背景及目的:多指畸形是人類最常見的先天性肢體畸形之一,其特征是手指數(shù)目多于正常人。拇指多指畸形是一種最常見多指畸形,根據(jù)我國2012年中國出生缺陷防治報(bào)告統(tǒng)計(jì),每年將有約3萬左右的多指(趾)患兒出生,家族性多指的比例為4.8%,而散發(fā)型的占到95.2%,軸前(拇指側(cè))和軸后(小指側(cè))的多指畸形的比例分別為74.7%和25.3%。拇指在手部功能中占有重要作用,因此拇指發(fā)生多指畸形將對手部功能造成巨大影響。拇指多指畸形根據(jù)其畸形的嚴(yán)重程度可分為不同類型,輕者會(huì)影響手部外觀,重者在影響手部外觀的同時(shí)也會(huì)影響手的抓握功能。手部功能的喪失或減低會(huì)對個(gè)體在社會(huì)生活中造成巨大的影響,手部畸形的外觀也會(huì)給患者及其家庭帶來較大的心理負(fù)擔(dān)。拇指多指畸形在胎兒階段即可發(fā)生,由于常規(guī)的產(chǎn)前診斷主要以超聲診斷為主,而胎兒在子宮內(nèi)常呈握拳狀態(tài)使得多指畸形的診斷存在難度,大多患兒的畸形是在出生后發(fā)現(xiàn)。多指畸形患者常在兒童早期通過外科手術(shù)治療切除多余的手指,如果把握好手術(shù)時(shí)機(jī),可以獲得較好的重建拇指功能。目前伴隨著社會(huì)的進(jìn)步和發(fā)展,人們對于拇指多指畸形的治療不僅局限于手部功能的要求,更側(cè)重于重塑手部的精美外觀,這也為...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
中英文縮略詞對照表
第1章 緒論
    1.1 多指(趾)癥概述
    1.2 流行病學(xué)特征
    1.3 多指畸形分類
    1.4 多指畸形發(fā)病原因
    1.5 多指(趾)畸形相關(guān)信號通路以及GLI3 基因
        1.5.1 手指發(fā)育基本細(xì)胞生物學(xué)和主要通路
        1.5.2 Shh基因
        1.5.3 GLI3 基因和Shh通路
    1.6 外顯子組測序用于鑒定多指相關(guān)突變基因
        1.6.1 外顯子組定義
        1.6.2 外顯子組測序技術(shù)
        1.6.3 外顯子組測序在發(fā)現(xiàn)多指突變中的應(yīng)用
    1.7 多指的診斷和治療
    1.8 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞在發(fā)育研究中的意義
    1.9 本研究設(shè)計(jì)思路
第2章 多指患者血樣處理及全外顯子組測序
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 臨床資料
        2.2.2 試劑材料
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.4 基因組DNA提取方法
        2.2.5 基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證
        2.2.6 基因組DNA濃度測定
        2.2.7 外顯子組測序與數(shù)據(jù)質(zhì)量控制及預(yù)處理
        2.2.8 Sanger測序
        2.2.9 蛋白質(zhì)序列比對
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.2 討論
    2.4 本章小結(jié)
第3章 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞分離和鑒定
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 試劑材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.4 試劑配置
        3.2.5 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞分離與培養(yǎng)
        3.2.6 小鼠成纖維細(xì)胞的傳代與凍存
        3.2.7 免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞分離與培養(yǎng)結(jié)果
        3.3.2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的鑒定結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 GLI3 基因突變在MEFs中的功能研究
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 試劑材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 GLI3的p.M948I點(diǎn)突變質(zhì)粒引物設(shè)計(jì)
        4.2.4 GLI3 基因定點(diǎn)突變
        4.2.5 質(zhì)粒提取
        4.2.6 瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物
        4.2.7 瓊脂糖凝膠回收
        4.2.8 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        4.2.9 重組真核質(zhì)粒pCMV-N-GLI3.Mut Flag的構(gòu)建
        4.2.10 重組真核質(zhì)粒鑒定
        4.2.11 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MEFs
        4.2.12 TRIZOL法提取RNA實(shí)驗(yàn)
        4.2.13 RNA純度分析
        4.2.14 轉(zhuǎn)錄組測序基本流程(RNA-Seq)
        4.2.15 測序文庫構(gòu)建
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 RNA質(zhì)量評估
        4.3.2 測序文庫質(zhì)量評估
        4.3.3 測序數(shù)據(jù)比對和結(jié)果統(tǒng)計(jì)
        4.3.4 基因表達(dá)定量分析(基因/轉(zhuǎn)錄本)
        4.3.5 基因表達(dá)PCA分析
        4.3.6 差異表達(dá)基因分析
        4.3.7 mRNA功能Gene Ontology富集分析(G1 vs C1)
        4.3.8 mRNA功能KEGG Pathway富集分析
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
第5章 Cbx3 對細(xì)胞細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 試劑材料
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.2.3 試劑配置
        5.2.4 Cbx3 siRNA設(shè)計(jì)
        5.2.5 Cbx3 過表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        5.2.6 小鼠成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        5.2.7 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        5.2.8 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 CBX3 過表達(dá)載體構(gòu)建以及雙酶切鑒定
        5.3.2 MEFs中過表達(dá)CBX3 后對細(xì)胞增殖的影響
        5.3.3 MEFs中過表達(dá)CBX3 后對細(xì)胞侵襲的影響
    5.4 討論
    5.5 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 全文結(jié)論
    6.2 論文創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3870783