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MicroRNA-140-5p通過THY1介導(dǎo)的Notch信號通路抑制胃癌進展

發(fā)布時間:2024-05-11 06:43
  一、研究背景胃癌最目前世界上常見的消化道惡性腫瘤之一,嚴重威脅著人類的生命健康。在大約90%的癌癥病例中,侵襲和轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因。胃癌的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)嚴重危及患者的生命,與患者不良預(yù)后相關(guān),這突顯出迫切需要有效的新治療方案。雖然最近的研究已經(jīng)探索了多種新的分子靶點來診斷和治療胃癌,但批準用于臨床的針對特定靶點的抗胃癌藥物依然缺乏。因此,開發(fā)針對胃癌新靶點的藥物對改善患者預(yù)后有重要的臨床意義。微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一種內(nèi)源性的小分子非編碼RNA,通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制來阻礙蛋白編碼基因表達;然后通過與蛋白編碼基因的信使RNA(mRNA)的3’非翻譯區(qū)的序列(3’UTR)相結(jié)合,從而達到阻滯mRNA的翻譯或者誘導(dǎo)其降解的作用。據(jù)統(tǒng)計,人類的蛋白編碼基因中的受到miRNA調(diào)控后轉(zhuǎn)錄的占60%左右;而在諸多不同性質(zhì)的腫瘤中,也存在特異性的miRNA或者miRNA家族表達和功能的異常。最近,研究者對miR-140-5p在腫瘤中的作用機制的研究越來越多。在結(jié)直腸癌、膽管癌和下咽癌等研究中發(fā)現(xiàn)miR-140-5p均起到腫瘤抑制因子的作用。在胃癌相關(guān)研究報道中,miR-140-5p...

【文章頁數(shù)】:92 頁

【學(xué)位級別】:博士

【文章目錄】:
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 miRNAs與腫瘤的研究進展
        1.1.1 miRNA概述以及調(diào)節(jié)生命活動的機制
        1.1.2 microRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用至關(guān)重要
        1.1.3 miR-140 可能在胃癌發(fā)生發(fā)展中起著重要作用,值得深入研究
第2章 利用GC中基因的差異分析和GC的基因檢索和相互作用分析預(yù)測THY1和miR-140-5p參與GC的進展
    2.1 GC中基因的差異分析
    2.2 GC的基因檢索和相互作用分析
    2.3 基于微陣列的GC基因表達譜
    2.4 本章結(jié)論
第3章 MicroRNA-140-5p通過THY1 介導(dǎo)的Notch信號通路的負調(diào)控抑制胃癌細胞增殖,遷移和促進細胞凋亡
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗儀器
        3.1.2 實驗試劑與耗材
    3.2 主要試劑的配制
        3.2.1 RPMI1640 培養(yǎng)液的配制
        3.2.2 D-Hank's液的配制
        3.2.3 RT-PCR引物
        3.2.4 RT-PCR相關(guān)試劑的配制
        3.2.5 Western Blot試劑配制
        3.2.6 SDS-PAGE凝膠的配制
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 降低GC組織中miR-140-5p的表達和THY1 的高表達
        3.3.2 miR-140-5p和 THY1 的表達與GC的進展相關(guān)
    3.4 討論
    3.5 總結(jié)
第4章 MicroRNA-140-5p通過THY1 介導(dǎo)的Notch信號通路的負調(diào)控抑制胃癌細胞增殖,遷移和促進細胞凋亡的實驗研究
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗試劑
        4.2.2 實驗方法
        4.2.3 流式細胞儀分析細胞周期
        4.2.4 劃痕實驗檢測細胞遷移能力
        4.2.5 Transwell實驗檢測細胞侵襲能力
        4.2.6 統(tǒng)計分析
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 miRNA數(shù)據(jù)庫的查詢結(jié)果提示miR-140-5p與靶基因THY1 序列的存在互補性,THY1 可能是miR-140-5p的靶標
        4.3.2 實時定量PCR檢測5 株胃癌細胞和一株非腫瘤胃上皮細胞,發(fā)現(xiàn)miR-140-5p在胃癌細胞株中顯著低表達。THY1 在胃癌細胞株中顯著高表達。選擇SGC-7901和MGC-803 細胞系用于后續(xù)實驗
        4.3.3 Westernblot檢測5 株胃癌細胞和一株非腫瘤胃上皮細胞中THY1的蛋白水平
        4.3.4 miR-140-5p過表達抑制THY1 表達和Notch信號通路的激活
        4.3.5 miR-140-5p過表達抑制GC細胞的增殖
        4.3.6 miR-140-5p過表達抑制GC細胞的遷移和侵襲
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀博士學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號:3969674

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