本文關(guān)鍵詞：常山酮對(duì)大鼠心臟移植急性排斥反應(yīng)的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分大鼠頸部異位心臟移植模型的構(gòu)建目的：建立穩(wěn)定可靠的Wistar-SD大鼠頸部異位心臟移植模型方法：麻醉固定大鼠后,受體大鼠做頸部切口,摘除一側(cè)頜下腺,并分離同側(cè)頸動(dòng)脈與頸外靜脈,分別套管翻轉(zhuǎn)血管,供體大鼠全身肝素化后結(jié)扎供心除主動(dòng)脈與肺動(dòng)脈以外的其他血管,取下心臟后采用套管法分別連接供心主動(dòng)脈與受體頸動(dòng)脈、供心肺動(dòng)脈與受體頸外靜脈。實(shí)驗(yàn)分組：同系對(duì)照組,供、受體均為SD大鼠；未治療組分別以Wistar大鼠為供體,以SD大鼠為受體。結(jié)果：預(yù)試驗(yàn)25對(duì),成功完成心臟移植16例,成功率約為64%,未使用抗排斥藥物情況下,供心最長(zhǎng)持續(xù)搏動(dòng)8d。正式實(shí)驗(yàn)中,共使用動(dòng)物85對(duì),成功制作心臟移植模型77例,手術(shù)成功率約為90.6%,平均手術(shù)時(shí)間103.0＋5.0 mmin。術(shù)后大鼠蘇醒快,供心搏動(dòng)有力,病理切片檢查顯示未治療組排斥反應(yīng)嚴(yán)重,而同系對(duì)照組僅有輕微炎癥反應(yīng)。結(jié)論：通過改良的自制套管,成功構(gòu)建了大鼠頸部異位心臟移植模型,該方法制作模型成功率高,且無需使用顯微放大設(shè)備,適合推廣。第二部分常山酮對(duì)大鼠心臟移植模型排斥反應(yīng)初步研究目的：探索常山酮經(jīng)口給藥大鼠的耐受劑量,并初步研究其與IL-17表達(dá)分泌的關(guān)系。方法：建立大鼠頸部異位心臟移植模型,供體均為Wistar大鼠,受體均為SD大鼠,分為4組,每組3對(duì)。未治療組：術(shù)前1d至術(shù)后5d,給予與治療組相同體積的生理鹽水灌胃。常山酮低劑量組：術(shù)前1d至術(shù)后5d,給予常山酮10mg/kg經(jīng)口灌胃；常山酮中劑量組：術(shù)前1d至術(shù)后5d,給予常山酮20mg/kg經(jīng)口灌胃；常山酮高劑量組：術(shù)前1天至術(shù)后5天,給予常山酮30mg/kg經(jīng)口灌胃。并觀察術(shù)后供心搏動(dòng)情況以及受體大鼠的大體情況,于移植術(shù)后第5天將各組大鼠處死后,切取供心,進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR,檢測(cè)IL-17的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：術(shù)后受體大鼠反應(yīng)靈敏,供心搏動(dòng)正常。第5天時(shí),未治療組供心暗紅發(fā)黑,常山酮低中劑量治療,供心外觀鮮紅,僅有少量壞死灶,高劑量組則有兩例大鼠死亡。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)提示中劑量組對(duì)供心IL-17mRNA表達(dá)抑制效果最佳,與低劑量組比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)結(jié)論：常山酮具有抗大鼠心臟移植急性排斥反應(yīng)的作用,實(shí)驗(yàn)中20mg/kg的劑量,大鼠可以耐受且較其他組對(duì)IL-17的抑制效果更佳。高劑量的常山酮(30mg/kg),嚴(yán)重抑制大鼠的正常生理活動(dòng),易導(dǎo)致其死亡。第三部分常山酮與FK506作用于大鼠心臟移植模型的對(duì)比研究目的：將常山酮與FK506分別作用于大鼠心臟移植模型,研究常山酮對(duì)急性排斥反應(yīng)中輔助T細(xì)胞-17(TH17)及其相關(guān)細(xì)胞因子的影響,并探索其中的作用機(jī)制。方法：建立大鼠頸部異位心臟移植模型,同系對(duì)照組供受體均為SD大鼠,其余各組,供體均為Wistar大鼠,受體均為SD大鼠,分為5組,每組17對(duì)。未治療組：術(shù)后不進(jìn)行任何免疫抑制治療。HF治療組：術(shù)前1天至術(shù)后7天,20mg/kg經(jīng)口灌胃。FK506治療組：術(shù)后當(dāng)天至術(shù)后7天,給予1mg/kg,經(jīng)口灌胃。HF+FK506聯(lián)合治療組：給予HF治療,其方案為：術(shù)前1天至術(shù)后7天,同時(shí)給予FK506治療,其方案為：術(shù)后當(dāng)天至術(shù)后7天,給予1mg/kg,兩者均經(jīng)口灌胃。于移植后第3、5、7天每組各處死5只受體大鼠或?yàn)l死大鼠,切取移植心,進(jìn)行病理學(xué)以及分子生物學(xué)檢測(cè),開腹后經(jīng)由下腔靜脈取血5m1左右,離心后留取血清,進(jìn)行血清學(xué)檢查。結(jié)果：SD-SD大鼠同系移植,其供心內(nèi)IL-17及其相關(guān)細(xì)胞因子始終低表達(dá),未治療組中則相反。常山酮及FK506治療均表現(xiàn)出了對(duì)IL-17的一定抑制作用,其中常山酮對(duì)RORyt的作用尤為明顯,同時(shí)能一定程度抑制THl相關(guān)細(xì)胞因子IFN-y的表達(dá),且能明顯抑制TGF-β的表達(dá),但對(duì)于TH2相關(guān)因子IL-4的作用不及FK506。結(jié)論：HF治療能顯著降低IL-17以及轉(zhuǎn)錄因子RORyt的表達(dá),對(duì)于后者的抑制作用強(qiáng)于FK506。 HF對(duì)于TH1/TH2/Treg細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的抑制作用不及FK506,但病理表現(xiàn)上兩者的差距不大。我們認(rèn)為TH17在移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)中起主導(dǎo)作用,HF能有效抑制這一時(shí)期的排斥反應(yīng),而其中RORyt可能為HF作用的重要靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：心臟移植 大鼠模型 套管 頸部 常山酮 劑量 心臟移植 IL-17 心臟移植 常山酮 FK506 TH17/IL17
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要11-13
• ABSTRACT13-16
• 1 前言16-19
• 第一部分：大鼠頸部異位心臟移植模型的構(gòu)建19-32
• 2 材料和方法20-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)器材20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20-21
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法及步驟21-26
• 3 構(gòu)建動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-27
• 3.1 手術(shù)結(jié)果26
• 3.2 大體觀察26
• 3.3 供體心臟存活時(shí)間的觀察26-27
• 3.4 供心的病理學(xué)觀察27
• 4 討論27-32
• 第二部分 常山酮對(duì)大鼠心臟移植模型排斥反應(yīng)初步研究32-38
• 5 材料和方法33-36
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟34-36
• 6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-37
• 6.1 受體大鼠大體觀察36
• 6.2 實(shí)時(shí)定量PCR分析各組移植心臟IL-17mRNA表達(dá)水平36-37
• 7 討論37-38
• 第三部分 常山酮與FK506作用于大鼠心臟移植模型的對(duì)比研究38-66
• 8 材料與方法38-50
• 8.1 實(shí)驗(yàn)用品及動(dòng)物38-41
• 8.2 方法及步驟41-50
• 9 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-61
• 9.1 受體SD大鼠移植手術(shù)后大體觀察結(jié)果50
• 9.2 供體心臟移植術(shù)后組織病理學(xué)觀察結(jié)果50-54
• 9.3 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子的結(jié)果54-59
• 9.4 Western blot檢測(cè)供心IL-17蛋白的表達(dá)59-60
• 9.5 ELISA檢測(cè)受體大鼠血清中IL-17的表達(dá)60-61
• 10 討論61-64
• 11 結(jié)論64-66
• 參考文獻(xiàn)66-69
• 綜述69-78
• 參考文獻(xiàn)74-78
• 附錄78-79
• 致謝79

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本文編號(hào)：412560