流行性感冒(Influenza)是流感病毒導(dǎo)致的強(qiáng)傳染性疾病,一直是人類健康的重大威脅,對(duì)人類社會(huì)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。世界范圍內(nèi)每年約有5%-15%的人口受季節(jié)性流感病毒感染,其中有25-50萬(wàn)人死亡。由于小分子藥物及季節(jié)疫苗的局限性,尋求新的治療及預(yù)防手段迫在眉睫。已報(bào)道的流感抗體的識(shí)別表位主要分為三種。類型一是以FI6v3,CR6261,F10,CR9114以及39.29等為代表,識(shí)別表位位于血球凝集素(HA)的融合亞結(jié)構(gòu)域,包括HA1 N端和C端構(gòu)成的上部和左側(cè),HA2 Helix A構(gòu)成右側(cè),HA2融合肽C端構(gòu)成下部。CR6261,F10只能中和Group1的流感病毒,而FI6v3,39.29及CR9114卻既能中和Group1又能中和Group2的流感病毒。類型二以CR8020為代表,識(shí)別表位更加接近于HA的膜結(jié)合部位,包括Helix A序列前的βsheet及HA2上的融合肽,只能中和Group2的流感病毒。除此之外,類型三兼具以上兩種類型抗體的識(shí)別表位,以MEDI8852及本實(shí)驗(yàn)室早期研發(fā)的3E1為代表。MEDI8852被報(bào)道能廣譜性的中和Group1和Group2的流感病毒,...

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 流感病毒簡(jiǎn)介
        1.1.1 流行性感冒簡(jiǎn)介
        1.1.2 流感病毒的基本結(jié)構(gòu)及分類
        1.1.3 流感病毒的生活史
        1.1.4 流感病毒的抗原漂變及抗原轉(zhuǎn)變
        1.1.5 流感病毒表面糖蛋白血凝素的結(jié)構(gòu)及變構(gòu)
    1.2 目前預(yù)防和治療流感的主要策略
        1.2.1 流感病毒疫苗的研發(fā)狀況及利弊
        1.2.2 流感病毒小分子藥物的研發(fā)狀況及利弊
    1.3 流感病毒廣譜中和抗體的研究進(jìn)展及發(fā)展趨勢(shì)
        1.3.1 流感病毒廣譜中和抗體的主要研究進(jìn)展
        1.3.2 已經(jīng)在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的流感病毒抗體藥物
    1.4 流感病毒廣譜中和抗體的應(yīng)用價(jià)值及未來(lái)研究方向
第2章 實(shí)驗(yàn)材料及實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 疫苗
        2.1.3 倫理
        2.1.4 質(zhì)粒、菌株及細(xì)胞
        2.1.5 抗體及蛋白
        2.1.6 流感病毒
        2.1.7 試劑耗材
        2.1.8 基因序列
        2.1.9 實(shí)驗(yàn)所用溶液
        2.1.10 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 特異性記憶B細(xì)胞的獲得
        2.2.2 抗體表達(dá)與純化
        2.2.3 ELISA檢測(cè)抗體結(jié)合抗原的活性
        2.2.4 抗體親和力(KD值)檢測(cè)
        2.2.5 病毒TCID₅₀測(cè)定
        2.2.6 病毒微中和實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 抗體抑制HA0 酶切實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 抗體抑制HA構(gòu)象變化實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 抗體抑制膜融合實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 HA蛋白變性實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 三聚體HA蛋白的表達(dá)與純化
        2.2.13 凝膠過(guò)濾層析純化蛋白
        2.2.14 12mAb Fab-HA復(fù)合物制備
        2.2.15 冷凍樣品的制備、數(shù)據(jù)收集、單顆粒法三維重構(gòu)及抗體同源建模
        2.2.16 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 12 mAb的發(fā)現(xiàn)與制備
        3.1.1 志愿者血清學(xué)檢測(cè)
        3.1.2 12 mAb的研發(fā)流程
        3.1.3 小結(jié)
    3.2 12 mAb的基本特征
        3.2.1 12 mAb的胚系基因信息總結(jié)
        3.2.2 體細(xì)胞突變對(duì)12mAb的親和力的影響
        3.2.3 小結(jié)
    3.3 體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)12mAb可以廣譜性的中和Group2 的流感病毒
        3.3.1 12 mAb的體外結(jié)合活性及中和活性檢測(cè)
        3.3.2 小結(jié)
    3.4 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)12mAb對(duì) H3N2 流感病毒表現(xiàn)出很好的保護(hù)作用
        3.4.1 12 mAb對(duì) H3N2 流感病毒的預(yù)防效果檢測(cè)
        3.4.2 12 mAb對(duì) H3N2 流感病毒的治療效果檢測(cè)
        3.4.3 小結(jié)
    3.5 12 mAb通過(guò)抑制HA蛋白的構(gòu)象變化從而抑制病毒入侵宿主細(xì)胞
        3.5.1 12 mAb不能抑制流感病毒HA與宿主細(xì)胞表面唾液酸受體的結(jié)合
        3.5.2 12 mAb能抑制低pH誘導(dǎo)的病毒包膜與宿主胞膜的膜融合
        3.5.3 12 mAb能抑制HA0 的酶切及低pH值誘導(dǎo)的HA的構(gòu)象變化
        3.5.4 小結(jié)
    3.6 12 mAb Fab-H3N2 HA復(fù)合物的冷凍電鏡結(jié)構(gòu)解析
        3.6.1 12 mAb Fab-HA復(fù)合物制備
        3.6.2 12 mAb Fab-H3N2 HA復(fù)合物的整體三維結(jié)構(gòu)重構(gòu)
        3.6.3 12 mAb相對(duì)于其它抗體的識(shí)別表位及作用方式更加獨(dú)特
        3.6.4 小結(jié)
    3.7 12 mAb對(duì) H3N2 流感病毒的結(jié)合及中和活性要優(yōu)于MEDI
        3.7.1 12 mAb與 MEDI8852 對(duì)多株H3N2 流感病毒的結(jié)合活性檢測(cè)
        3.7.2 12 mAb與 MEDI8852 對(duì)多株H3N2 流感病毒的中和活性檢測(cè)
        3.7.3 小結(jié)
    3.8 12 mAb在 H3N2 HA的識(shí)別表位中包括一段線性序列
        3.8.1 12 mAb對(duì)線性的H3N2 HA依然具有很高的結(jié)合活性
        3.8.2 HA截短實(shí)驗(yàn)找到這段線性序列大約位于HA2的58-75 位氨基酸
        3.8.3 小結(jié)
    3.9 體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)12mAb對(duì) H1N1 流感病毒也有中和活性
        3.9.1 12 mAb對(duì) H1N1 流感病毒的結(jié)合活性及中和活性檢測(cè)
        3.9.2 12 mAb對(duì) H1N1 流感病毒的體內(nèi)預(yù)防及治療效果檢測(cè)
        3.9.3 12 mAb抑制H1N1 流感病毒感染的作用機(jī)制
        3.9.4 12 mAb不能結(jié)合線性化的H1N1 HA蛋白
        3.9.5 小結(jié)
    3.10 12 mAb Fab-H1N1 HA復(fù)合物的冷凍電鏡結(jié)構(gòu)解析
        3.10.1 12 mAb Fab-H1N1 HA復(fù)合物制備
        3.10.2 12 mAb Fab-H1N1 HA復(fù)合物的整體三維結(jié)構(gòu)重構(gòu)
        3.10.3 12 mAb Fab在 H3N2 HA及 H1N1 HA中的識(shí)別表位不同
        3.10.4 小結(jié)
第4章 結(jié)論與討論
    4.1 本課題的主要結(jié)論
    4.2 本課題的研究意義
第5章 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果
專業(yè)綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：4029470