目的在導師團隊以往中醫(yī)藥防治肝癌研究的基礎(chǔ)上,選擇若干在肝癌細胞惡性增殖時表達量上調(diào)的基因,綜合采用RNA干擾等實驗技術(shù),探索研究這些基因在肝癌細胞惡性增殖中的作用,以期豐富肝癌發(fā)病和惡性增殖機制,及肝癌熱毒證發(fā)生的部分機制。方法主要包括:肝癌細胞的培養(yǎng)、目的基因干擾質(zhì)粒的制備、脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒、沉默目的基因后細胞增殖能力的MTT法檢測、沉默目的基因后RT-q PCR的檢測基因表達量的變化、沉默目的基因后Western blot檢測蛋白表達的變化、沉默目的基因后流式細胞技術(shù)對細胞周期和細胞凋亡的檢測、相關(guān)方法學實驗探討和改進以及文獻資料查閱等。結(jié)果(1)成功構(gòu)建了10個目的基因的干擾質(zhì)粒。(2)熒光對照顯示質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功。(3)轉(zhuǎn)染si RNA后72h,與正常組相比PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A基因沉默組細胞數(shù)量明顯減少。(4)轉(zhuǎn)染si RNA后72h,PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A各基因相對表達量與陰性相比均不同程度下調(diào),且下調(diào)幅度較明顯。(5)轉(zhuǎn)染si RNA后72h,與對照組相比PTBP1、RPS18、RPL13A、RPL37A各基因沉...

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1酶切質(zhì)粒電泳圖

上海中醫(yī)藥大學博士學位論文8（2）pSilencer2.1線性質(zhì)粒載體的電泳后，置凝膠于長波紫外透射儀上，可見清晰的呈淡橘紅色的標準品（若干梯度條帶）；生物電泳圖像分析系統(tǒng)拍照，可見清晰的亮條帶，酶切成功的線性質(zhì)粒DNA比未切環(huán)狀質(zhì)粒DNA遷徙速度慢，條帶較為靠后，見圖1-1。圖....

圖1-2線性質(zhì)粒載體回收濃度純度檢測圖

上海中醫(yī)藥大學博士學位論文8（2）pSilencer2.1線性質(zhì)粒載體的電泳后，置凝膠于長波紫外透射儀上，可見清晰的呈淡橘紅色的標準品（若干梯度條帶）；生物電泳圖像分析系統(tǒng)拍照，可見清晰的亮條帶，酶切成功的線性質(zhì)粒DNA比未切環(huán)狀質(zhì)粒DNA遷徙速度慢，條帶較為靠后，見圖1-1。圖....

圖1-3重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞菌落（5）各基因中量制備菌液擴增成功，所得質(zhì)粒DNA濃度高，質(zhì)量佳，見表1-51-4

上海中醫(yī)藥大學博士學位論文8（2）pSilencer2.1線性質(zhì)粒載體的電泳后，置凝膠于長波紫外透射儀上，可見清晰的呈淡橘紅色的標準品（若干梯度條帶）；生物電泳圖像分析系統(tǒng)拍照，可見清晰的亮條帶，酶切成功的線性質(zhì)粒DNA比未切環(huán)狀質(zhì)粒DNA遷徙速度慢，條帶較為靠后，見圖1-1。圖....

圖1-4各基因中抽結(jié)果8348.9293.3329.1

上海中醫(yī)藥大學博士學位論文8（2）pSilencer2.1線性質(zhì)粒載體的電泳后，置凝膠于長波紫外透射儀上，可見清晰的呈淡橘紅色的標準品（若干梯度條帶）；生物電泳圖像分析系統(tǒng)拍照，可見清晰的亮條帶，酶切成功的線性質(zhì)粒DNA比未切環(huán)狀質(zhì)粒DNA遷徙速度慢，條帶較為靠后，見圖1-1。圖....

本文編號：3965943