目的:視網(wǎng)膜脫離(retinal detachment,RD)是威脅視力的常見眼科疾病,視功能損傷的一大原因是光感受器細(xì)胞發(fā)生凋亡。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)光感受器細(xì)胞的凋亡受到很多因素調(diào)控,仍有待于進(jìn)一步研究。近年來研究發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)退行性疾病中發(fā)揮重要作用,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)或視網(wǎng)膜損傷發(fā)生時最先做出反應(yīng)的細(xì)胞。RD后視網(wǎng)膜中存在小膠質(zhì)細(xì)胞被激活,然而小膠質(zhì)細(xì)胞是否對光感受器細(xì)胞的凋亡存在調(diào)控作用尚不明確。因此本課題將通過干預(yù)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞探討其對RD后光感受器細(xì)胞凋亡的具體作用及機(jī)制。方法:實驗采用視網(wǎng)膜下注射透明質(zhì)酸鈉的方法制作大鼠RD模型,采用免疫熒光染色檢測RD 6h、1d、3d、5d、7d、14d小膠質(zhì)細(xì)胞激活情況,以及檢測各組Müller細(xì)胞的活化情況,并且通過TUNEL染色檢測RD6h、1d、3d、7d時視網(wǎng)膜組織中光感受器細(xì)胞凋亡情況。采用熒光定量PCR和Western Blot檢測炎癥因子相關(guān)基因和神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)水平。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞干預(yù)實驗,采用玻璃體腔內(nèi)注射M-CSF激活小膠質(zhì)細(xì)胞或口服GW2580抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的干預(yù)方法,分別將健康雄性Wistar大...

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1TUNEL染色陰性及陽性對照結(jié)果

FITC標(biāo)記的dUTP充分混勻，添加于陽性對照和實驗組的切片組織上，而陰性對照將末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶替換為去離子水。將各組放置在37℃條件下將濕盒避光孵育60分鐘。反應(yīng)完后浸入SSC中室溫放置15min，終止反應(yīng)。完畢后用1×PBS洗滌5min；共3次。用1:5000的DAPI....

圖2大鼠眼底觀察照片

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士研究生學(xué)位論文202.3結(jié)果2.3.1實驗性視網(wǎng)膜脫離動物模型建立成功在手術(shù)顯微鏡下注射1%透明質(zhì)酸鈉后，可觀察到大鼠視網(wǎng)膜呈灰白色球狀隆起（圖2）。注射后6h、1d、3d、5d、7d、14d組都觀察到仍存在視網(wǎng)膜脫離狀態(tài)，僅5d組有1只實驗眼出現(xiàn)玻璃體出血....

圖3視網(wǎng)膜脫離后視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞染色結(jié)果

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士研究生學(xué)位論文21(A)Normal組、RD6h、RD1d、RD3d、RD5d、RD7d、RD14d組具代表性的Iba1染色圖片，標(biāo)尺為50μm（B）對Iba1染色陽性的小膠質(zhì)細(xì)胞計數(shù)，與內(nèi)層視網(wǎng)膜面積的比值計算單位面積小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)。Normal組小膠質(zhì)細(xì)胞....

圖5視網(wǎng)膜脫離后光感受器細(xì)胞TUNEL染色結(jié)果

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士研究生學(xué)位論文22(A)Normal組、RD6h、RD1d、RD3d、RD5d、RD7d、RD14d組具代表性的GFAP染色圖片，標(biāo)尺為50μm（B）對GFAP表達(dá)水平用染色面積表示，與內(nèi)層視網(wǎng)膜面積的比值計算面積比。Normal組、RD6h、RD1d的GF....

本文編號：3983036