目的:葡萄糖是細(xì)胞增殖、分化過程中能量代謝最重要的能量底物,是細(xì)胞內(nèi)主要的碳源。在實(shí)體惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中,由于代謝重編程導(dǎo)致對葡萄糖消耗過高,加之實(shí)體腫瘤細(xì)胞不受控的增殖引起的腫瘤內(nèi)部的血供不足,持續(xù)或間斷的葡萄糖缺乏是實(shí)體腫瘤的一個特征。因此實(shí)體腫瘤如何適應(yīng)營養(yǎng)缺乏,尤其是葡萄糖缺乏,從而在代謝應(yīng)激的環(huán)境下維持自身正常的生存及增殖仍是尚未解決的問題。BAG3是Bcl-2相關(guān)抗凋亡(Bcl-2 associated athanogene)BAG家族的重要成員,參與許多生命活動的調(diào)節(jié),與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移侵襲、自噬以及氧化應(yīng)激等密切相關(guān)。最近發(fā)現(xiàn)BAG3可以直接與己糖激酶HK2(Hexokinase 2,HK2)結(jié)合,促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞糖酵解,提示BAG3可能參與腫瘤細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)過程。但是BAG3在因葡萄糖缺乏造成的代謝應(yīng)激條件下發(fā)揮何種作用尚不明確。p53作為一個腫瘤抑制因子,最近有報(bào)道證實(shí)其參與物質(zhì)代謝及代謝調(diào)節(jié)來維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài),在抑制癌癥的發(fā)生與發(fā)展的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。p53基因突變或缺失打破了腫瘤細(xì)胞有氧呼吸和糖酵解之間的平衡,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的糖酵解,降低氧化磷酸化,從...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
    1.1 p53 在代謝應(yīng)激中的作用
    1.2 BAG3
    1.3 立題背景
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系及實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要抗體
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 慢病毒感染構(gòu)建細(xì)胞系
        2.2.2 總RNA提取
        2.2.3 cDNA合成
        2.2.4 實(shí)時熒光定量PCR
        2.2.5 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(CHIP)
        2.2.6 Click-iT?Nascent RNA Capture Kit檢測新生mRNA
        2.2.7 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)
        2.2.8 細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期
        2.2.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
        2.2.11 PCR Array
        2.2.12 HPG摻入檢測新生蛋白合成
        2.2.13 Actinomycin D法檢測mRNA的半衰期
        2.2.14 Duolink檢測蛋白直接相互作用
        2.2.15 雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)
        2.2.16 RNA免疫沉淀
        2.2.17 Biotin Pull Down
    2.3 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
    3.1 葡萄糖缺乏抑制BAG3 的表達(dá)
    3.2 BAG3 高表達(dá)降低腫瘤細(xì)胞對葡萄糖缺乏的適應(yīng)性
    3.3 BAG3與p53 直接相互作用并促進(jìn)calpain依賴的p53 降解
    3.4 GADD45a、p21、SESN2 誘導(dǎo)表達(dá)提高葡萄糖缺乏條件下腫瘤細(xì)胞的適應(yīng)性
    3.5 BAG3 在葡萄糖缺乏條件下抑制GADD45a、p21和SESN2 的誘導(dǎo)表達(dá)
    3.6 BAG3 通過67-76aa和261-294aa與 SESN2 mRNA的3'UTR直接相互作用
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3866622