目的:利用MassARRAY質(zhì)譜測序方法在中國漢族人群中分析散發(fā)性帕金森病(SPD)相關(guān)易感基因的多態(tài)性,為早期識別易感者及進一步探討發(fā)病機制與治療的研究提供依據(jù)。方法:收集南昌大學第一附屬醫(yī)院和南方醫(yī)科大學附屬廣東總醫(yī)院共398例中國漢族SPD,和430例正常對照組的臨床資料及外周靜脈血,分別提取DNA并行質(zhì)量檢測,結(jié)合前期研究及其他相關(guān)文獻,選擇30個SPD最可能相關(guān)的候選SNPs,利用質(zhì)譜MassARRAY平臺檢測和DNA測序技術(shù)進行測序并對其基因型的差異性進行分析,并一步對其可能的生物學功能進行預(yù)測。結(jié)果:(1)通過質(zhì)譜分析及一代測序確認rs863108、rs80315856、rs28499371和rs2270568多態(tài)性與漢族血統(tǒng)SPD的發(fā)病機制有關(guān)。(2)rs863108的T等位基因為SPD的保護性等位基因,其A/T基因型降低了SPD的患病風險;rs80315856的T等位基因是SPD的危險位點,其G/T基因型是增加患SPD的風險;rs28499371的T等位基因為SPD的保護性等位基因,其C/T基因型降低患SPD的風險;rs2270568的T/T基因型增加SPD的風險。(...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
符號說明
第1章 引言
    1.1 帕金森病概述
    1.2 帕金森病臨床表現(xiàn)
    1.3 帕金森病發(fā)病機制
        1.3.1 DA及性激素與PD相關(guān)
        1.3.2 異常鐵沉積與PD發(fā)病相關(guān):
        1.3.3 神經(jīng)營養(yǎng)因子、線粒體功能與PD發(fā)病相關(guān):
    1.4 帕金森病目前診斷研究熱點
        1.4.1 帕金森病目前生物標志物研究熱點
        1.4.2 帕金森病目前影像診斷研究熱點
        1.4.3 帕金森病目前基因診斷研究熱點
    1.5 帕金森病治療的發(fā)展
        1.5.1 帕金森病的傳統(tǒng)治療
        1.5.2 帕金森病的基因治療
    1.6 帕金森病遺傳生物學研究進展
第2章 材料與方法
    2.1 臨床實驗對象來源及分組收集
    2.2 單核苷酸(SNPs)的選擇
        2.2.1 功能區(qū)域SNP的篩選
        2.2.2 有效或熱點SNP的篩選
        2.2.3 對候選SNP進一步優(yōu)化
    2.3 主要儀器設(shè)備與試劑
        2.3.1 主要試劑
        2.3.2 主要實驗設(shè)備和儀器
        2.3.3 主要使用的數(shù)據(jù)庫及軟件
    2.4 DNA的提取
    2.5 Massarray SNP分型實驗流程
        2.5.1 引物設(shè)計及合成
        2.5.2 引物稀釋及注意事項
        2.5.3 PCR擴增反應(yīng)
        2.5.4 產(chǎn)物堿性磷酸酶處理
        2.5.5 單堿基延伸反應(yīng)
        2.5.6 樹脂純化
        2.5.7 芯片點樣
        2.5.8 質(zhì)譜檢測及數(shù)據(jù)輸出
        2.5.9 利用Sequenom平臺分析單核苷酸的基因分型
    2.6 DNA Sanger測序
    2.7 rs863108,rs28499371,rs2270568 and rs80315856 的功能預(yù)測
        2.7.1 rs80315856
        2.7.2 rs863108 內(nèi)含子突變點研究方法
        2.7.3 rs28499371 錯義突變點分析研究方法
        2.7.4 rs2270568 同義突變點分析研究方法
    2.8 臨床資料統(tǒng)計學處理
第3章 結(jié)果
    3.1 運用質(zhì)譜MassARRAY平臺檢測技術(shù)分析30 個單核苷酸與sPD之 間的基因關(guān)聯(lián)
    3.2 運用DNASanger一代測序技術(shù)確認質(zhì)譜MassARRAY平臺檢測的結(jié)論
    3.3 rs863108,rs28499371 and rs2270568 的功能預(yù)測
        3.3.1 rs863108 的一般突變信息,核受體結(jié)合位點預(yù)測和轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預(yù)測
        3.3.2 rs28499371 的一般突變信息、致病性預(yù)測、結(jié)構(gòu)域分析、蛋白家族進化分析和結(jié)構(gòu)建模分析
        3.3.3 rs2270568 突變的一般信息、致病性預(yù)測及結(jié)構(gòu)建模
第4章 討論
    4.1 rs863108與SPD的關(guān)系
    4.2 rs80315856與SPD的關(guān)系
    4.3 rs28499371與SPD的關(guān)系
    4.4 rs2270568與SPD的關(guān)系
第5章 總結(jié)
    5.1 結(jié)論
    5.2 本研究的不足之處及遠景展望
致謝
參考文獻
附表
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3875476