本文關鍵詞：扶芳藤益心方對氣虛血瘀證胸痹（慢性穩(wěn)定性心絞痛）的臨床及內皮細胞保護作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:(1)臨床觀察扶芳藤益心方治療氣虛血瘀證胸痹(慢性穩(wěn)定性心絞痛)患者的臨床療效及其內源活性物質水平變化的影響。(2)實驗研究扶芳藤益心方對體外缺氧/復氧(H/R)損傷后人心內膜微血管內皮細胞(HUMCE)的保護作用及機制。方法:(1)臨床上選擇82例氣虛血瘀證胸痹(慢性穩(wěn)定性心絞痛)患者,年齡在35-79歲之間,隨機分為治療組和對照組,每組各41例。對照組為常規(guī)西藥治療(抗血小板藥物、硝酸酯類、β受體阻滯劑、ACEI等);治療組在對照組常規(guī)西藥治療基礎上加扶芳藤益心方湯劑口服,早晚各1次,每次200ml。兩組療程均為4周。觀察兩組治療前后的中醫(yī)證候療效、心絞痛療效、心電圖療效及患者血清VEGF、ET-1、hs-CRP、IL-1β水平的變化。(2)通過扶芳藤益心方、益心方水提和醇提的比較,選擇提取率高者作為扶芳藤益心方、益心方提取方法。觀察扶芳藤益心方、益心方水提物和醇提物對小鼠的急性毒性試驗,評價藥物的安全性。采用血清藥理學方法,制備不同階梯濃度的扶芳藤益心方和益心方含藥大鼠血清干預HUMCE,采用MTT法檢測HUMCE活性,選擇最佳的含扶芳藤益心方、益心方大鼠血清濃度。實驗隨機分為正常組和造模組:模型對照組、扶芳藤益心方組、益心方組、陽性對照組(卡托普利10-2mol/L(CAP1)、10-3mol/L(CAP2)、10-4mol/L(CAP3))。體外建立H/R損傷后HUMCE模型,根據實驗分組,采用含藥大鼠血清干預:MTT法檢測HUMCE活力,流式細胞儀檢測HUMCE的Caspase-3陽性細胞數(shù);硝酸還原酶法檢測HUMCE上清液中NO含量和NOS活力;ELISA法檢測HUMCE上清液中VEGFR-2和VEGF的含量;Western blot法檢測HUMCE的ET-1和ECE蛋白表達水平;PCR法檢測HUMCE的ET-mRNA和iNos-mRNA基因表達水平。結果:(1)中醫(yī)證候療效比較:治療組總有效率90.2%,對照組總有效率73.2%,兩組間比較有統(tǒng)計學意義(p0.05);心絞痛療效比較:治療組總有效率87.8%,對照組總有效率82.9%,兩組間比較無統(tǒng)計學意義(p0.05);心電圖療效比較:治療組總有效率75.6%,對照組總有效率61.0%,兩組間比較無統(tǒng)計學意義(p0.05);兩組治療后vegf水平均較治療前顯著升高(p0.01),且治療組vegf升高水平顯著高于對照組(p0.01);兩組治療后et-1、hs-crp、il-1β水平均明顯下降(p0.05),且治療組et-1、hs-crp、il-1β下降水平優(yōu)于對照組(p0.05)。(2)扶芳藤益心方和益心方醇提優(yōu)于水提,且扶芳藤益心方和益心方醇提物小鼠急性毒性實驗安全;2倍人日用劑量扶芳藤益心方和4倍人日用劑量益心方制備大鼠含藥血清對h/r損傷后humce活性最佳。(3)模型對照組:與扶芳藤益心方組,益心方組,cap1組、cap2組、cap3組比較:模型對照組的細胞活力、no含量、nos活力、vegf濃度、vegfr-2濃度及inos-mrna基因表達均降低(p0.05),caspase-3陽性細胞數(shù)也降低,分別降低了9.87%、3.1%、14.26%、7.38%、4.17%(p0.05);模型對照組的et-1、ece蛋白及et-mrna基因表達均明顯升高(p0.05)。扶芳藤益心方組:與益心方組比較,益心方組的細胞活性、no含量、nos活力、vegf濃度、vegfr-2濃度及inos-mrna基因表達均降低(p0.05),et-1、ece蛋白表達及et-mrna基因表達明顯增加(p0.05),caspase-3陽性細胞數(shù)降低6.77%(p0.05);與cap1組比較,cap1組的細胞活性、no含量、nos活力、vegf濃度、vegfr-2濃度及inos-mrna基因表達均升高(p0.05),caspase-3陽性細胞數(shù)升高4.39%(p0.05),et-1、ece蛋白及et-mrna基因表達均降低(p0.05);與cap2組比較,cap2組的細胞活性、no含量降低(p0.05),caspase-3陽性細胞數(shù)降低了2.49%(p0.05),et-1、ece蛋白表達及et-mrna基因表達明顯增加(p0.05);與cap3組比較,cap3組的細胞活性、no含量、VEGF濃度、VEGFR-2濃度均降低(P0.05),Caspase-3陽性細胞數(shù)降低了5.70%(P0.05),ET-1、ECE蛋白表達及ET-mRNA基因表達均明顯增加(P0.05)。益心方組:與CAP1組、CAP2組、CAP3組比較,CAP1組、CAP2組、CAP3組的細胞活性、NO含量、NOS活力和VEGF濃度、VEGFR-2濃度均升高(P0.05),ET-1、ECE蛋白及ET-mRNA基因表達均降低(P0.05),CAP1組、CAP2組的iNOS-mRNA基因表達增加(P0.05),CAP3組的iNOS-mRNA基因表達降低(P0.05)。結論:(1)扶芳藤益心方可以緩解氣虛血瘀證胸痹(慢性穩(wěn)定性心絞痛)患者的心絞痛,改善中醫(yī)證候和心電圖缺血表現(xiàn),且增加患者VEGF分泌,減少ET-1、hs-CRP、IL-1β分泌,從而調節(jié)內源性活性物質平衡及抑制其炎癥反應,保護人心內膜微血管內皮細胞,促進其功能的恢復。(2)扶芳藤益心方、益心方均能增加H/R損傷后HUMCE的增殖活性,且可促進人心內膜微血管內皮細胞VEGF、VEGFR-2與NO、NOS的分泌,增加iNOS-mRNA基因表達,下調ET-1、ECE蛋白表達水平和降低ET-mRNA基因表達,重新維持ET/NO關系平衡,達到穩(wěn)定H/R損傷后HUMCE結構的完整和改善其功能。扶芳藤益心方保護H/R損傷后HUMCE的作用優(yōu)于益心方和卡托普利10-4mol/L濃度,與卡托普利10-3mol/L濃度的保護作用基本一致。
【關鍵詞】：扶芳藤益心方 益心方 氣虛血瘀 胸痹 缺氧/復氧 人心內膜微血管內皮細胞 一氧化氮 內皮素
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R256.22
【目錄】：

• 中文摘要9-12
• ABSTRACT12-17
• 中英文縮略詞表17-19
• 前言19-24
• 第一部分 臨床研究24-42
• 1 材料和方法24-30
• 1.1 實驗試劑24
• 1.2 試驗藥物24
• 1.3 主要儀器24
• 1.4 病例選擇24-25
• 1.5 診斷標準25-27
• 1.6 納入排除標準27
• 1.7 中止/退出標準27-28
• 1.8 治療方法28
• 1.9 觀察指標及檢測方法28-29
• 1.10 療效評定標準29-30
• 1.11 安全性評價30
• 1.12 統(tǒng)計學分析30
• 2 結果30-32
• 3 結論32
• 4 討論32-42
• 4.1 血管內皮細胞與冠心病32-33
• 4.2 內皮素、血管內生長因子與冠心病33-34
• 4.3 高敏-C反應蛋白、白介素-1β 與冠心病34
• 4.4 祖國醫(yī)學對胸痹的認識34-37
• 4.5 從益氣活血法探討氣虛血瘀證胸痹（慢性穩(wěn)定性心絞痛）的治療37
• 4.6 扶芳藤益心方組方原則37-42
• 第二部分 實驗研究42-100
• 1 扶芳藤益心方、益心方水提與醇提率比較42-45
• 1.1 實驗材料42
• 1.2 實驗試劑42
• 1.3 實驗方法42-43
• 1.3.1 實驗設計42
• 1.3.2 不同的提取方法42-43
• 1.3.2.1 水提法42-43
• 1.3.2.2 醇提法43
• 1.4 結果43-45
• 1.4.1 扶芳藤益心方水提組43-44
• 1.4.2 扶芳藤益心方醇提組44
• 1.4.3 益心方水提組44
• 1.4.4 益心方醇提組44-45
• 1.5 結論45
• 2 扶芳藤益心方、益心方醇提物小鼠急性毒性試驗45-47
• 2.1 材料與方法45-46
• 2.1.1 實驗藥物45
• 2.1.2 實驗試劑45
• 2.1.3 實驗動物45
• 2.1.4 試驗方法45-46
• 2.2 結果46-47
• 2.3 結論47
• 3 扶芳藤益心方、益心方醇提47-49
• 3.1 材料與方法47-48
• 3.1.1 實驗藥材47
• 3.1.2 實驗試劑47
• 3.1.3 實驗儀器47-48
• 3.1.4 實驗方法48
• 3.2 結果48-49
• 4 不同濃度扶芳藤益心方、益心方大鼠血清的制備49-57
• 4.1 材料與方法49-54
• 4.1.1 實驗藥材49
• 4.1.2 實驗動物49
• 4.1.3 實驗儀器49
• 4.1.4 不同濃度扶芳藤益心方、益心方藥液的配制49-52
• 4.1.5 實驗分組52-53
• 4.1.6 不同濃度扶芳藤益心方、益心方大鼠血清制備53-54
• 4.2 結果54-57
• 4.2.1 不同濃度扶芳藤益心方組結果54-55
• 4.2.2 不同濃度益心方組結果55-56
• 4.2.3 空白組結果56-57
• 5 探討含不同濃度大鼠血清培養(yǎng)液與含 10%胎牛血清培養(yǎng)液對HUMCE活性的影響57-63
• 5.1 材料與方法57-60
• 5.1.1 實驗細胞57
• 5.1.2 實驗血清57
• 5.1.3 主要試劑57
• 5.1.4 實驗儀器57-58
• 5.1.5 配制含不同濃度大鼠血清培養(yǎng)液和 10%胎牛血清培養(yǎng)液58
• 5.1.6 HUMCE傳代培養(yǎng)58-59
• 5.1.7 試實驗分組59-60
• 5.1.8 MTT法測定含不同濃度大鼠血清干預后HUMCE活性60
• 5.2 統(tǒng)計學分析60
• 5.3 結果60-62
• 5.4 結論62
• 5.5 討論62-63
• 6 探討含不同濃度扶芳藤益心方、益心方大鼠血清對H/R損傷后HMCE活性的影響63-69
• 6.1 材料與方法63-67
• 6.1.1 實驗細胞63
• 6.1.2 試驗藥物63
• 6.1.3 實驗試劑63
• 6.1.4 主要儀器63
• 6.1.5 配制含藥大鼠血清培養(yǎng)液63-64
• 6.1.6 HUMCE傳代培養(yǎng)64-65
• 6.1.7 體外建立HUMCE的H/R損傷模型65
• 6.1.8 實驗分組65
• 6.1.9 MTT法檢測HUMCE活性65-67
• 6.2 統(tǒng)計學分析67
• 6.3 結果67-69
• 6.3.1 H/R對HUMCE增殖活性的影響67
• 6.3.2 不同濃度扶芳藤益心方大鼠血清與模型對照組對H/R損傷后HUMCE活性的影響67-68
• 6.3.3 不同濃度扶芳藤益心方大鼠血清對H/R損傷后HUMCE活性的影響68
• 6.3.4 不同濃度益心方大鼠血清與模型對照組對H/R損傷后HUMCE活性的影響68
• 6.3.5 不同濃度益心方對H/R損傷后HUMCE活性的影響68
• 6.3.6 不同濃度扶芳藤益心方與不同濃度益心方大鼠血清對H/R損傷后HUMCE活性的影響68-69
• 6.4 結論69
• 7 研究扶芳藤益心方對缺氧/復氧損傷后人心內膜微血管內皮細胞增殖機制69-82
• 7.1 材料與方法69-77
• 7.1.1 主要試劑69-70
• 7.1.2 實驗細胞70
• 7.1.3 試驗藥物70
• 7.1.4 主要儀器70
• 7.1.5 實驗血清70
• 7.1.6 配制含藥大鼠血清培養(yǎng)液70
• 7.1.7 HUMCE傳代培養(yǎng)70
• 7.1.8 體外建立H/R損傷后HUMCE模型70
• 7.1.9 實驗分組70-71
• 7.1.10 MTT法檢測H/R損傷后HUMCE活性71-72
• 7.1.11 流式細胞儀檢測H/R損傷后HUMCE的Caspase-3 陽性細胞數(shù)72-74
• 7.1.12 ELISA法檢測H/R損傷后HUMCE的VEGF濃度74-75
• 7.1.13 ELISA法檢測H/R損傷后HUMCE的VEGFR-2 濃度75-77
• 7.2 統(tǒng)計學分析77
• 7.3 結果77-78
• 7.3.1 H/R對HUMCE增殖和凋亡的的影響77
• 7.3.2 扶芳藤益心方、益心方大鼠血清對H/R損傷后HUMCE的Caspase-3 陽性細胞數(shù)的影響77-78
• 7.3.3 扶芳藤益心方、益心方大鼠血清對H/R損傷后HUMCE的活性影響78
• 7.3.4 扶芳藤益心方、益心方大鼠血清對H/R損傷后HUMCE的VEGFR-2、VEGF濃度的影響78
• 7.4 結論78-79
• 7.5 討論79-82
• 8 研究扶芳藤益心方對缺氧/復氧損傷后人心內膜微血管內皮細胞的保護機制82-100
• 8.1 材料與方法82-95
• 8.2 統(tǒng)計學分析95
• 8.3 結果95-97
• 8.4 結論97
• 8.5 討論97-100
• 課題創(chuàng)新點100-101
• 結語與展望101-103
• 參考文獻103-113
• 綜述113-127
• 參考文獻122-127
• 已發(fā)表論文情況127-128
• 致謝128

  本文關鍵詞：扶芳藤益心方對氣虛血瘀證胸痹（慢性穩(wěn)定性心絞痛）的臨床及內皮細胞保護作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：400727