目的:探討DRG中P2X₇和P2Y₁受體在電針足三里、三陰交緩解內(nèi)臟痛敏中的作用機制。方法:TNBS灌腸誘導(dǎo)IBS大鼠內(nèi)臟痛模型,給予足三里_((雙))、三陰交穴_((雙))電針刺激干預(yù)(強度1m A,頻率2Hz,波寬0.1ms),15min/次,1次/日,共1周。運用病理形態(tài)學(xué)、行為學(xué)、逆行示蹤、電生理學(xué)、分子生物學(xué)等方法,探討DRG中P2X₇和P2Y₁受體介導(dǎo)電針緩解內(nèi)臟痛敏的神經(jīng)生物學(xué)機制。結(jié)果:電針明顯抑制內(nèi)臟高敏感性,可被鞘內(nèi)注射氟代檸檬酸部分抑制。電針能夠抑制內(nèi)臟痛大鼠DRG神經(jīng)元的興奮性:降低靜息膜電位、上調(diào)基強度、抑制神經(jīng)元動作電位發(fā)放,鞘內(nèi)注射FCA后電針的調(diào)節(jié)作用受到一定程度抑制,表明膠質(zhì)細胞可能參與電針對神經(jīng)元電生理學(xué)特性的調(diào)節(jié)。P2X₇選擇性激動劑Bz ATP增加AWR評分,拮抗劑A740003抑制AWR評分,說明P2X₇在內(nèi)臟痛敏中發(fā)揮促進作用。Bz ATP拮抗了電針鎮(zhèn)痛效應(yīng),A740003能夠協(xié)同電針鎮(zhèn)痛效應(yīng)。電針顯著抑制P2X...

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中文摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 DRG內(nèi)膠質(zhì)細胞介導(dǎo)電針緩解TNBS誘導(dǎo)IBS大鼠內(nèi)臟痛敏效應(yīng)觀察
    1.引言
    2.材料和方法
        2.1 實驗動物及倫理
        2.2 主要實驗儀器
        2.3 主要實驗試劑
        2.4 TNBS誘導(dǎo)大鼠IBS內(nèi)臟痛模型
        2.5 結(jié)腸組織微觀病理評分標準
        2.6 結(jié)直腸擴張球囊制作
        2.7 內(nèi)臟運動反射的行為測試
        2.8 溶液配置
        2.9 鞘內(nèi)注射
        2.10 大鼠穴位定位
        2.11 動物分組與干預(yù)方法
        2.12 標本采集與處理
        2.13 結(jié)腸組織病理學(xué)HE染色
        2.14 結(jié)腸相關(guān)DRG神經(jīng)元逆行示蹤
        2.15 DRG神經(jīng)元急性分離與培養(yǎng)
        2.16 全細胞膜片鉗記錄
        2.17 數(shù)據(jù)采集與分析
    3.結(jié)果
        3.1 TNBS誘導(dǎo)結(jié)腸炎癥在不同時間微觀病理評分
        3.2 DRG內(nèi)膠質(zhì)細胞介導(dǎo)電針緩解TNBS誘導(dǎo)內(nèi)臟痛效應(yīng)
        3.3 膠質(zhì)細胞介導(dǎo)電針調(diào)節(jié)TNBS誘導(dǎo)內(nèi)臟痛大鼠DRG中結(jié)腸相關(guān)神經(jīng)元電生理學(xué)特性
    4.討論
        4.1 慢性內(nèi)臟痛病因病機的中醫(yī)認識
        4.2 慢性內(nèi)臟痛發(fā)病機制研究
        4.3 穴位選擇依據(jù)
        4.4 DRG中“神經(jīng)元-膠質(zhì)細胞”共同參與感覺信息整合
        4.5 結(jié)腸非炎癥性內(nèi)臟高敏感
        4.6 DRG膠質(zhì)細胞參與IBS內(nèi)臟高敏感性及電針對結(jié)腸相關(guān)神經(jīng)元興奮性調(diào)節(jié)
    小結(jié)
第二部分 DRG膠質(zhì)細胞P2X₇受體介導(dǎo)電針緩解內(nèi)臟痛敏研究
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 實驗動物及倫理
        2.2 主要實驗儀器
        2.3 主要實驗試劑
        2.4 TNBS誘導(dǎo)大鼠IBS內(nèi)臟痛模型
        2.5 內(nèi)臟運動反射的行為測試
        2.6 溶液配置
        2.7 動物分組與干預(yù)方法
        2.8 標本采集與處理
        2.9 免疫熒光雙標
        2.10 Real time PCR m RNA檢測
        2.11 Western Blot蛋白檢測
        2.12 數(shù)據(jù)采集與分析
    3.結(jié)果
        3.1 DRG中 GFAP-P2X₇、P2X₃-P2X₇免疫熒光共定位染色
        3.2 DRG膠質(zhì)細胞中P2X₇介導(dǎo)TNBS誘導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛外周敏化
        3.3 P2X₇介導(dǎo)電針緩解IBS大鼠內(nèi)臟痛敏
    4.討論
        4.1 嘌呤受體與內(nèi)臟痛
        4.2 針刺發(fā)揮作用的重要信使物質(zhì)-ATP
        4.3 P2X₇在TNBS誘導(dǎo)的IBS內(nèi)臟高敏感過程中發(fā)揮促進作用
        4.4 P2X₇介導(dǎo)電針抑制內(nèi)臟痛外周敏化
    小結(jié)
第三部分 DRG神經(jīng)元P2Y₁受體介導(dǎo)電針緩解內(nèi)臟痛敏研究
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 實驗動物及倫理
        2.2 主要實驗儀器
        2.3 主要實驗試劑
        2.4 TNBS誘導(dǎo)大鼠IBS內(nèi)臟痛模型
        2.5 內(nèi)臟運動反射的行為測試
        2.6 溶液的配置
        2.7 動物分組與干預(yù)方法
        2.8 標本采集與處理
        2.9 免疫熒光雙標
        2.10 Real time PCR m RNA檢測
        2.11 Western Blot蛋白檢測
        2.12 數(shù)據(jù)采集與分析
    3.結(jié)果
        3.1 DRG中 GFAP-P2Y₁、P2Y₁-P2X₃免疫熒光共定位染色
        3.2 DRG神經(jīng)元中P2Y₁介導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛敏的抑制效應(yīng)
        3.3 P2Y₁介導(dǎo)電針緩解IBS大鼠內(nèi)臟痛敏
    4.討論
        4.1 DRG神經(jīng)元P2Y₁介導(dǎo)TNBS誘導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛敏
        4.2 P2Y₁介導(dǎo)電針緩解IBS大鼠內(nèi)臟痛敏
    小結(jié)
第四部分 DRG中 P2X₇→P2Y₁→P2X₃途徑介導(dǎo)電針緩解內(nèi)臟痛敏研究
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 實驗動物及倫理
        2.2 主要實驗儀器
        2.3 主要實驗試劑
        2.4 TNBS誘導(dǎo)大鼠IBS內(nèi)臟痛模型
        2.5 內(nèi)臟運動反射的行為測試
        2.6 動物分組與干預(yù)方法
        2.7 標本采集與處理
        2.8 溶液的配置
        2.9 Real time PCR m RNA檢測
        2.10 Western Blot蛋白檢測
        2.11 數(shù)據(jù)采集與分析
    3.結(jié)果
        (一)“P2X₇→P2Y₁"介導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛大鼠DRG中“神經(jīng)元-膠質(zhì)細胞”信息交互及電針的鎮(zhèn)痛效應(yīng)
            3.1 膠質(zhì)細胞P2X₇受體抑制神經(jīng)元P2Y₁受體介導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛外周敏化
            3.2 “P2X₇→P2Y₁"調(diào)節(jié)途徑介導(dǎo)電針緩解IBS內(nèi)臟痛
        (二)DRG中“P2Y₁→P2X₃"調(diào)節(jié)途徑介導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛及電針鎮(zhèn)痛效應(yīng)
            3.3 內(nèi)臟痛大鼠結(jié)腸相關(guān)DRG神經(jīng)元P2Y₁抑制P2X₃受體表達
            3.4 “P2Y₁→P2X₃"調(diào)節(jié)途徑介導(dǎo)電針緩解TNBS誘導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛
    4.討論
        4.1 背根神經(jīng)節(jié)中“神經(jīng)元-膠質(zhì)細胞”與IBS內(nèi)臟痛
        4.2 “P2X₇→P2Y₁"介導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛大鼠DRG中“神經(jīng)元-膠質(zhì)細胞”信息交互及電針的鎮(zhèn)痛效應(yīng)
        4.3 DRG中“P2Y₁→P2X₃"調(diào)節(jié)途徑介導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛敏及電針鎮(zhèn)痛效應(yīng)
    小結(jié)
創(chuàng)新點
結(jié)論
研究不足與展望
致謝
參考文獻
附錄一 :文獻綜述 P2受體介導(dǎo)IBS內(nèi)臟痛外周敏化在中醫(yī)經(jīng)穴臟腑相關(guān)理論中的意義
    參考文獻
附錄二 :在校期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文全文及摘要
附錄三 :參加學(xué)術(shù)會議情況



本文編號：3983260