結核�。═B）是由結核分枝桿菌（Mtb）感染引起的慢性傳染性疾病。近年來,由于人口流動性增加,艾滋病蔓延以及Mtb耐藥菌株出現等,全球結核病疫情日益加重,全球每年新發(fā)結核病例1000萬人,死亡人數高達150萬,居致死性感染疾病之首。目前中國結核病死亡人數為3.7萬,處于結核病高負擔國家前列,因此,結核防治是我國仍需面臨的重大公共衛(wèi)生問題。巨噬細胞是Mtb進入機體的第一道防線,然而諷刺的是,Mtb經長期進化已形成多種調控機制抵御巨噬細胞的殺傷（如抑制吞噬、降低自噬、阻礙凋亡、抑制炎癥等）,使得巨噬細胞不僅喪失了清除Mtb的能力,甚至淪為Mtb躲避機體免疫應答的避難所。近年來,諸多毒力因子被報道參與Mtb免疫逃逸,這些分子通過調控巨噬細胞的免疫功能,增加Mtb在宿主中的生存。然而,Mtb毒力因子的免疫逃逸機制尚不完全清楚。因而,深入探究毒力因子在巨噬細胞中的功能,既可為研究新型結核疫苗尋找潛在的抗原,又可為預防和治療結核病的藥物提供新的靶點。SapM是Mtb重要的分泌型毒力因子,是由H37Rv的3310位基因編碼的一種酸性磷酸酶,主要催化P13P。研究表明,Mtb感染吞噬細胞后,SapM能夠...

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【學位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 毒力因子SapM促進Mtb在巨噬細胞中的生存
    前言
    材料與方法
        一、實驗材料
        二. 實驗方法
    結果
        一. Mtb毒力因子SapM蛋白表達純化及其多克隆抗體的制備
        二. SapM過表達恥垢分枝桿菌(Ms::SapM)的構建及鑒定
        三. H37RvΔSapM的敲除菌株及H37RvΔSapM::SapM回補菌株的構建及鑒定
        四. SapM巨噬細胞穩(wěn)轉株(RAW-SapM)的構建及鑒定
        五. SapM促進巨噬細胞中分枝桿菌的存活
        六. 體內實驗:SapM顯著增加感染小鼠肺部細菌載量的增加
    討論
第二部分 SapM通過抑制Mtb感染的巨噬細胞自噬促進結核分枝桿菌的存活
    前言
    材料與方法
        一、實驗材料
        二. 實驗方法
    結果
        一. SapM抑制雷帕霉素誘導的巨噬細胞發(fā)生自噬
        二. SapM有效抑制Ms感染的巨噬細胞發(fā)生自噬
        三. SapM有效抑制感染Mtb的巨噬細胞發(fā)生自噬
        四. 體內實驗:SapM抑制Ms感染的小鼠肺內細胞發(fā)生自噬
        五. SapM對巨噬細胞自噬的抑制始于起始階段
        六. SapM對巨噬細胞自噬的抑制作用依賴其磷酸酶活性
    討論
第三部分 SapM通過激活mTOR的活性抑制巨噬細胞自噬的起始階段
    前言
    材料與方法
        一、實驗材料
        二. 實驗方法
    結果
        一. SapM可直接結合自噬起始相關分子mTOR
        二. SapM通過激活mTOR的活性抑制巨噬細胞自噬的起始
        三. mTOR結合SapM的功能域分析
        四. SapM結合的mTOR功能域分析
    討論
總結
參考文獻
附錄 綜述
    參考文獻
縮略詞
攻讀學位期間發(fā)表的論文及參加學術會議情況
致謝



本文編號：4029451