研究目的當前,糖尿病足潰瘍(Diabetic Foot Ulcer,DFU)的治療方案單一,以局部清創(chuàng)、藥物涂抹為主,療效欠佳�；趧�(chuàng)面愈合的研究很多,但是尚無通過系統(tǒng)給藥顯著性促進創(chuàng)面愈合的藥物。為了探究普樂沙福/釋倍靈(AMD3100,Plerixafor,Mozobil)聯(lián)合低劑量他克莫司/普樂可復(FK506,Tacrolimus,Prograf)治療方案(簡寫AF治療方案)是否可以促進糖尿病大鼠皮膚傷口愈合,以及愈合過程中AF治療方案是如何發(fā)揮促進愈合的作用及其潛在的分子機制,本項目從驗證藥物有效性著手,通過尋找相關分子通路,希望為臨床應用自體骨髓干細胞醫(yī)治DFU提供一個可行的方案。研究方法本實驗利用鏈脲佐菌素(STZ)誘導1型糖尿病(Type 1 Diabetes Mellitus,T1DM)大鼠模型;同時使用Goto-Kakizaki(GK)大鼠復制2型非肥胖自發(fā)糖尿病模型。在確定其已合并周圍神經(jīng)和外周血管病變的重癥糖尿病并發(fā)癥后給予AF藥物治療,分別測試藥物在這兩種模型中對糖尿病創(chuàng)面愈合的修復作用。利用新合成的FK506類似物FKVP來探究BMP通路在AF治療方案中影響...

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 引言
第2章 文獻綜述
    2.1 糖尿病及糖尿病足的流行病學
    2.2 正常皮膚的結構
    2.3 傷口愈合的生物學過程及基本理論
    2.4 針對糖尿病皮膚傷口的臨床治療及科研現(xiàn)狀
        2.4.1 清創(chuàng)術
        2.4.2 預防細菌感染
        2.4.3 負壓引流
        2.4.4 輸血療法-血小板富集血漿
        2.4.5 高壓氧
        2.4.6 物理治療
            2.4.6.1 光療
            2.4.6.2 沖擊波治療
            2.4.6.3 超聲治療
            2.4.6.4 電刺激敷料
        2.4.7 生長因子與細胞因子
        2.4.8 組織移植、皮膚移植與皮瓣移植
    2.5 干細胞在糖尿病皮膚傷口愈合中的治療及研究進展
    2.6 AMD3100或FK506 對促進組織修復和再生的研究進展
第3章 AMD3100+低劑量FK506 促進糖尿病大鼠傷口愈合的有效性研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要實驗儀器
        3.1.2 主要實驗材料、試劑和抗體
        3.1.3 實驗動物
        3.1.4 1型糖尿病大鼠模型的建立
        3.1.5 2型糖尿病大鼠模型的建立
        3.1.6 大鼠背部傷口模型
        3.1.7 大鼠足背部傷口模型(糖尿病足模型)
        3.1.8 照片拍攝、傷口及瘢痕大小的測量方法及愈合標準的判定
        3.1.9 病理切片普通及特殊染色
            3.1.9.1 蘇木素&伊紅(H& E)染色
            3.1.9.2 Masson’s trichrome染色
            3.1.9.3 過碘酸雪夫(PAS)染色
        3.1.10 免疫組織化學染色及免疫熒光染色
            3.1.10.1 抗CD133 抗體染色
            3.1.10.2 抗CD34 抗體染色
            3.1.10.3 抗Ym1/Ym2 抗體染色
            3.1.10.4 抗RECA-1 抗體染色
            3.1.10.5 抗αSMA抗體染色
            3.1.10.6 抗PGP9.5 抗體染色
            3.1.10.7 抗CD68(ED1)和Ym1/Ym2 熒光共染
            3.1.10.8 抗SDF-1α和 Ym1/Ym2 熒光共染
            3.1.10.9 GFP+早期肉芽組織標本CD133 抗體染色
        3.1.11 Western Blot蛋白印跡
        3.1.12 大鼠斷尾采血、骨髓細胞分離、外周血單個核細胞分離及流式細胞術
        3.1.13 骨髓移植術
        3.1.14 大鼠下肢(足)皮膚溫度的測量
        3.1.15 大鼠熱板實驗
        3.1.16 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3.2 實驗結果
        3.2.1 在T1DMSD大鼠模型中,切除全層皮膚,皮膚愈合時間顯著延長,AF使治療組愈合時間縮短,基本等同于非糖尿病大鼠自然愈合的時間。
        3.2.2 AF治療方案可以縮短患有嚴重外周神經(jīng)和血管病變的GK T2DM大鼠傷口愈合的時間
        3.2.3 AF方案可以動員單核細胞和標記CD34、CD133 的干細胞入血,增加肉芽組織中Ym1/Ym2M2 巨噬細胞、CD133、CD34干細胞表達SDF-1α
        3.2.4 傷口處募集干細胞,VEGF-A和 HGFα表達增強,促進了新生血管的生成
        3.2.5 骨髓移植模型證實了在應用AF治療方案后,骨髓來源的干細胞促進糖尿病傷口愈合的重要作用
        3.2.6 AF治療方案改善了大鼠后肢糖尿病血管病變,提高了足部皮膚溫度
    3.3 討論
    3.4 本章小結
第4章 BMP信號通路的激活促進傷口愈合的實驗研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗動物及飼養(yǎng)環(huán)境
        4.1.2 傷口模型及分組情況
        4.1.3 免疫組化染色
        4.1.4 細胞培養(yǎng)與轉染
        4.1.5 細胞活力測定
        4.1.6 Western Blot蛋白印跡
        4.1.7 FKBP12-SNAP的下拉(Pull-Downs)
        4.1.8 敲除FKBP的細胞系
        4.1.9 BMP和 NFAT途徑報告基因
        4.1.10 FKVP的合成和用于動物實驗的配方
        4.1.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.2 實驗結果
        4.2.1 合成了沒有免疫抑制作用的FK506 類似物FKVP
        4.2.2 FKVP聯(lián)合AMD3100 可以促進傷口愈合,且結果同AF治療方案一樣好
        4.2.3 FKVP通過BMP-1 型受體激活ID-1 報告基因且使SMAD1/5 磷酸化
        4.2.4 FKVP誘導的SMAD1/5 磷酸化僅需要FKBP
        4.2.5 AF聯(lián)合治療在加速傷口愈合中的作用需要BMP信號傳導
    4.3 討論
    4.4 本章小結
第5章 結論
第6章 創(chuàng)新點
參考文獻
作者在學期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3861527