目的:本研究旨在應(yīng)用轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)手段,探討鹿茸提取物對于軟骨細胞調(diào)控作用的生物學(xué)機制。方法:本研究采用快速生長期鹿茸為研究對象,采用高速勻漿機制備鹿茸勻漿,采用冷凍干燥法獲得鹿茸凍干粉。應(yīng)用SDS-PAGE凝膠電泳測定鹿茸提取物中蛋白含量。采用72h內(nèi)出生乳鼠的肋軟骨制備原代軟骨細胞,采用不同濃度的鹿茸提取物(0,0.02,0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28 mg/ml)對軟骨細胞進行培養(yǎng),應(yīng)用CCK-8觀察軟骨細胞增殖能力,同時應(yīng)用Alcian blue 8GX進行染色,觀察軟骨細胞增殖情況。采用RNA-seq技術(shù)對軟骨細胞進行轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,提取總RNA,構(gòu)建文庫,應(yīng)用Agilent 2100 Bioanalyzer對文庫進行質(zhì)量檢測,使用Illumina HiSeq 2500測序平臺進行基因測序,對基因差異表達情況進行分析。采用iTRAQ技術(shù)對血清蛋白質(zhì)組學(xué)進行分析。選擇雄性SD大鼠為研究對象,采用飲用水和鹿茸提取物灌胃處理,對大鼠血清蛋白進行iTRAQ標(biāo)記,應(yīng)用Mascot和Proteome Discoverer軟件對蛋白進行鑒別,將所得結(jié)果...

【文章頁數(shù)】：150 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖-1鹿茸提取物SDS凝膠電泳結(jié)果

長春中醫(yī)藥大學(xué)2020屆博士學(xué)位論文324)應(yīng)用多功能酶標(biāo)儀在450nm波長條件下測定吸光度；5)根據(jù)細胞存活率繪制細胞增殖率曲線；6)將細胞置于24孔細胞培養(yǎng)板內(nèi)，細胞密度1×105/mL，標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)培養(yǎng)4h（溫度37℃，飽和濕度，體積分?jǐn)?shù)5%CO2），按照濃度遞增順序，依次加入....

圖-2595nm波長下蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線

長春中醫(yī)藥大學(xué)2020屆博士學(xué)位論文33蛋白質(zhì)濃度（ug/ml）圖-2595nm波長下蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線（2）快速生長期鹿茸提取物能夠促進原代軟骨細胞增殖，且呈劑量依賴性。為了探究鹿茸提取物對于小鼠軟骨細胞增殖的影響，我們應(yīng)用不同濃度的快速生長期鹿茸提取物（0,0.02,0.04,0.....

圖-3鹿茸提取物對軟骨細胞增殖的作用

長春中醫(yī)藥大學(xué)2020屆博士學(xué)位論文34圖-3鹿茸提取物對軟骨細胞增殖的作用。應(yīng)用CCK-8觀察軟骨細胞增值情況，在每組細胞內(nèi)分別按照濃度遞增順序（0,0.02,0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28mg/ml）加入鹿茸提取物培養(yǎng)24h，以非干預(yù)組為對照，觀察....

圖-4應(yīng)用Alcianblue8GX對各組軟骨

長春中醫(yī)藥大學(xué)2020屆博士學(xué)位論文350.16mg/ml0.32mg/ml0.64mg/ml1.28mg/ml圖-4應(yīng)用Alcianblue8GX對各組軟骨細胞進行染色觀察，可見隨著DAE濃度遞增，細胞密度逐漸增高，軟骨細胞增殖與鹿茸提取物濃度呈正相關(guān)。圖-5應(yīng)用鹽酸胍提取Al....

本文編號：3938450