本文關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜癌組織VEGF-C啟動子甲基化狀態(tài)與蛋白表達(dá)的檢測及意義，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：子宮內(nèi)膜癌(Endometrial Carcinoma, EC)在育齡期至絕經(jīng)后的任何年齡段均可發(fā)生,是除宮頸癌、卵巢癌之外的第三大婦科惡性腫瘤。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率居高不下,國內(nèi)外研究均顯示呈逐年上升趨勢,且越來越年輕化,在發(fā)達(dá)國家如美國其發(fā)病率高居女性生殖系統(tǒng)癌癥首位,約占50%。在我國每年因該病死亡的病例數(shù)占女性生殖道惡性腫瘤的第二位,且每年有20萬的新發(fā)病例,發(fā)病高峰年齡位于50-69歲。子宮內(nèi)膜癌嚴(yán)重危害女性健康,并且日益受到廣泛關(guān)注,但其發(fā)病機(jī)制尚未充分闡明。子宮內(nèi)膜癌絕大部分為雌激素依賴型(即Ⅰ型)子宮內(nèi)膜樣腺癌,據(jù)臨床觀察,手術(shù)病理證實為雌孕激素受體陽性的早期內(nèi)膜癌患者術(shù)后追加高效的孕激素治療可抑制腫瘤復(fù)發(fā)。再者,基因相關(guān)的如抑癌基因發(fā)生突變、沉默,癌基因發(fā)生過表達(dá),以及微衛(wèi)星不穩(wěn)定和雜合性缺失等是子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的可能分子機(jī)制。經(jīng)脈管系統(tǒng)的侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制是腫瘤患者致死的主要原因,脈管系統(tǒng)包括血管和淋巴管。有研究表明,在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤基質(zhì)中,常能發(fā)現(xiàn)淋巴管的增生和擴(kuò)張。淋巴轉(zhuǎn)移是除直接蔓延外子宮內(nèi)膜癌的另一主要轉(zhuǎn)移途徑,因腫瘤細(xì)胞沿淋巴系統(tǒng)擴(kuò)散給臨床治療帶來了巨大挑戰(zhàn),是治療效果差甚至失敗的重要原因,故發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的病例預(yù)后較差。血管中的血液攜氧,為腫瘤生長提供所需的營養(yǎng),缺少血管,腫瘤生長則受到抑制,只能達(dá)到1-2mm3大小且一般不發(fā)生轉(zhuǎn)移,因此腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移離不開血管的生成。新生血管形成之后,腫瘤細(xì)胞呈指數(shù)倍增,侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)會順應(yīng)性增加。在調(diào)控血管生成的多種因子中,發(fā)揮最強(qiáng)刺激作用的當(dāng)屬血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)及其受體家族。VEGF的分子量從35至44kDa不等,包括VEGF-A,-B(包括VEGF-B167以及VEGF-B186),-C,-D,及-E六個等型,每個等型特異性地與三個血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR-1,-2,-3)的特定組合相結(jié)合。近年來傾向于對VEGF-C、VEGF-D的研究,發(fā)現(xiàn)它們對淋巴管的影響較血管更為突出,一些實驗也已證明在腫瘤侵襲和淋巴管轉(zhuǎn)移過程中VEGF-C起到了關(guān)鍵作用。VEGF-C、VEGF-D與VEGFR-3特異性相結(jié)合,誘導(dǎo)VEGFR-3酪氨酸激酶磷酸化,因VEGFR-3主要表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞,故易引起淋巴管新生、增生和擴(kuò)張,從而導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移。低分化腫瘤細(xì)胞能夠分泌VEGF-C,激活其受體,從而發(fā)生上述反應(yīng)。這一發(fā)現(xiàn)在Da等的研究中也得到了驗證,同時他還指出檢測到VEGF-C過表達(dá)是提示腫瘤是否發(fā)生早期淋巴轉(zhuǎn)移的一項指標(biāo)。環(huán)氧合酶2(Cyclooxygenase-2, COX-2)高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病密切相關(guān),且與VEGF在一些惡性腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移中的協(xié)同作用已經(jīng)得到證實。Fujiwaki等報道,COX-2與腫瘤組織中微血管密度相關(guān),它表達(dá)于子宮內(nèi)膜癌的上皮細(xì)胞而非間質(zhì)細(xì)胞,可能是VEGF的上游因子,并通過誘導(dǎo)VEGF表達(dá)介導(dǎo)微血管和淋巴管生成,從而參與腫瘤的轉(zhuǎn)移。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(Glucose Transporter-1,GLUT-1)在哺乳動物胚胎和成熟組織中低水平廣泛表達(dá),它作為跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖的一種重要載體,主要為組織細(xì)胞提供基礎(chǔ)糖需求。研究表明,GLUT-1在部分癌組織及具有癌變潛能的非典型增生組織中表達(dá)上調(diào)。當(dāng)微環(huán)境缺氧時,為滿足能量需求,細(xì)胞對葡萄糖的吸收、利用增加。而缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia Inducible Factor-1α, HIF-1α)可介導(dǎo)缺氧反應(yīng),上調(diào)GLUT-1的表達(dá)來加速糖代謝過程。DNA曾被認(rèn)為是生命遺傳信息的核心物質(zhì),但是遺傳信息不是基因能夠完全決定的,由此表觀修飾遺傳學(xué)成為我們認(rèn)識基因組的新視點(diǎn),即不影響DNA序列,單純改變基因組修飾就可影響個體發(fā)育并且遺傳下去。作為表觀遺傳學(xué)的主要表現(xiàn)形式,DNA甲基化的作用顯得尤為突出,它是一種由酶介導(dǎo)的化學(xué)修飾,能夠調(diào)節(jié)基因功能,是脊椎動物DNA唯一一種自然共價修飾方式,亦可導(dǎo)致人類多種疾病的發(fā)生和發(fā)展,特別是與惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān),是腫瘤發(fā)生過程中除基因突變和雜合性缺失外,抑癌基因失活的第三種機(jī)制。正常細(xì)胞的CpG島處于非甲基化狀態(tài),當(dāng)抑癌基因啟動子區(qū)CpG島發(fā)生甲基化時,導(dǎo)致基因表達(dá)沉默,抑癌功能喪失。另有研究報道,低甲基化在腫瘤發(fā)展或致癌過程中扮演重要角色,它導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定性增加,并且增加基因突變的頻率。Duan等對胃癌的研究證實了VEGF-C啟動子低甲基化與胃癌發(fā)病的相關(guān)性。因VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá)已實驗得到證實,我們有理由懷疑VEGF-C啟動子異常甲基化(尤其是低甲基化或去甲基化)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。目前最有前途的腫瘤治療方法之一是抗腫瘤血管及淋巴管生成,且有望成為腫瘤患者的福音。關(guān)于VEGF甲基化狀態(tài)與子宮內(nèi)膜癌侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究尚無報道,我們按照該設(shè)想開展實驗研究。本實驗通過檢測各組子宮內(nèi)膜組織(包括正常子宮內(nèi)膜、單純增生內(nèi)膜、復(fù)雜增生內(nèi)膜、不典型增生內(nèi)膜和內(nèi)膜癌)中VEGF-C的甲基化狀態(tài),分析VEGF-C啟動子異常甲基化與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性,并首次聯(lián)合檢測VEGF、COX-2、 GLUT-1和HIF-1 α蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。因DNA甲基化主要是使基因抑癌功能喪失或減弱,我們使用5-aza-dC誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系去甲基化,檢測VEGF-C mRNA表達(dá)水平的改變、甲基化狀態(tài)的變化以及對生物學(xué)行為的影響,以進(jìn)一步探討VEGF-C啟動子甲基化在子宮內(nèi)膜癌侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用。第一部分子宮內(nèi)膜癌組織VEGF-C啟動子甲基化狀態(tài)檢測目的：檢測子宮內(nèi)膜癌(EC)、子宮內(nèi)膜增生(包括單純性增生(Simple hyperplasia、復(fù)雜性增生(Complex hyperplasia, CH)和不典型增生(Atypical hyperplasia, AH))和正常子宮內(nèi)膜(Nomal endometrium, NE)組織中VEGF-C mRNA的表達(dá)及其啟動子的甲基化狀態(tài),并分析兩者的相關(guān)性,初步探討VEGF-C啟動子異常甲基化在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。方法：RT-PCR方法和甲基化特異性PCR (Methylation-specific PCR, MSP)方法分別檢測各組子宮內(nèi)膜組織中VEGF-C mRNA的表達(dá)情況和VEGF-C啟動子的甲基化狀態(tài)。結(jié)果：1.各組子宮內(nèi)膜組織VEGF-C mRNA的表達(dá)情況子宮內(nèi)膜癌和不典型增生子宮內(nèi)膜組織中VEGF-C mRNA的表達(dá)陽性率較高,分別為91.7%(55/60)和83.3%(20/24),而在復(fù)雜性增生內(nèi)膜中VEGF-C mRNA的表達(dá)率明顯下降,僅為28.6%(4/14),在單純性增生和正常子宮內(nèi)膜中均只檢測到1例有VEGF-C mRNA表達(dá),陽性率分別為4.5%(1/22)和1.7%(1/60)。VEGF-C mRNA的表達(dá)水平在子宮內(nèi)膜癌中明顯高于正常子宮內(nèi)膜、單純增生內(nèi)膜和復(fù)雜增生內(nèi)膜組織(P0.01),差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義,而和不典型增生內(nèi)膜組差異不明顯(x2=1.244,P0.05)。不典型增生組明顯高于復(fù)雜增生組(x2=11.396,P0.01)和單純增生組、正常子宮內(nèi)膜組(P0.01),差異具有高度統(tǒng)計學(xué)意義。復(fù)雜增生組明顯高于單純增生組和正常子宮內(nèi)膜組(X2=4.129,13.042,P0.05,0.01)。單純增生組和正常子宮內(nèi)膜組織差異不明顯(x2=0.561,P0.05)。見圖1,表1、3,圖表12.各組子宮內(nèi)膜組織VEGF-C啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)的檢測情況正常子宮內(nèi)膜和單純增生內(nèi)膜組織中VEGF-C啟動子甲基化率較高,分別為83.3%(50/60)和81.8%(18/22),復(fù)雜增生組、單純增生組和子宮內(nèi)膜癌組甲基化率依次降低,其中內(nèi)膜癌組中甲基化率僅15%(9/60)。正常子宮內(nèi)膜和單純增生組、復(fù)雜增生組甲基化差異不明顯(x2=0.026,1.049,P0.05),而和不典型增生組、內(nèi)膜癌組相比差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(x2=33.185,56.049,P0.01)。單純增生組和復(fù)雜增生組相比無明顯差異(x2=0.534,P0.05),而和不典型增生組、內(nèi)膜癌組相比差異明顯(x2=19.526,32.542,P0.01)。復(fù)雜增生組VEGF-C甲基化率明顯高于不典型增生和內(nèi)膜癌組(x2=11.396,18.941,P0.01),差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義。不典型增生組和內(nèi)膜癌組間差異不明顯(x2=0.036,P0.05)。見圖2、3,表2、3,圖表23.VEGF-C啟動子甲基化狀態(tài)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系子宮內(nèi)膜癌組織VEGF-C啟動子甲基化率與年齡、手術(shù)病理分期、組織病理分級無關(guān)(P0.05),與淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,病理證實無淋巴轉(zhuǎn)移者與有淋巴轉(zhuǎn)移者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=9.804,P0.05)。見表44.各組子宮內(nèi)膜組織VEGF-C mRNA表達(dá)和啟動子甲基化的關(guān)系正常子宮內(nèi)膜和單純增生內(nèi)膜→復(fù)雜增生內(nèi)膜→不典型增生內(nèi)膜→子宮內(nèi)膜癌組織中VEGF-C mRNA表達(dá)水平依次升高,而啟動子區(qū)甲基化程度依次減弱。但二者無明顯相關(guān)性(r=-0.104,P0.05)。結(jié)論：1.VEGF-C mRNA高表達(dá)的組織通常甲基化率低,反之,甲基化率高,二者呈相反趨勢,但無直接相關(guān)性。2.VEGF-C基因啟動子區(qū)CpG島的去甲基化或低甲基化狀態(tài)可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定性增加,并參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。3.VEGF-C啟動子甲基化狀態(tài)在子宮內(nèi)膜癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程中可能發(fā)揮重要作用。4.子宮內(nèi)膜癌組織中VEGF-C基因啟動子呈低甲基化狀態(tài),調(diào)控和干預(yù)VEGF-C的甲基化狀態(tài)將可能成為子宮內(nèi)膜癌治療的新方向。趨勢,但無直接相關(guān)性。第二部分子宮內(nèi)膜癌組織中VEGF、COX-2、GLUT-1、HIF-1α的蛋白表達(dá)目的：檢測子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜增生(包括單純性增生、復(fù)雜性增生和不典型增生)和正常子宮內(nèi)膜組織中VEGF、COX-2 GLUT-1和HIF-1α的蛋白表達(dá)情況,以及上述蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系。方法：免疫組織化學(xué)法檢測各組子宮內(nèi)膜組織4種基因的蛋白表達(dá)情況,并進(jìn)行兩兩比較,驗證其相關(guān)性及與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果：1.各組子宮內(nèi)膜組織4種蛋白的表達(dá)情況VEGF、COX-2、GLUT-1和HIF-1α在正常內(nèi)膜組、單純增生組、復(fù)雜增生組、不典型增生組和內(nèi)膜癌中蛋白表達(dá)陽性率依次升高。正常內(nèi)膜組和單純增生組相比無明顯差異(x2=2.517,0.067,0.752,2.761,P0.05),而和復(fù)雜增生組、不典型增生組、內(nèi)膜癌組相比差異均有高度統(tǒng)計學(xué)意義(x2=13.042,24.102,52.004；x2=2.663,23.671,38.763；x2=2.663,30.199,57.416；x2=13.400,42.000,91.765,P均0.01)。單純增生組和復(fù)雜增生組相比無明顯差異(x2=2.338,1.063,3.328,2.469,P0.05),而和不典型增生組、癌組相比,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(x2=7.111,20.790；x2=10.148,16.884；x2=16.611,31.570；x2=15.112,47.492,P均0.01)。VEGF在復(fù)雜增生組中的表達(dá)與不典型增生組相比無明顯差異(x2=0.652,P0.05),與內(nèi)膜癌組相比差異有顯著性(x2=5.589,P0.05)。COX-2、GLUT-1和HIF-1α在復(fù)雜增生組中的表達(dá)與不典型增生組和內(nèi)膜癌組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=3.91,7.549；x2=5.886,14.617；x2=4.871,25.316,P均0.05)。VEGF、COX-2和GLUT-1在不典型增生組的表達(dá)與在內(nèi)膜癌組相比差異均不明顯(x2=3.286,0.578,1.901,P均0.05),而HIF-1 α在兩組間的表達(dá)有明顯差異(x2=8.174,P0.01)。見表1、圖表12.復(fù)雜增生、不典型增生內(nèi)膜和內(nèi)膜癌組織中4種蛋白的表達(dá)情況復(fù)雜增生內(nèi)膜、不典型增生內(nèi)膜和內(nèi)膜癌三組相比,VEGFCOX-2、GLUT-1和HIF-1α的蛋白表達(dá)水平有明顯差異(x2=7.164,7.571,14.689,25.412,P0.05)。見表23.4種蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系子宮內(nèi)膜癌組織中VEGF、COX-2、GLUT-1和HIF-1a的蛋白表達(dá)水平與年齡無關(guān),與手術(shù)病理分期、組織病理分級和有無轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P0.01或0.05),且隨著分期越晚、分化程度越差,蛋白表達(dá)越強(qiáng),有轉(zhuǎn)移者較無轉(zhuǎn)移者表達(dá)陽性率高。見表34.子宮內(nèi)膜癌組織中4種蛋白表達(dá)的相互關(guān)系子宮內(nèi)膜癌組織中VEGF、COX-2、GLUT-1和HIF-1α的蛋白表達(dá)兩兩比較均呈正相關(guān)。結(jié)論：1.子宮內(nèi)膜癌組織中VEGF、COX-2、GLUT-1和HIF-1α蛋白均呈陽性表達(dá),提示以上4種基因與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病密切相關(guān)。2.VEGF、COX-2、GLUT-1和HIF-1α基因在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程中起協(xié)調(diào)作用或促進(jìn)作用。3.實驗表明,VEGF在復(fù)雜增生內(nèi)膜的表達(dá)與不典型增生內(nèi)膜相比無明顯差異,與其他三種基因相反；HIF-1 α在不典型增生內(nèi)膜和內(nèi)膜癌中的表達(dá)差異明顯,而其他三種基因在兩種組織中則無明顯差異�？赡苁菍嶒炚`差導(dǎo)致,亦說明四種基因存在協(xié)同機(jī)制,通常組織惡性程度越高,蛋白表達(dá)越高,但并非每種基因均與內(nèi)膜癌存在明顯相關(guān)性。4.VEGF、COX-2、GLUT-1和HIF-1α基因可能在子宮內(nèi)膜癌的侵襲、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用,研發(fā)上述基因的抑制劑將可能成為抑制子宮內(nèi)膜癌侵襲轉(zhuǎn)移、改善患者預(yù)后的新方法。第三部分子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中VEGF-C基因啟動子甲基化狀態(tài)目的：培養(yǎng)4種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A、Ishikawa, RL-952、HHUA,檢測其VEGF-CmRNA和蛋白表達(dá)情況以及啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài),應(yīng)用去甲基化藥物5-aza-dC處理細(xì)胞系,分析藥物作用前后VEGF-C mRNA和蛋白表達(dá)水平、甲基化狀態(tài)的改變及細(xì)胞生物活性的變化,探討子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的可能機(jī)制及治療思路。方法：細(xì)胞培養(yǎng),繼續(xù)采用RT-PCR方法檢測4種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系去甲基化藥物作用前后VEGF-C mRNA的表達(dá)；VEGF-C啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)和VEGF-C蛋白表達(dá)的改變分別采用MSP法和Western Blot法檢測,并用MTT和流式細(xì)胞術(shù)觀察藥物對細(xì)胞生物活性的影響。結(jié)果：1.4株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中均檢測到VEGF-C mRNA表達(dá)納入本實驗的4株人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A、Ishikawa、RL-952和HHUA均培養(yǎng)至對數(shù)生長期,分別提取細(xì)胞總RNA和總DNA,并檢測細(xì)胞RNA的濃度。同時取1例正常子宮內(nèi)膜的RNA作對照。接著進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,采用RT-PCR方法檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中VEGF-C mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果顯示：4株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系均檢測到VEGF-C mRNA的表達(dá),而正常子宮內(nèi)膜組織未檢測到。見圖12.4株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中部分發(fā)生VEGF-C啟動子甲基化采用MSP方法檢測4株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系VEGF-C啟動子的甲基化狀態(tài),結(jié)果顯示HEC-1A、Ishikawa和RL-952細(xì)胞系檢測到VEGF-C啟動子甲基化,而HHUA細(xì)胞系未檢測到,表現(xiàn)為僅USP-primer有擴(kuò)增產(chǎn)物,MSP-prime r無擴(kuò)增產(chǎn)物。其中HEC-1A為完全甲基化,表現(xiàn)為僅MSP-primer有擴(kuò)增產(chǎn)物USP-primer無擴(kuò)增產(chǎn)物。Ishikawa和RL-952發(fā)生了部分甲基化,表現(xiàn)為擴(kuò)增產(chǎn)物同時出現(xiàn)在M組和U組,但電泳結(jié)果以非甲基化為主。見圖2。3.去甲基化藥物5-aza-dC(10μM)處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系后,細(xì)胞基因組發(fā)生了去甲基化,VEGF-C mRNA的表達(dá)水平受到抑制取對數(shù)生長期的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系,當(dāng)細(xì)胞密度為1×105時接種于六孔板內(nèi),建立對照組(未經(jīng)藥物處理組)、空白對照組(培養(yǎng)液代替藥物組)和實驗組(10μM5-aza-dC藥物處理組),96h后收集細(xì)胞并提取細(xì)胞的總RNA和基因組DNA,采用RT-PCR方法檢測VEGF-C mRNA的表達(dá)水平,比較藥物作用前后表達(dá)水平的變化。結(jié)果表明,細(xì)胞經(jīng)去甲基化藥物作用后,VEGF-C mRNA的表達(dá)受到抑制,HEC-1A細(xì)胞變?yōu)椴糠旨谆?Ishikaw細(xì)胞仍為部分甲基化,RL-952細(xì)胞變?yōu)槿ゼ谆癄顟B(tài)。見圖34.去甲基化藥物5-aza-dC處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系后VEGF-C蛋白表達(dá)降低Western Blot檢測4株子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系VEGF-C蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示4株細(xì)胞系中均檢測到VEGF-C蛋白的表達(dá),去甲基化藥物5-aza-dC處理細(xì)胞后,VEGF-C蛋白表達(dá)水平降低,且與對照組和空白對照組相比差異有顯著性(P0.01),而對照組和空白對照組組間比較無明顯差異(P0.05),說明去甲基化藥物抑制了VEGF-C的基因轉(zhuǎn)錄功能,使蛋白表達(dá)降低。見圖4、表1、圖表15.MTT檢測5-aza-dC作用于子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞后的增殖能力變化通過檢測去甲基化藥物5-aza-dC對HEC-1A細(xì)胞作用的時效關(guān)系,結(jié)果表明經(jīng)10μM 5-aza-dC處理24h,48h,72h、96h后,細(xì)胞增殖能力受到抑制,細(xì)胞活力下降,作用時間越長,這種反應(yīng)越明顯。見圖56.FCM檢測細(xì)胞經(jīng)去甲基化藥物處理后的凋亡現(xiàn)象子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A經(jīng)去甲基化藥物5-aza-dC(10μM)處理后,細(xì)胞凋亡率顯著上升,由3.81%上升至27.04%,抵抗凋亡的能力受到明顯抑制。見圖6結(jié)論：1.子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中檢測到VEGF-C啟動子區(qū)低甲基化狀態(tài),應(yīng)用去甲基化藥物5-aza-dC可使VEGF-C mRNA表達(dá)水平較低,說明子宮內(nèi)膜癌中VEGF-C低甲基化導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定性增加,是腫瘤發(fā)生的重要原因之一。2.子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系經(jīng)去甲基藥物處理后,VEGF-C蛋白表達(dá)水平降低。說明去甲基化藥物抑制了VEGF-C的基因轉(zhuǎn)錄功能,使蛋白表達(dá)降低。3.VEGF-C基因的甲基化水平可作為評估甲基化干預(yù)是否有效的分子學(xué)標(biāo)志物,為子宮內(nèi)膜癌的臨床治療提供新的分子靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 VEGF-C基因 DNA甲基化 甲基化特異性PCR 子宮內(nèi)膜癌 VEGF COX-2 GLUT-1 HIF-1α 免疫組織化學(xué) 子宮內(nèi)膜癌 VEGF-C基因 DNA甲基化 甲基化特異性PCR Western Blot 5-aza-dC
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要8-17
• ABSTRACT17-27
• 符號說明27-30
• 第一部分30-57
• 前言30-31
• 材料和方法31-42
• 結(jié)果42-44
• 討論44-48
• 結(jié)論48-49
• 第一部分相關(guān)圖表49-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 第二部分57-77
• 前言57-58
• 材料與方法58-63
• 結(jié)果63-65
• 討論65-69
• 結(jié)論69-70
• 第二部分相關(guān)圖表70-75
• 參考文獻(xiàn)75-77
• 第三部分77-100
• 前言77-78
• 材料與方法78-88
• 結(jié)果88-90
• 討論90-94
• 結(jié)論94-95
• 第三部分附圖表95-98
• 參考文獻(xiàn)98-100
• 致謝100-101
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄101-102
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表102-103
• 附件103-125

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  本文關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜癌組織VEGF-C啟動子甲基化狀態(tài)與蛋白表達(dá)的檢測及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：401831