發(fā)布時(shí)間：2017-05-22 20:01

  本文關(guān)鍵詞：心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭及肌梭傳入神經(jīng)的影響與機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：現(xiàn)代社會(huì)的高速發(fā)展、日趨激烈的社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)、以及快節(jié)奏的生活狀態(tài)使越來(lái)越多的人們承受著各種生理、心理上的應(yīng)激。越來(lái)越多的系統(tǒng)性疾病被證實(shí)與心理應(yīng)激、過(guò)度的精神壓力存在著相關(guān)關(guān)系�？陬M肌是口頜系統(tǒng)的重要組成部分,具有維持下頜穩(wěn)定、參與咀嚼運(yùn)動(dòng)、以及參與下頜發(fā)育的重要功能。大量研究結(jié)果表明,異常的心理狀態(tài)與口頜肌的結(jié)構(gòu)功能異常存在著相關(guān)關(guān)系,包括口頜肌疲勞、疼痛敏感、微結(jié)構(gòu)和功能等一系列變化。本課題組前期研究結(jié)果證實(shí),心理應(yīng)激能夠激活腦內(nèi)控制下頜運(yùn)動(dòng)的相關(guān)核團(tuán),并且興奮性遞質(zhì)谷氨酸傳遞增強(qiáng),使得口頜肌肌緊張度升高,直接或間接導(dǎo)致其病理變化。在口頜肌,尤其是深層咬肌內(nèi),含有較多的本體覺(jué)感受器肌梭,肌梭的主要功能是感知肌肉的牽拉、張力、運(yùn)動(dòng)速率的變化等,并將這些本體覺(jué)信息傳遞至神經(jīng)中樞而做出反應(yīng)。研究表明,咬肌肌梭傳入神經(jīng)與腦內(nèi)頜面部運(yùn)動(dòng)相關(guān)核團(tuán)形成復(fù)雜的神經(jīng)聯(lián)系,是參與口頜肌牽張反射、調(diào)節(jié)口頜肌運(yùn)動(dòng)的重要組成部分。咬肌肌梭傳入神經(jīng)元屬于假單極神經(jīng)元,其細(xì)胞體位于腦干部位的三叉神經(jīng)中腦核(Mesencephalic trigeminal nucleus,Vme),是全身唯一一類(lèi)胞體位于腦內(nèi)的初級(jí)傳入神經(jīng)元,因此,Vme神經(jīng)元的興奮性不僅受到口頜肌的牽張變化所影響,還同時(shí)被一系列來(lái)自于腦內(nèi)其他部位的神經(jīng)終末投射所調(diào)節(jié)。研究證實(shí),肌梭傳入神經(jīng)元屬于谷氨酸能神經(jīng)元,興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸以及其相關(guān)受體在肌梭傳入神經(jīng)傳導(dǎo)本體覺(jué)信息過(guò)程中發(fā)揮重要作用。那么,在機(jī)體受到心理應(yīng)激時(shí),咬肌肌梭以及肌梭傳入神經(jīng)元會(huì)發(fā)生怎樣結(jié)構(gòu)與功能的變化,谷氨酸及其受體又在其中發(fā)揮了怎樣的作用,目前尚未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。本研究建立大鼠慢性束縛應(yīng)激模型,采用行為學(xué)實(shí)驗(yàn)、ELISA技術(shù)、組織病理染色、全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)、免疫組織熒光染色、以及透射電鏡等方法,探究了大鼠在慢性心理應(yīng)激狀態(tài)下咬肌肌梭以及肌梭傳入神經(jīng)的一系列變化,并從谷氨酸受體之一N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptors,NMDARs)出發(fā),采用NMDARs抑制劑MK801對(duì)其進(jìn)行拮抗,探討神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸及其受體在這一過(guò)程中的作用機(jī)制。本研究分為兩部分實(shí)驗(yàn),具體如下:第一部分:心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭形態(tài)學(xué)及肌梭傳入神經(jīng)元興奮性影響的研究實(shí)驗(yàn)一大鼠心理應(yīng)激模型的建立與評(píng)價(jià)我們將大鼠采用隨機(jī)方法分為四組:對(duì)照組,心理應(yīng)激組,低劑量MK801組(0.1mg/kg),高劑量MK801組(0.2mg/kg)。應(yīng)激組大鼠給予6 h/day的束縛應(yīng)激,持續(xù)14天,建立大鼠慢性心理應(yīng)激模型。藥物組大鼠通過(guò)腹腔注射藥物,兩天一次。我們通過(guò)體重測(cè)定、行為學(xué)檢測(cè)以及血清學(xué)檢測(cè)驗(yàn)證動(dòng)物模型,結(jié)果顯示,心理應(yīng)激組大鼠的體重增長(zhǎng)速度明顯減慢;大鼠在曠場(chǎng)中的中央活動(dòng)距離、總活動(dòng)路程、移動(dòng)速率明顯降低;高架十字迷宮中大鼠進(jìn)入開(kāi)臂的時(shí)間與次數(shù)、以及活動(dòng)總路程明顯降低;血清皮質(zhì)酮(Corticosterone,CORT)與促腎上腺皮質(zhì)激素(Adrenocorticotropic hormone,ACTH)水平明顯升高。而MK801能夠劑量依賴(lài)性的減輕動(dòng)物的應(yīng)激樣行為學(xué)、血清學(xué)變化。本部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了慢性束縛應(yīng)激能夠造成大鼠處于心理應(yīng)激狀態(tài),保證了后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)二心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭形態(tài)學(xué)影響的研究在本實(shí)驗(yàn)中,我們通過(guò)對(duì)深層咬肌進(jìn)行組織學(xué)切片并進(jìn)行HE染色,結(jié)果發(fā)現(xiàn),心理應(yīng)激以及MK801治療對(duì)大鼠深層咬肌的組織學(xué)結(jié)構(gòu)沒(méi)有明顯的影響作用;并且,心理應(yīng)激或MK801治療對(duì)咬肌肌梭的數(shù)目、梭內(nèi)肌纖維數(shù)量、直徑以及肌梭囊壁厚度沒(méi)有明顯的影響。以上結(jié)果說(shuō)明,心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭在光鏡水平下的結(jié)構(gòu)沒(méi)有影響作用。實(shí)驗(yàn)三心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭傳入神經(jīng)元興奮性影響的研究在本實(shí)驗(yàn)中,我們通過(guò)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),觀(guān)察心理應(yīng)激對(duì)咬肌肌梭傳入神經(jīng)元電生理特性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),心理應(yīng)激能夠明顯降低肌梭傳入神經(jīng)元的靜息膜電位(Resting membrane potential,RMP),升高動(dòng)作電位(Action potential,AP)發(fā)放幅度,延長(zhǎng)AP發(fā)放時(shí)間,降低后超極化電位(After hyperpolarization,AHP)幅度,并且增加了一定刺激電流下神經(jīng)元的AP發(fā)放頻率。同時(shí),心理應(yīng)激還明顯增加了肌梭傳入神經(jīng)元自發(fā)性興奮性突觸后電流(Spontaneous excitatory postsynaptic current,s EPSC)的頻率與幅度。MK801能夠劑量依賴(lài)性拮抗心理應(yīng)激帶來(lái)的上述變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,心理應(yīng)激能夠明顯提高肌梭傳入神經(jīng)元的神經(jīng)興奮性。而MK801治療能夠一定程度上減輕心理應(yīng)激對(duì)神經(jīng)元興奮性的增強(qiáng)作用。第二部分:心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭及肌梭傳入神經(jīng)元影響的機(jī)制研究實(shí)驗(yàn)一心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭及肌梭傳入神經(jīng)元谷氨酸相關(guān)物質(zhì)表達(dá)影響的研究在本部分實(shí)驗(yàn)中,我們通過(guò)免疫組織熒光染色技術(shù),從谷氨酸及其受體出發(fā),觀(guān)察心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭傳入神經(jīng)元相關(guān)物質(zhì)表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),心理應(yīng)激能夠增加咬肌肌梭傳入神經(jīng)元外周末梢(肌梭環(huán)螺形末梢)與中樞末梢也就是三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核(Trigeminal motor nucleus,Vmo)的囊泡膜谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體1(Vesicular glutamate transporter of type 1,VGLUT1)的表達(dá),同時(shí)增加了神經(jīng)元胞體的谷氨酰胺酶2(Glutaminase 2,GLS2)的含量。其次,心理應(yīng)激能夠明顯增加Vme內(nèi)神經(jīng)終末的VGLUT1表達(dá)量,并且增加了肌梭傳入神經(jīng)元內(nèi)NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的表達(dá)量。MK801治療對(duì)于心理應(yīng)激造成的VGLUT1陽(yáng)性終末、以及GLS2的表達(dá)升高沒(méi)有抑制作用,而對(duì)心理應(yīng)激造成的NMDARs表達(dá)有明顯的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,心理應(yīng)激導(dǎo)致了肌梭傳入神經(jīng)元谷氨酸合成與轉(zhuǎn)運(yùn)的增加,同時(shí)其受到的谷氨酸能突觸傳遞也增加,兩者共同作用,導(dǎo)致了Vme神經(jīng)元興奮性的增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)二心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭傳入神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)影響的研究在本部分實(shí)驗(yàn)中,我們采用透射電鏡技術(shù),觀(guān)察了心理應(yīng)激對(duì)Vme部位神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),心理應(yīng)激能夠明顯增加Vme內(nèi)與神經(jīng)元胞體形成的興奮性突觸的數(shù)量、突觸前終末內(nèi)線(xiàn)粒體的數(shù)量、以及突觸后致密區(qū)(Post synaptic density,PSD)的長(zhǎng)度與厚度,而心理應(yīng)激對(duì)抑制性突觸的數(shù)量以及PSD沒(méi)有明顯影響作用。并且MK801治療能夠明顯降低心理應(yīng)激導(dǎo)致的興奮性突觸PSD的長(zhǎng)度與厚度的增加,但對(duì)興奮性突觸以及突觸前終末內(nèi)線(xiàn)粒體的數(shù)量增加沒(méi)有明顯的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,心理應(yīng)激通過(guò)增加對(duì)Vme神經(jīng)元的興奮性神經(jīng)終末投射作用而增強(qiáng)了肌梭傳入神經(jīng)元的興奮性。研究結(jié)論:束縛應(yīng)激模型造成的心理應(yīng)激狀態(tài)能夠明顯增強(qiáng)大鼠咬肌肌梭傳入神經(jīng)元的興奮性,其結(jié)果導(dǎo)致了咬肌本體覺(jué)傳入沖動(dòng)增強(qiáng)。而谷氨酸作為肌梭傳入神經(jīng)元傳遞信息的主要興奮性遞質(zhì),其在神經(jīng)元胞體內(nèi)的合成與其向神經(jīng)終末的轉(zhuǎn)運(yùn)都出現(xiàn)了明顯的增多。同時(shí),心理應(yīng)激還增加了肌梭傳入神經(jīng)元胞體所在部位Vme的谷氨酸能投射,以及NMDARs的表達(dá),并從超微結(jié)構(gòu)的角度證實(shí)了心理應(yīng)激確實(shí)增加了與Vme神經(jīng)元形成突觸的數(shù)量以及PSD的長(zhǎng)度與厚度。另一方面,NMDARs拮抗劑MK801通過(guò)抑制Vme內(nèi)NMDARs的表達(dá)量,以及在超微結(jié)構(gòu)下減少PSD的長(zhǎng)度與厚度,達(dá)到減輕心理應(yīng)激導(dǎo)致肌梭傳入神經(jīng)元興奮增強(qiáng)的作用。因此,本研究結(jié)果為進(jìn)一步系統(tǒng)深入的研究心理應(yīng)激對(duì)口頜肌的影響作用、心因性因素致口頜系統(tǒng)疾患的發(fā)病機(jī)理及其防治措施提供理論基礎(chǔ)。本課題的創(chuàng)新點(diǎn):1.通過(guò)建立動(dòng)物模型,首次探究了心理應(yīng)激對(duì)咬肌肌梭形態(tài)學(xué)與電生理學(xué)特性的影響作用。2.首次從神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸及其受體的角度出發(fā),探討了其在心理應(yīng)激致咬肌肌梭傳入神經(jīng)元興奮性升高過(guò)程中的作用機(jī)制。3.首次從細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化出發(fā),闡明了Vme神經(jīng)元胞體接受的興奮性突觸變化在心理應(yīng)激致肌梭傳入神經(jīng)元興奮性變化中的作用。
【關(guān)鍵詞】：心理應(yīng)激 咬肌 肌梭傳入神經(jīng) 三叉神經(jīng)中腦核 動(dòng)作電位 自發(fā)性興奮性突觸后電流 NMDA受體 突觸后致密區(qū)
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R782
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-16
• 前言16-18
• 文獻(xiàn)回顧18-38
• 1 心理應(yīng)激研究進(jìn)展18-23
• 2 心理應(yīng)激對(duì)口頜肌的影響研究進(jìn)展23-27
• 3.頜肌肌梭研究進(jìn)展27-37
• 4 問(wèn)題的提出37-38
• 第一部分 心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭形態(tài)學(xué)及肌梭傳入神經(jīng)元興奮性影響的研究38-67
• 實(shí)驗(yàn)一 大鼠心理應(yīng)激模型的建立與評(píng)價(jià)38-48
• 1 材料38-39
• 2 方法39-42
• 3 結(jié)果42-45
• 4 討論45-48
• 實(shí)驗(yàn)二 心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭形態(tài)學(xué)影響的研究48-55
• 1 材料48-49
• 2 方法49-51
• 3 結(jié)果51-53
• 4 討論53-55
• 實(shí)驗(yàn)三 心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭傳入神經(jīng)元興奮性影響的研究55-67
• 1 材料55-56
• 2 方法56-59
• 3 結(jié)果59-64
• 4 討論64-67
• 第二部分 心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭傳入神經(jīng)影響的機(jī)制研究67-90
• 實(shí)驗(yàn)一 心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭及肌梭傳入神經(jīng)元谷氨酸相關(guān)物質(zhì)表達(dá)影響的研究67-80
• 1 材料67-68
• 2 方法68-70
• 3 結(jié)果70-77
• 4 討論77-80
• 實(shí)驗(yàn)二 心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭傳入神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)影響的研究80-90
• 1 材料80-81
• 2 方法81-82
• 3 結(jié)果82-87
• 4 討論87-90
• 小結(jié)90-92
• 參考文獻(xiàn)92-106
• 附錄106-107
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果107-108
• 致謝108-109

  本文關(guān)鍵詞：心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌肌梭及肌梭傳入神經(jīng)的影響與機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：386696