背景宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一,已成為重要的公共健康問(wèn)題。宮頸癌發(fā)病率占女性惡性腫瘤的第二位,其死亡率占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤首位。目前,手術(shù)、化療和放療是宮頸癌最常用的治療手段,但由于多數(shù)宮頸癌細(xì)胞對(duì)化療藥物具有耐藥性,導(dǎo)致化療藥物對(duì)宮頸癌的治療效果較差。而對(duì)于預(yù)后較差的晚期及復(fù)發(fā)性宮頸癌,目前也同樣缺乏有效的治療方法。因此,探索創(chuàng)新型治療方法可能是宮頸癌治療突破的關(guān)鍵。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,Lnc RNA)是一類超過(guò)200個(gè)核苷酸,并具有與m RNA結(jié)構(gòu)特征相似的非編碼RNA,大多數(shù)是由RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的。Lnc RNA可形成復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu),可提供與多個(gè)核酸或蛋白質(zhì)結(jié)合的空間。Lnc RNA雖然不編碼蛋白質(zhì),但其可通過(guò)轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控影響多種基因的表達(dá)水平。有研究發(fā)現(xiàn),Lnc RNA的表達(dá)與多種腫瘤密切相關(guān),如結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌等,但在宮頸癌中的機(jī)制仍尚未明確。方法:本研究采用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)3對(duì)宮頸癌組織和相應(yīng)的癌旁組織進(jìn)行差異Lnc RNA的篩選,對(duì)篩選出的5個(gè)上調(diào)和5個(gè)下調(diào)最明顯的lnc RNA進(jìn)行quantitative...

【文章頁(yè)數(shù)】：157 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一部分 長(zhǎng)鏈非編碼RNA C5orf66-AS1 在宮頸癌中的異常表達(dá)的篩選和驗(yàn)證
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 .組織標(biāo)本
        2.2 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代和培養(yǎng)
        2.3 主要試劑
        2.4 主要儀器
        2.5 qRT-PCR
        2.6 In situ hybridization(ISH)
        2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    3.結(jié)果
        3.1 C5orf66-AS1 在宮頸癌組織中高表達(dá)
        3.2 C5orf66-AS1 在宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá)
        3.3 C5orf66-AS1 與宮頸癌患者的預(yù)后相關(guān)性
    4.討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 長(zhǎng)鏈非編碼RNA C5orf66-AS1 在宮頸癌中的生物學(xué)功能
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 主要試劑
        2.3 主要儀器
        2.4 qRT-PCR
        2.5 質(zhì)粒的構(gòu)建和提取
        2.6 Cell counting kit-8(CCK-8)
        2.7 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.8 細(xì)胞周期
        2.9 細(xì)胞凋亡
        2.10 劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.11 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.12 統(tǒng)計(jì)分析
    3.結(jié)果
        3.1 構(gòu)建上調(diào)或下調(diào)C5orf66-AS1 表達(dá)的宮頸癌細(xì)胞株
        3.2 C5orf66-AS1 能促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞株的增殖能力
        3.3 C5orf66-AS1 能調(diào)控宮頸癌的細(xì)胞周期
        3.4 下調(diào)C5orf66-AS1 能促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的凋亡
        3.5 C5orf66-AS1 對(duì)宮頸癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移無(wú)影響
    4.討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 長(zhǎng)鏈非編碼RNA C5orf66-AS1 調(diào)控宮頸癌細(xì)胞增殖能力的分子機(jī)制
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 .細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 主要試劑
        2.3 主要儀器
        2.4 試劑的配置
        2.5 qRT-PCR
        2.6 蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot)
        2.7 RNA免疫共沉淀(RIP)
        2.8 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        2.9 免疫組化(IHC)
        2.10 核質(zhì)分離
        2.11 CCK-8
        2.12 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.13 統(tǒng)計(jì)分析
    3.結(jié)果
        3.1 LncRNA C5orf66-AS1在宮頸癌細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的分布
        3.2 C5orf66-AS1 調(diào)控miRNA的篩選
        3.3 C5orf66-AS1 調(diào)控miR-637的驗(yàn)證
        3.4 MiR-637在宮頸癌中的表達(dá)
        3.5 MiR-637的靶基因篩選
        3.6 MiR-637的靶基因驗(yàn)證
        3.7 C5orf66-AS1 可調(diào)控RING1 的表達(dá)
        3.8 C5orf66-AS1 通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-637調(diào)控RING1的表達(dá),最終影響宮頸癌細(xì)胞的增殖能力
        3.9 在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中下調(diào)lncRNA C5orf66-AS1可抑制腫瘤的生長(zhǎng)
    4.討論
    參考文獻(xiàn)
第四部分 全文總結(jié)
    4.1 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    4.2 主要結(jié)論
    4.3 研究展望
第五部分 長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)在宮頸癌中的研究現(xiàn)狀
    非編碼RNA的生物發(fā)生和功能
    宮頸癌中循環(huán)lncRNAs下調(diào)
    LncRNA-HOTAIR
    LncRNA-H19
    LncRNA-XIST
    LncRNA-CCHE1
    LncRNA-EBIC
    LncRNA-MALAT1
    LncRNA-ANRIL
    LncRNA-LET
    LncRNA-NEAT1
    LncRNA-BLACAT1
    LncRNA-UFC1
    LncRNA-SNHG16
    LncRNA-SNHG20
    結(jié)論和展望
    參考文獻(xiàn)
綜述一 長(zhǎng)鏈非編碼RNA在婦科腫瘤中的調(diào)控表達(dá)
    參考文獻(xiàn)
綜述二 婦科腫瘤中的 miRNA:具有重大影響的小分子
    參考文獻(xiàn)
綜述三 趨化因子受體對(duì)卵巢癌患者免疫功能的影響
    參考文獻(xiàn)
攻讀博士期間發(fā)表的論文
攻讀博士期間參與的課題研究
中英文縮略詞表
致謝



本文編號(hào)：3896903