、CRE組和CRE+TGFβAb組建立蟑螂過敏原誘導(dǎo)的哮喘模型。Nes-GFP小鼠經(jīng)過CRE刺激后GFP+MSCs在氣道和肺泡灌洗液中顯著增加。給Nes-GFP小鼠注入TGFβ1中和抗體后,增加的GFP+MSCs顯著減少。為了研究是否有間充質(zhì)干細(xì)胞從外周血募集到肺組織,我們在原來建立的哮喘模型基礎(chǔ)上,在刺激的第一天(D10)通過小鼠尾部右側(cè)靜脈注射GFP+MSCs(1x106)。與CRE+PBS組相比,CRE+MSCs肺組織中募集了較多的GFP+細(xì)胞。然而與CRE+MSCs相比,CRE+MSCs+TGFβ1Ab組抑制了GFP+細(xì)胞在肺組織的募集。8間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs抑制了蟑螂過敏原誘導(dǎo)的過敏性炎癥在小鼠體內(nèi)注入GFP+MSCs后,我們也觀察了MSCs對于過敏性炎癥的影響。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)與CRE+PBS組相比,CRE+MSCs組肺泡灌洗液中總細(xì)胞數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞明顯減少,同時肺組織HE染色提示氣管周圍炎癥細(xì)胞浸潤顯著減少。進(jìn)一步驗(yàn)證TGFβ1在間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs抑制炎癥和氣道修復(fù)中的作用,結(jié)果顯示與CRE+MSCs組相比,CRE+MSCs+　TGFpl組肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)顯著增加,其中嗜酸性粒細(xì)胞增加較為明顯,肺組織氣管周圍炎癥細(xì)胞浸潤顯著增加。同時我們也進(jìn)一步檢測了肺泡灌洗液中各種細(xì)胞因子的表達(dá)。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)與CRE+PBS組相比,CRE+MSCs組Th2細(xì)胞因子IL-4,IL-13及IL-17A的表達(dá)顯著減少,而Thl細(xì)胞因子IFNγ表達(dá)稍增加。9間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs可通過增加調(diào)節(jié)T細(xì)胞抑制炎癥我們通過流式細(xì)胞分析檢測了肺門淋巴結(jié)中CD4+CD25+FoxP3+　Treg的百分比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與CRE+PBS相比,CRE+MSCs組增加了調(diào)節(jié)T細(xì)胞的百分比。而與CRE+MSCs組相比,CRE+MSCs+　TGFβ1組調(diào)節(jié)T細(xì)胞的比例沒有顯著的差別。10間充質(zhì)干細(xì)胞能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的極化M2型巨噬細(xì)胞具有抗炎和組織修復(fù)的功能,為了進(jìn)一步闡明間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs抑制蟑螂過敏原誘導(dǎo)的過敏性炎癥,我們假設(shè)間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs能夠調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的極化。為了驗(yàn)證這一假說,我們從各組小鼠肺組織中分離培養(yǎng)出巨噬細(xì)胞,RT-PCR結(jié)果顯示與CRE+PBS相比,CRE+MSCs組M2型細(xì)胞表面分子Arg-1、FIZZ1和YM-1表達(dá)增加,M1型巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子IL-1β、IL-6和NOS2表達(dá)減少。與CRE+MSCs 組相比,CRE+MSCs+　TGF β1組M2型細(xì)胞表面分子Arg-1表達(dá)降低,FIZZ1和YM-1表達(dá)有顯著降低趨勢；M1型巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子IL-1β、IL-6和NOS2表達(dá)有顯著增加。結(jié)論1.蟑螂過敏原致敏和激發(fā)后成功建立哮喘小鼠模型。2.間充質(zhì)干細(xì)胞在CRE誘導(dǎo)的哮喘小鼠肺組織中募集,且TGFβ1被激活。3.從小鼠骨髓中成功分離出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并成功誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞。4.間充質(zhì)干細(xì)胞在CRE刺激下在體外可以發(fā)生遷移,在體內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞可以從骨髓和血液中向肺組織募集和遷移,TGFβ1在體內(nèi)和體外可以調(diào)節(jié)間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移。5.間充質(zhì)干細(xì)胞能改善CRE誘導(dǎo)的過敏性炎癥。減少Th2細(xì)胞因子表達(dá),上調(diào)了調(diào)節(jié)T細(xì)胞的百分比及誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞極化,且TGFβ1參與間充質(zhì)干細(xì)胞抑制炎癥的過程。綜上所述,間充質(zhì)干細(xì)胞在CRE致敏和激發(fā)后能夠從骨髓或者外周血中向氣道損傷或炎癥部位募集和遷移,可以通過降低Th2細(xì)胞因子表達(dá)、上調(diào)肺門淋巴結(jié)中調(diào)節(jié)T細(xì)胞的比例、誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型極化等途徑來改善蟑螂過敏原誘導(dǎo)的過敏性炎癥。經(jīng)蟑螂CRE刺激后產(chǎn)生的TGFβ1是能夠調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs遷移的一個主要的促遷移因子,且參與間充質(zhì)干細(xì)胞抑制炎癥的過程。此研究為臨床上用間充質(zhì)干細(xì)胞治療哮喘提供了有力的證據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 哮喘 轉(zhuǎn)化生長因子β1遷移 調(diào)節(jié)T細(xì)胞 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 摘要3-11
• ABSTRACT11-22
• 前沿22-29
• 第一章 轉(zhuǎn)化生長因子β1參與間充質(zhì)干細(xì)胞向蟑螂過敏原刺激的哮喘肺組織中募集和遷移29-45
• 1.1 前沿29-30
• 1.2 材料和方法30-37
• 1.3 結(jié)果37-39
• 1.4 討論39-45
• 第二章 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定45-56
• 2.1 前沿45-46
• 2.2 材料和方法46-51
• 2.3 結(jié)果51-54
• 2.4 討論54-56
• 第三章 轉(zhuǎn)化生長因子β1對間充質(zhì)干細(xì)胞募集遷移的影響56-76
• 3.1 前沿56-57
• 3.2 材料和方法57-65
• 3.3 結(jié)果65-72
• 3.4 討論72-76
• 第四章 體內(nèi)移植間充質(zhì)干細(xì)胞對蟑螂過敏原誘導(dǎo)炎癥的作用及機(jī)制76-100
• 4.1 前沿76-77
• 4.2 材料和方法77-88
• 4.3 結(jié)果88-94
• 4.4 討論94-100
• 全文小結(jié)100-102
• 參考文獻(xiàn)102-113
• 攻讀學(xué)位期間的成果113-115
• 致謝115-118
• 附件118-119

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陽玉群;莫雪安;農(nóng)偉東;楊龍秀;孔德燕;張?zhí)i;劉金萍;;全骨髓貼壁改良培養(yǎng)法體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2013年02期

2 吳治林;侯天勇;劉杰;王序全;許建中;;個體化組織工程骨與同種異體骨修復(fù)骨纖維異常增殖癥術(shù)后骨缺損的對比研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2014年09期

3 鄭得亮;毛偉征;馬貴亮;;IKKβ-RNAi腺病毒構(gòu)建及其HEK293T細(xì)胞表達(dá)[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年01期

4 李海峰;;阿奇霉素治療小兒反復(fù)呼吸道感染的臨床研究[J];臨床醫(yī)學(xué);2015年05期

5 王倩;劉玉琳;張湛美;羅征秀;羅健;;哮喘患兒家長疾病認(rèn)知管理水平研究[J];成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年06期

6 冉黎婧;史明霞;洪敏;;間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢機(jī)制研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2014年04期

7 王海峰;陳文;劉艷艷;吳王澤;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)及鑒定[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2014年02期

8 XU JianFeng;HUANG ZheYong;LIN Li;FU MingQiang;GAO YanHua;SHEN YunLi;ZOU YunZeng;SUN AiJun;QIAN JuYing;GE JunBo;;miR-210 over-expression enhances mesenchymal stem cell survival in an oxidative stress environment through antioxidation and c-Met pathway activation[J];Science China(Life Sciences);2014年10期

9 李良昌;樸紅梅;秦向征;延光海;李光昭;;羌活提取物對哮喘小鼠Thl/Th2細(xì)胞平衡的影響及其對p38信號通路的作用[J];解剖學(xué)報;2013年06期

10 文亞男;郭明廣;鄧錦波;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];河南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2015年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陽喬;單核/巨噬細(xì)胞在肝衰竭中的作用及調(diào)節(jié)機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2013年

2 徐巍;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對光損傷視網(wǎng)膜的保護(hù)作用與機(jī)制[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

3 姜飚;HMGB1在胃癌中表達(dá)及siRNA對胃癌細(xì)胞活性影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

4 李春燕;基于腸道菌群結(jié)構(gòu)與功能分析的支氣管哮喘維、西醫(yī)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

5 歷志;Notch信號調(diào)控巨噬細(xì)胞參與心梗重塑的作用和分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 高飛;年齡相關(guān)性巨噬細(xì)胞極化對骨修復(fù)再生作用的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

7 賀強(qiáng);調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th17細(xì)胞在肝移植免疫中失衡表達(dá)的研究[D];中南大學(xué);2013年

8 王瑋;巨噬細(xì)胞在潰瘍性結(jié)腸炎癌變過程中表型分布及功能變化的動態(tài)研究[D];中南大學(xué);2013年

9 莊園;Tc17細(xì)胞在胃癌中的表達(dá)調(diào)控及作用機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

10 姜志超;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）與淋巴瘤細(xì)胞相互作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王佳;體外“心肌樣”環(huán)境下GATA-4基因促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 陽玉群;甘露醇對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療血管性癡呆模型大鼠行為學(xué)及Nogo蛋白表達(dá)影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

3 黃泓泰;兩種G20株CA16病毒顆粒的生物學(xué)特性的分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

4 唐凱峰;知母皂苷對肥大細(xì)胞活化影響及機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2013年

5 楊寶宏;乳腺癌患者髓系來源抑制細(xì)胞的臨床觀察及相關(guān)免疫耐受機(jī)制探討[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

6 呂鳳瓊;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞立體定向移植治療大鼠腦缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

7 孫婧;辛伐他汀對巨噬細(xì)胞極性的影響[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2013年

8 黃懿文;模擬微重力狀態(tài)下過氧化物酶體增殖物激活受體γ基因表達(dá)對成骨分化的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

9 蒲曉姝;aFGF誘導(dǎo)大鼠BMSCs分化為NSCs的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

10 謝敏;非特異性免疫疫苗通過調(diào)節(jié)Th1/Th2/Treg/Th17平衡對小鼠急性哮喘的作用[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2013年

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)化生長因子β1在蟑螂過敏原誘導(dǎo)的哮喘中對間充質(zhì)干細(xì)胞募集遷移的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：458651