本文關(guān)鍵詞：C-反應(yīng)蛋白通過對T細(xì)胞分化的直接調(diào)控參與后天免疫應(yīng)答，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, CRP)是當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)或者組織損傷時(shí),在血液中出現(xiàn)的一種急性期蛋白,其在臨床上經(jīng)常作為一種炎癥反應(yīng)的非特異性標(biāo)示。長期以來,CRP是作為一種可溶性的模式識(shí)別分子,是機(jī)體內(nèi)出現(xiàn)的最早的保護(hù)機(jī)制之一,最重要的功能就是參與宿主防御、阻止病原體入侵,進(jìn)而在先天免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要功能。CRP可以識(shí)別外來抗原和自身抗原,通過結(jié)合單核細(xì)胞和者巨噬細(xì)胞表面的Fc7受體,促進(jìn)外來病原體的清除,在體內(nèi)發(fā)揮清道夫的功能；同時(shí)CRP可以活化經(jīng)典的補(bǔ)體系統(tǒng),但最終并不會(huì)形成膜攻擊復(fù)合物,進(jìn)而對機(jī)體的免疫系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)理作用,所以早期的研究認(rèn)為CRP是先天免疫系統(tǒng)中的關(guān)鍵分子,主要參與先天免疫應(yīng)答。然而,近年來隨著CRP與動(dòng)脈粥樣硬化(AS)等心血管疾病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和多發(fā)性硬化(MS)等自身免疫病的研究發(fā)現(xiàn),CRP在這些疾病中所發(fā)揮的功能,已經(jīng)不僅僅停留在先天免疫范疇,CRP在后天免疫應(yīng)答中也可能具有一定的作用。尤其是在2002年-2007年間,Alexander J. Szalai等人在一些自發(fā)性和誘導(dǎo)性的自身免疫疾病小鼠中,比如EAE、SLE等,單次注射CRP或者CRPtg小鼠可以逆轉(zhuǎn)這些疾病的發(fā)生,使得小鼠的存活延長,并且在小鼠發(fā)病前或者發(fā)病后注射CRP都是有效果的。遺憾的是這些動(dòng)物模型研究僅僅是通過對小鼠病情變化程度的評估,證實(shí)了CRP對這些疾病的逆轉(zhuǎn)作用的存在,至于CRP注射進(jìn)體內(nèi)后到底是和誰發(fā)生了相互作用,是通過直接的方式參與后天免疫應(yīng)答還是通過一種間接地方式來影響后天免疫應(yīng)答,目前并沒有明確的結(jié)果。發(fā)掘CRP在后天免疫系統(tǒng)中的功能,就是我們的研究目標(biāo)。首先,我們通過流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光發(fā)現(xiàn)CRP可以與Jurkat T細(xì)胞和Mouse Naive T細(xì)胞表面發(fā)生結(jié)合,而且這種結(jié)合是不依賴于傳統(tǒng)己知的CRP受體,用EDTA/PC洗脫和酶消化實(shí)驗(yàn)證實(shí)這種結(jié)合不依賴于鈣離子的存在且對PC不敏感,推測很可能是一種新的CRP受體；其次,通過Real time PCR和細(xì)胞因子ELISA發(fā)現(xiàn),CRP刺激T細(xì)胞后可以改變T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力,表現(xiàn)為促進(jìn)IL-4的分泌、而抑制IFN-gamma的分泌,進(jìn)而推測CRP可能直接影響Th分化,隨后就通過流式在單細(xì)胞水平上證明了CRP確實(shí)可以影響到Thl/Th2的分化；再次,我們對CRP調(diào)控Thl/Th2分化所涉及的分子機(jī)制進(jìn)行了一定探討,檢測與Th1/Th2分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3、p-STAT-1、p-STAT-4和p-STAT-6的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)IL-2/IL-2R信號(hào)可能參與到CRP與Thl/Th2的應(yīng)答中；最后,我們在EAE疾病動(dòng)物模型小鼠的在體實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),單次注射CRP或者CRP轉(zhuǎn)基因小鼠都可以使小鼠EAE病情得到明顯的緩解,與此同時(shí)存在著Thl分化的壓制和Th2分化的增強(qiáng),并且Thl/Th2的應(yīng)答無關(guān)于EAE是否已經(jīng)形成,進(jìn)而證明了CRP確實(shí)可以通過對Thl/Th2分化的調(diào)整來逆轉(zhuǎn)小鼠病情,從而對一些自身免疫疾病的控制與治療提供一些理論上的指導(dǎo)。
【關(guān)鍵詞】：C-反應(yīng)蛋白 后天免疫 受體結(jié)合 EAE模型 T細(xì)胞分化
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-12
• 第一章 緒論12-41
• 1.1 C-反應(yīng)蛋白概覽12-20
• 1.1.1 CRP的合成與表達(dá)調(diào)控12-14
• 1.1.1.1 CRP的合成12-13
• 1.1.1.2 CRP的表達(dá)調(diào)控13-14
• 1.1.2 CRP的結(jié)構(gòu)特征14-16
• 1.1.2.1 CRP基本結(jié)構(gòu)14
• 1.1.2.2 CRP的常見配體14-15
• 1.1.2.3 CRP的傳統(tǒng)受體15-16
• 1.1.3 CRP的生物學(xué)功能16-20
• 1.1.3.1 CRP與炎癥應(yīng)答16-18
• 1.1.3.1.1 CRP通過補(bǔ)體活化防止細(xì)菌感染17
• 1.1.3.1.2 CRP通過FcγR/FcαR調(diào)控吞噬作用17-18
• 1.1.3.2 CRP與自身免疫疾病18-19
• 1.1.3.3 CRP與心血管疾病19-20
• 1.2 Th分化20-26
• 1.2.1 Th1分化21-22
• 1.2.2 Th2分化22-23
• 1.2.3 Th17分化23-24
• 1.2.4 Treg分化24
• 1.2.5 Tfh分化24-25
• 1.2.6 Th亞型之間的相互關(guān)系25-26
• 1.3 研究目的26-29
• 1.3.1 課題立意26-28
• 1.3.2 課題意義28-29
• 1.4 實(shí)驗(yàn)材料和方法29-41
• 1.4.1 實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 1.4.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及動(dòng)物29
• 1.4.1.2 實(shí)驗(yàn)所用蛋白29
• 1.4.1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑29
• 1.4.1.4 實(shí)驗(yàn)主要儀器29-30
• 1.4.2 實(shí)驗(yàn)方法30-41
• 1.4.2.1 小鼠脾臟CD4+T細(xì)胞分離30
• 1.4.2.2 小鼠脾臟Naive T細(xì)胞分離30-31
• 1.4.2.3 高純度CRP的制備31-32
• 1.4.2.4 生物素標(biāo)記CRP制備32
• 1.4.2.5 Real time PCR32
• 1.4.2.6 細(xì)胞因子ELISA32-33
• 1.4.2.7 Jurkat和Naive T電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)33
• 1.4.2.8 Th1/Th2體外分化實(shí)驗(yàn)33-34
• 1.4.2.9 T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)34-35
• 1.4.2.10 FCM檢測Th1/Th2分型35
• 1.4.2.11 免疫印跡(WB)實(shí)驗(yàn)35-36
• 1.4.2.12 CRP與活T細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)36
• 1.4.2.13 免疫熒光36-37
• 1.4.2.14 CRP突變體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染37
• 1.4.2.15 雙色免疫組化37-38
• 1.4.2.16 EAE動(dòng)物模型誘導(dǎo)38
• 1.4.2.17 小鼠心臟灌注38-39
• 1.4.2.18 小鼠脊髓的HE染色39
• 1.4.2.19 小鼠脊髓的LFB染色39-40
• 1.4.2.20 小鼠CNS區(qū)淋巴細(xì)胞分離40-41
• 第二章 正文部分41-83
• 2.1 整個(gè)實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)41-42
• 2.1.1 背景介紹41
• 2.1.2 研究方法41-42
• 2.1.3 結(jié)果及分析42
• 2.2 CRP與T細(xì)胞的結(jié)合實(shí)驗(yàn)42-50
• 2.2.1 背景回顧42-43
• 2.2.2 研究思路與方法43-44
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析44-50
• 2.3 CRP在T細(xì)胞上傳統(tǒng)受體的檢測50-53
• 2.3.1 背景回顧51
• 2.3.2 研究思路與方法51
• 2.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析51-53
• 2.4 CRP對T細(xì)胞功能影響53-58
• 2.4.1 背景回顧54
• 2.4.2 研究思路與方法54
• 2.4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析54-58
• 2.5 CRP對Th1和Th2分化的影響58-64
• 2.5.1 背景回顧58
• 2.5.2 研究思路與方法58-59
• 2.5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析59-64
• 2.6 CRP預(yù)孵育對Th1/Th2分化的影響64-66
• 2.6.1 背景回顧64
• 2.6.2 實(shí)驗(yàn)思路與方法64-65
• 2.6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析65-66
• 2.7 CRP對分化好的Th1和Th2的相互作用66-68
• 2.7.1 背景回顧66-67
• 2.7.2 研究思路與方法67
• 2.7.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析67-68
• 2.8 CRP對CD4+T細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)68-70
• 2.8.1 背景回顧68
• 2.8.2 研究思路與方法68
• 2.8.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析68-70
• 2.9 CRP對Th1和Th2分化中其他關(guān)鍵因子的影響70-72
• 2.9.1 背景回顧70
• 2.9.2 研究思路與方法70-71
• 2.9.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析71-72
• 2.10 CRP與Naive T/CD4+T細(xì)胞的共定位研究72-74
• 2.10.1 背景回顧72-73
• 2.10.2 研究思路與方法73
• 2.10.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析73-74
• 2.11 CRP對EAE疾病的壓制可能是通過對Th1/Th2直接調(diào)控完成的74-83
• 2.11.1 背景回顧74
• 2.11.2 研究思路與方法74-75
• 2.11.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析75-83
• 第三章 結(jié)果與討論83-89
• 3.1 課題研究成果83-84
• 3.2 課題結(jié)果討論84-89
• 參考文獻(xiàn)89-100
• 在學(xué)期間的研究成果100-101
• 致謝101

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 MA Xiao;JI Shang-Rong;WU Yi;;Regulated conformation changes in C-reactive protein orchestrate its role in atherogenesis[J];Chinese Science Bulletin;2013年14期

  本文關(guān)鍵詞：C-反應(yīng)蛋白通過對T細(xì)胞分化的直接調(diào)控參與后天免疫應(yīng)答，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：440692