目的:明確六神丸的抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用,探討SRC-3途徑在結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移中的作用,進(jìn)一步探討六神丸調(diào)控SRC-3途徑抑制結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制。方法:運(yùn)用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活性,運(yùn)用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖情況,運(yùn)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲和遷移情況,皮下瘤動(dòng)物模型檢測各干預(yù)因素對(duì)結(jié)腸癌瘤體增長的影響,裸鼠原位移植瘤肝轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型檢測各干預(yù)因素對(duì)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的影響,小動(dòng)物活體成像觀察結(jié)腸癌原位瘤及轉(zhuǎn)移灶的形成情況。RT-PCR檢測miR-497表達(dá)情況。HE染色檢測肝臟組織內(nèi)瘤灶形成情況。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)iR-497靶基因進(jìn)行驗(yàn)證。慢病毒感染法構(gòu)建目的基因穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法提高目的基因在細(xì)胞中的表達(dá)水平。結(jié)果:(1)六神丸可以抑制炎癥相關(guān)腫瘤細(xì)胞增殖和遷移,且下調(diào)細(xì)胞中SRC-3蛋白的表達(dá);(2)六神丸可以抑制炎癥相關(guān)腫瘤組織的細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移;(3)SRC-3促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲和遷移,敲減SRC-3抑制結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移;(4)SRC-3下調(diào)miR-497的表達(dá),miR-497抑制結(jié)腸癌的肝轉(zhuǎn)移,Cyclin D2是miR-497直接功能性靶標(biāo);(5)SRC-3/miR-...

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 六神丸抑制炎癥相關(guān)腫瘤轉(zhuǎn)移
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 主要試劑
        1.5 主要溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)技術(shù)
        2.2 CCK-8檢測
        2.3 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.5 穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶細(xì)胞株構(gòu)建
        2.6 動(dòng)物模型的構(gòu)建
        2.7 小動(dòng)物活體成像檢測
        2.8 實(shí)驗(yàn)分組和給藥
        2.9 統(tǒng)計(jì)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 六神丸抑制炎癥相關(guān)的腫瘤細(xì)胞活性
        3.2 六神丸抑制炎癥相關(guān)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移
        3.3 六神丸抑制炎癥相關(guān)腫瘤組織的細(xì)胞增殖
        3.4 六神丸抑制炎癥相關(guān)腫瘤組織的細(xì)胞轉(zhuǎn)移
        3.5 六神丸下調(diào)炎癥相關(guān)腫瘤細(xì)胞中SRC-3表達(dá)
    4 分析與討論
第二部分 SRC-3促進(jìn)結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 主要試劑
        1.5 主要溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)技術(shù)
        2.2 質(zhì)粒的擴(kuò)增
        2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)
        2.4 細(xì)胞蛋白的提取
        2.5 細(xì)胞蛋白的定量
        2.6 細(xì)胞RNA的提取
        2.7 Western blot
        2.8 RT-PCR檢測
        2.9 HE染色
        2.10 統(tǒng)計(jì)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 穩(wěn)定高/低表達(dá)SRC-3的人結(jié)腸癌細(xì)胞株的建立及鑒定
        3.2 SRC-3促進(jìn)細(xì)胞的增殖
        3.3 SRC-3促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲
        3.4 敲減SRC-3抑制結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移
        3.5 SRC-3對(duì)miR-497表達(dá)的影響
    4 分析與討論
第三部分 SRC-3/miR-497/cyclin D2信號(hào)軸調(diào)控結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 主要試劑
        1.5 主要溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞
        2.2 Luciferase檢測
        2.3 統(tǒng)計(jì)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 miR-497抑制結(jié)腸癌瘤體的增長
        3.2 miR-497抑制結(jié)腸癌的肝轉(zhuǎn)移
        3.3 Cyclin D2是miR-497直接功能性靶標(biāo)
        3.4 SRC-3調(diào)控miR-497表達(dá)
        3.5 SRC-3/miR-497/Cyclin D2介導(dǎo)的EMT促進(jìn)結(jié)腸癌的轉(zhuǎn)移
    4 分析與討論
第四部分 六神丸通過調(diào)控SRC-3途徑抑制結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 主要試劑
        1.5 主要溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)技術(shù)
        2.2 PDX動(dòng)物模型的建立
        2.3 統(tǒng)計(jì)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 六神丸對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株活性的影響
        3.2 六神丸對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響
        3.3 六神丸對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株遷移的影響
        3.4 六神丸調(diào)控SRC-3途徑介導(dǎo)的EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)
        3.5 六神丸抑制SRC-3高表達(dá)結(jié)腸癌腫瘤增長
        3.6 六神丸抑制SRC-3高表達(dá)結(jié)腸癌腫瘤肝轉(zhuǎn)移
        3.7 六神丸對(duì)結(jié)腸癌PDX動(dòng)物模型的影響
    4 分析與討論
創(chuàng)新點(diǎn)
結(jié)果及結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄一 文獻(xiàn)綜述 六神丸治療腫瘤的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
附錄二 在讀期間發(fā)表論文和成果
附錄三 發(fā)表論文全文



本文編號(hào)：3911865