目的:葡萄糖是細胞增殖、分化過程中能量代謝最重要的能量底物,是細胞內主要的碳源。在實體惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中,由于代謝重編程導致對葡萄糖消耗過高,加之實體腫瘤細胞不受控的增殖引起的腫瘤內部的血供不足,持續(xù)或間斷的葡萄糖缺乏是實體腫瘤的一個特征。因此實體腫瘤如何適應營養(yǎng)缺乏,尤其是葡萄糖缺乏,從而在代謝應激的環(huán)境下維持自身正常的生存及增殖仍是尚未解決的問題。BAG3是Bcl-2相關抗凋亡(Bcl-2 associated athanogene)BAG家族的重要成員,參與許多生命活動的調節(jié),與腫瘤細胞的增殖、遷移侵襲、自噬以及氧化應激等密切相關。最近發(fā)現(xiàn)BAG3可以直接與己糖激酶HK2(Hexokinase 2,HK2)結合,促進胰腺癌細胞糖酵解,提示BAG3可能參與腫瘤細胞的代謝調節(jié)過程。但是BAG3在因葡萄糖缺乏造成的代謝應激條件下發(fā)揮何種作用尚不明確。p53作為一個腫瘤抑制因子,最近有報道證實其參與物質代謝及代謝調節(jié)來維持細胞的穩(wěn)態(tài),在抑制癌癥的發(fā)生與發(fā)展的調節(jié)中發(fā)揮著關鍵作用。p53基因突變或缺失打破了腫瘤細胞有氧呼吸和糖酵解之間的平衡,促進腫瘤細胞的糖酵解,降低氧化磷酸化,從...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
    1.1 p53 在代謝應激中的作用
    1.2 BAG3
    1.3 立題背景
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系及實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要抗體
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 慢病毒感染構建細胞系
        2.2.2 總RNA提取
        2.2.3 cDNA合成
        2.2.4 實時熒光定量PCR
        2.2.5 染色質免疫沉淀技術(CHIP)
        2.2.6 Click-iT?Nascent RNA Capture Kit檢測新生mRNA
        2.2.7 蛋白質免疫印跡(Western blot)
        2.2.8 細胞計數(shù)檢測細胞存活實驗
        2.2.9 流式細胞術檢測細胞周期
        2.2.10 流式細胞術檢測細胞凋亡
        2.2.11 PCR Array
        2.2.12 HPG摻入檢測新生蛋白合成
        2.2.13 Actinomycin D法檢測mRNA的半衰期
        2.2.14 Duolink檢測蛋白直接相互作用
        2.2.15 雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)
        2.2.16 RNA免疫沉淀
        2.2.17 Biotin Pull Down
    2.3 統(tǒng)計分析
3 結果
    3.1 葡萄糖缺乏抑制BAG3 的表達
    3.2 BAG3 高表達降低腫瘤細胞對葡萄糖缺乏的適應性
    3.3 BAG3與p53 直接相互作用并促進calpain依賴的p53 降解
    3.4 GADD45a、p21、SESN2 誘導表達提高葡萄糖缺乏條件下腫瘤細胞的適應性
    3.5 BAG3 在葡萄糖缺乏條件下抑制GADD45a、p21和SESN2 的誘導表達
    3.6 BAG3 通過67-76aa和261-294aa與 SESN2 mRNA的3'UTR直接相互作用
4 討論
5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3866622