目的:研究plumbagin(PL)對肝細(xì)胞癌(HCC)細(xì)胞的抑制作用;探討SIVA在PL抑制HCC細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制;分析SIVA在HCC中的表達(dá)及其與疾病進(jìn)展的關(guān)系。方法:1.采用CCK-8、Ed U、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測PL對HCC細(xì)胞增殖的影響;PI單染檢測PL對HCC細(xì)胞周期的影響;Annexin V-FITC/PI雙染、Western-bolt法檢測PL對HCC細(xì)胞凋亡的影響;劃痕實(shí)驗(yàn)檢測PL對HCC細(xì)胞遷移的影響;Transwell實(shí)驗(yàn)檢測PL對HCC細(xì)胞侵襲的影響。2.利用RNA-seq技術(shù)檢測PL處理后HCC細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄組的改變情況,運(yùn)用Western Blot法檢測目的基因在蛋白水平有無相應(yīng)改變,篩選出目的基因(SIVA);過表達(dá)或干擾SIVA后,通過Western-blot驗(yàn)證其對下游通路m TOR的影響;過表達(dá)SIVA觀察其在PL抑制HCC細(xì)胞增殖、調(diào)亡中的作用;建立裸鼠皮下腫瘤模型,PL腹腔注射給藥,通過監(jiān)測移植瘤的生長情況、免疫組化分析PL在裸鼠體內(nèi)的作用。3.通過Western-blot、RT-PCR、IHC比較HCC細(xì)胞株與正常肝細(xì)胞,...

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
緒論
第一章 Plumbagin對人肝細(xì)胞癌細(xì)胞作用的研究
    引言
    材料與方法
        1.主要試劑與材料
        2.主要儀器及設(shè)備
        3.實(shí)驗(yàn)方法
            3.1 人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株的培養(yǎng)
            3.2 細(xì)胞增殖-毒性檢測(CCK-8)細(xì)胞活力
            3.3 EdU摻入實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖
            3.4.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
            3.5 PI單染檢測細(xì)胞周期
            3.6 AnnexinV/PI雙染檢測細(xì)胞凋亡
            3.7 Western Blot
            3.8 傷口愈合實(shí)驗(yàn)(劃痕實(shí)驗(yàn))
            3.9 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
            3.10 統(tǒng)計(jì)方法
    結(jié)果
        1.PL對人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株增殖的影響
        2.PL對人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響
        3.PL對人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株凋亡的影響
        4.PL對人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株的侵襲和遷移的影響
    討論
第二章 SIVA在 plumbagin抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制研究
    引言
    材料與方法
        1.主要試劑與材料
        2.主要儀器及設(shè)備
        3.實(shí)驗(yàn)方法
            3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2 RNA-Seq
            3.3 Western Blot
            3.4 SIVA干擾
            3.5 SIVA過表達(dá)質(zhì)粒的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
            3.6 SIVA過表達(dá)質(zhì)粒的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
            3.7 細(xì)胞凋亡的檢測
            3.8平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
            3.9 細(xì)胞活力的檢測
            3.10 裸鼠皮下異種移植瘤的構(gòu)建
            3.11 免疫組化
            3.12 統(tǒng)計(jì)方法
    結(jié)果
        1.PL對 HCC細(xì)胞株轉(zhuǎn)錄本的影響
        2.PL通過下調(diào)SIVA的表達(dá)抑制m TOR信號通路
        3.SIVA/mTOR信號通路參與PL抑制HCC細(xì)胞株增殖的過程
        4.SIVA參與PL誘導(dǎo)HCC細(xì)胞株凋亡的過程
        5.PL對裸鼠皮下移植瘤的影響
    討論
第三章 SIVA在肝癌中的表達(dá)及其與疾病進(jìn)展關(guān)系的研究
    引言
    材料與方法
        1.主要試劑與材料
        2.主要儀器及設(shè)備
        3.實(shí)驗(yàn)方法
            3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2 Western blot
            3.3 RT-PCR
            3.4 組織芯片
            3.5 生存曲線繪制
            3.6 統(tǒng)計(jì)方法
    結(jié)果
        1.SIVA在人HCC細(xì)胞株表達(dá)
        2.SIVA在人HCC肝癌組織中的表達(dá)
        3.SIVA在 TMA中的分析
        4.SIVA與 HCC進(jìn)展的關(guān)系
    討論
全文小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文
致謝



本文編號：3857015