目的:隨著我國(guó)人口老齡化的到來(lái)以及人民生活水平的提高,心血管疾病的發(fā)生率正在逐年提高,而這些疾病多由血管重塑引起。因血管重塑引起的與血管狹窄相關(guān)的缺血性血管疾病正嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康。目前認(rèn)為,血管中膜平滑肌細(xì)胞遷移和增殖是導(dǎo)致遠(yuǎn)期血管重塑及動(dòng)脈粥樣硬化改變的重要因素。近年來(lái)對(duì)非編碼RNA在血管重塑領(lǐng)域的研究越來(lái)越多,我們之前的工作已經(jīng)證明LncRNAH19可以促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖,2013年有研究發(fā)現(xiàn)LncRNAH19是let-7a的ceRNA。而Cyclin D1是通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期介導(dǎo)細(xì)胞增殖的重要蛋白。本研究主要探討在血管平滑肌細(xì)胞中是否存在LncRNAH19/let-7a/Cyclin D1這條調(diào)控血管重塑的通路。研究方法:本研究建立大鼠頸動(dòng)脈血管重塑模型通過(guò)免疫組化驗(yàn)證Cyclin D1在血管新生內(nèi)膜中的表達(dá)情況。通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析let-7a在血管重塑中的表達(dá)情況。為了研究let-7a在血管平滑肌細(xì)胞中的功能,本研究上調(diào)了 let-7a在血管平滑肌細(xì)胞中的表達(dá),通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)檢查細(xì)胞增殖能力的改變,通過(guò)細(xì)胞流式判斷細(xì)胞周期的分布情況,通過(guò)qRT-PCR和Wester...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分：let-7a抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 細(xì)胞選擇
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
            2.2.2 主要試劑配制
            2.2.3 大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型及假手術(shù)模型的建立
            2.2.4 大鼠頸動(dòng)脈取材
            2.2.5 標(biāo)本石蠟切片的制作
            2.2.6 組織切片脫蠟
            2.2.7 彈力纖維染色
            2.2.8 免疫組化Cyclin D1染色
            2.2.9 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.10 細(xì)胞感染
            2.2.11 RNA提取
            2.2.12 qRt-PCR實(shí)驗(yàn)
            2.2.13 Western Blot實(shí)驗(yàn)
            2.2.14 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
            2.2.15 CCK-8實(shí)驗(yàn)
            2.2.16 細(xì)胞周期檢測(cè)
            2.2.17 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 造模結(jié)果
        3.2 頸動(dòng)脈球囊損傷后的形態(tài)學(xué)改變
        3.3 Cyclin D1在新生內(nèi)膜中的表達(dá)
        3.4 GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析let-7a在血管再狹窄患者中的表達(dá)
        3.5 let-7a慢病毒在血管平滑肌細(xì)胞中的感染效率
        3.6 過(guò)表達(dá)let-7a對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響
        3.7 過(guò)表達(dá)let-7a對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞周期的影響
        3.8 let-7a對(duì)Cyclin D1表達(dá)的影響
        3.9 let-7a與Cyclin D1 mRNA3'-UTR區(qū)的靶向結(jié)合作用
    4 討論
第二部分：LncRNA H19促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 細(xì)胞選擇
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 主要試劑的配制
            2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.4 細(xì)胞感染
            2.2.5 RNA提取
            2.2.6 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 Western Blot實(shí)驗(yàn)
            2.2.8 CCK-8實(shí)驗(yàn)
            2.2.9 細(xì)胞周期檢測(cè)
            2.2.10 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
            2.2.11 RNA pull-down實(shí)驗(yàn)
            2.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 LncRNA H19與let-7a結(jié)合的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)
        3.2 LncRNA H19質(zhì)粒在血管平滑肌細(xì)胞中的感染效率
        3.3 過(guò)表達(dá)LncRNA H19對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響
        3.4 過(guò)表達(dá)LncRNA H19對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞周期的影響
        3.5 過(guò)表達(dá)LncRNA H19對(duì)Cyclin D1表達(dá)的影響
        3.6 LncRNA H19與let-7a之間的相互影響
        3.7 LncRNA H19與let-7a的靶向結(jié)合作用
    4 討論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述 非編碼RNA在血管重塑中的作用
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的科研成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3858639