發(fā)布時間：2024-02-23 12:55

　　1.背景及目的:在我國,無論相對發(fā)病率還是絕對病例數(shù),肝纖維化患者均居世界首位,其主要病因為:病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性肝病或藥物性肝病等,肝纖維化不僅是肝臟損傷的病理修復(fù)反應(yīng),還會進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化、肝癌、肝衰竭^[1],是嚴(yán)重危害人民健康和消耗社會資源的難治性疾病。因此,抗肝纖維化是慢性肝病的重要治療環(huán)節(jié)。西醫(yī)學(xué)已有較多的臨床試驗報道,對于慢性病毒性(乙型、丙型)肝炎抗病毒治療可有效逆轉(zhuǎn)肝纖維化^[2],但迄今臨床上仍缺乏直接針對纖維結(jié)締組織增生的有效治療肝纖維化的生物或化學(xué)藥物,而中藥及其復(fù)方具有多組分、多途徑與多環(huán)節(jié)的綜合作用特點,近年來發(fā)現(xiàn)在抗肝纖維化治療方面有明顯優(yōu)勢,已經(jīng)取得了較好的臨床療效,如扶正化瘀膠囊(片)、復(fù)方鱉甲軟肝片等^[3-5]。蟲草菌絲作為中醫(yī)藥抗肝纖維化藥物扶正化瘀膠囊/片中最重要的扶正藥物,課題組前期大量研究證實以蟲草菌絲為主藥的扶正藥物在促進(jìn)肝纖維化逆轉(zhuǎn)中發(fā)揮主要作用,為了解析其發(fā)揮抗肝纖維化作用的主要活性成分,課題組前期開展系列活性導(dǎo)向研究,并在近兩年取得了可喜...

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
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摘要
ABSTRACT
引言
第一章 C02對CCl₄誘導(dǎo)肝纖維化小鼠的干預(yù)作用研究
    1 材料
        1.1 動物來源
        1.2 主要試劑
        1.3 主要溶液配制
        1.4 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 動物模型制備方法
        2.2 血清肝功能檢測
        2.3 蛋白免疫印跡
        2.4 肝組織HE染色
        2.5 肝組織天狼猩紅染色及膠原半定量
        2.6 肝組織羥脯氨酸含量
        2.7 肝組織和細(xì)胞總RNA抽提
        2.8 Real time PCR
        2.9 免疫組織化學(xué)染色
        2.10 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 各組小鼠基本情況
        3.2 小鼠體重、肝重、脾重、肝體比及脾體比的變化情況
        3.3 C02對CCl₄ 肝纖維化小鼠血清ALT、AST的影響
        3.4 C02對CCl₄肝纖維化小鼠肝組織病理學(xué)及羥脯氨酸含量的影響
        3.5 C02對CCl₄ 肝纖維化小鼠肝臟α-SMA、COL-I表達(dá)的影響
        3.6 C02對CCl₄誘導(dǎo)肝纖維化小鼠肝內(nèi)巨噬細(xì)胞表型的影響
        3.7 C02 對促纖維化相關(guān)因子PDGF-BB、TNF-α表達(dá)的影響
        3.8 C02對JNK/ERK/P38 信號通路的影響
        3.9 C02 對巨噬細(xì)胞活化相關(guān)蛋白IRF5、STAT1 的影響
    4 本章小結(jié)
第二章 C02對DMN誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的影響
    1 材料與方法
        1.1 動物來源
        1.2 主要試劑
        1.3 主要溶液配制
        1.4 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 動物模型制備方法
        2.2 血清肝功能檢測
        2.3 蛋白免疫印跡
        2.4 肝組織HE染色
        2.5 肝組織羥脯氨酸含量
        2.6 肝組織和細(xì)胞總RNA抽提
        2.7 Real time PCR
        2.8 免疫組織化學(xué)染色
        2.9 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 各組大鼠基本情況
        3.2 大鼠體重、肝重、脾重、肝體比及脾體比的變化情況
        3.3 C02對DMN肝纖維化大鼠血清ALT、AST含量的影響
        3.4 C02對DMN纖維化大鼠肝組織病理及羥脯氨酸含量的影響
        3.5 C02對DMN肝纖維化大鼠肝臟α-SMA、COL-I表達(dá)的影響
        3.6 C02對DMN誘導(dǎo)肝纖維化大鼠肝內(nèi)巨噬細(xì)胞表型的調(diào)控作用
        3.7 C02對DMN誘導(dǎo)肝纖維化大鼠肝臟促纖維化因子PDGF-BB、TNF-α表達(dá)的影響
        3.8 C02對DMN誘導(dǎo)肝纖維化大鼠肝臟JNK/ERK/P38 信號通路的影響
        3.9 C02對巨噬細(xì)胞活化相關(guān)蛋白的影響
    4 本章小結(jié)
第三章 C02對肝星狀細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的影響
    1 材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要溶液配制
        1.4 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 分離原代小鼠肝星狀細(xì)胞
        2.3 原代肝星狀細(xì)胞存活率鑒定
        2.4 原代肝星狀細(xì)胞的純度鑒定
        2.5 細(xì)胞免疫熒光檢測
        2.6 CCK8法檢測細(xì)胞增殖
        2.7 Real Time PCR
        2.8 蛋白免疫印跡
        2.9 ELISA檢測
        2.10 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 C02對JS-1細(xì)胞活力及增殖的影響
        3.2 C02對JS-1 細(xì)胞α-SMA、COL-I表達(dá)的影響
        3.3 C02 對小鼠原代肝星狀細(xì)胞α-SMA、COL-I表達(dá)的影響
        3.4 C02對巨噬細(xì)胞的增殖及活力的影響
        3.5 C02 對巨噬細(xì)胞分泌相關(guān)炎性因子PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的影響
        3.6 C02 對巨噬細(xì)胞分泌PDGF-BB、TNF-α、iNOS的影響
    4 本章小結(jié)
第四章 C02通過巨噬細(xì)胞影響肝星狀細(xì)胞的活化
    1 材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要溶液配制
        1.4 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 Transwell細(xì)胞共培養(yǎng)
        2.3 細(xì)胞免疫熒光檢測
        2.4 CCK8法檢測細(xì)胞增殖
        2.5 Real Time PCR
        2.6 蛋白免疫印跡
        2.7 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 共培養(yǎng)不同時間點巨噬細(xì)胞對肝星狀細(xì)胞的活化影響
        3.2 共培養(yǎng)24h巨噬細(xì)胞CD11b、CD206 表達(dá)變化
        3.3 共培養(yǎng)24h巨噬細(xì)胞PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的變化
        3.4 共培養(yǎng)24h培養(yǎng)上清中PDGF-BB、TNF-α蛋白含量變化
        3.5 共培養(yǎng)24h巨噬細(xì)胞IRF-5、STAT1 mRNA表達(dá)變化
        3.6 共培養(yǎng)24h巨噬細(xì)胞對肝星狀細(xì)胞的活化影響
        3.7 共培養(yǎng)24h對 JS-1 細(xì)胞ERK、P-ERK的影響
        3.8 STAT1 抑制劑及C02 干預(yù)后巨噬細(xì)胞STAT1 mRNA變化情況
        3.9 STAT1 抑制劑及C02 干預(yù)后巨噬細(xì)胞CD11b、CD206 mRNA的表達(dá)變化
        3.10 STAT1 抑制劑及C02 干預(yù)后巨噬細(xì)胞分泌促炎因子PDGF-BB、TNF-α變化情況
        3.11 STAT1抑制劑干預(yù)后肝星狀細(xì)胞的活化情況
    4 本章小結(jié)
討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
本文的創(chuàng)新點
附錄1 :文獻(xiàn)綜述 肝臟微環(huán)境中各種細(xì)胞對肝星狀細(xì)胞活化的影響
    參考文獻(xiàn)
附錄2:在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3907525