非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是癌癥患者死亡的主要原因�，F(xiàn)認(rèn)識到免疫系統(tǒng)具有通過其先天和適應(yīng)性免疫應(yīng)答破壞癌細(xì)胞并抑制癌細(xì)胞生長的潛力,改變了 NSCLC治療的前景。Toll樣受體(toll like receptor,TLR),作為先天免疫中最重要的跨膜受體,參與誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。TLRs存在于各種腫瘤細(xì)胞中,與癌癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。一些類型的TLRs檢測腫瘤抗原并引起原發(fā)性抗腫瘤免疫反應(yīng)。TLRs可通過消除腫瘤抗原進一步阻止炎癥性腫瘤微環(huán)境的形成。TLR3位于內(nèi)體膜中,利用MyD88非依賴途徑,募集TRIF激活激活蛋白1(active protain 1,AP-1),NF-κB 和干擾素調(diào)節(jié)因子(interferonregulatoryfactor,IRF)。作為 TLR3 的配體,PolyI:C 激活 TLR3,PKR,維甲酸誘導(dǎo)基因 1(retinoic acid-inducible gene-I,RIG-1)和黑色素瘤分化相關(guān)蛋白 5(melanoma differentiation-associated protein...

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
前言
第一部分 PolyI:C復(fù)合物合物L(fēng)L/2及A549韁胞株的抑制作用
    1. 材料與方法
        1.1 實驗材料與實驗儀器
            1.1.1 NSCLC細(xì)胞株
            1.1.2 實驗試劑
            1.1.3 實驗材料
            1.1.4 實驗儀器
        1.2 實驗方法
            1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
                1.2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
                1.2.1.2 細(xì)胞傳代
                1.2.1.3 細(xì)胞凍存
            1.2.2 RT-OPCR
                1.2.2.1 RNA提取
                1.2.2.2 提取RNA中的DNA
                1.2.2.3 RNA瓊脂糖凝膠電泳
                1.2.2.4 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
                1.2.2.5 PCR檢測
                1.2.2.6 RT-PCR檢測的引物設(shè)計
            1.2.3 細(xì)胞增殖-毒性實驗
            1.2.4 單層細(xì)胞增殖實驗
            1.2.5 細(xì)胞凋亡
            1.2.6 細(xì)胞周期
            1.2.7 劃痕實驗
            1.2.8 transwell遷移實驗
            1.2.9 transwell侵襲實驗
            1.2.10 統(tǒng)計學(xué)處理方法
    2. 結(jié)果
        2.1 PolyI:C復(fù)合物影響NSCLC細(xì)胞的TLR3 mRNA的表達
        2.2 PolyI:C復(fù)合物抑制NSCLC細(xì)胞增殖
            2.2.1 PolyI:C復(fù)合物對NSCLC細(xì)胞的增殖-毒性的影響
            2.2.2 PolyI:C復(fù)合物對NSCLC細(xì)胞的單層增殖的影響
            2.2.3 PolyI:C復(fù)合物促進NSCLC細(xì)胞凋亡
            2.2 4 PolyI:C復(fù)合物對NSCLC細(xì)胞周期的影響
        2.3 PolyI:C復(fù)合物對NSCLC細(xì)胞運動的影響
            2.3.1 PolyI:C復(fù)合物減弱NSCLC細(xì)胞平行運動能力
            2.3.2 PolyI:C復(fù)合物減弱NSCLC細(xì)胞遷移能力及侵襲能力
    3. 討論
    4. 結(jié)論
第二部分 PolyI:C復(fù)合物對小鼠NSCLC移植瘤的抑制作用
    1. 材料與方法
        1.1 實驗材料與實驗儀器
            1.1.1 細(xì)胞株
            1.1.2 實驗動物
            1.1.3 實驗試劑
            1.1.4 實驗儀器
        1.2 實驗方法
            1.2.1 動物模型的建立
            1.2.2 PolyI:C復(fù)合物對肺癌移植瘤的抑瘤作用
            1.2.3 肺癌移植瘤小鼠生存率
            1.2.4 TUNEL法分析移植瘤凋亡
            1.2.5 H&E染色分析各臟器轉(zhuǎn)移
            1.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理方法
    2. 結(jié)果
        2.1 PolyI:C復(fù)合物抑制肺癌移植瘤腫瘤體積
        2.2 PolyI:C復(fù)合物減少肺癌移植瘤腫瘤質(zhì)量
        2.3 PolyI:C復(fù)合物對移植瘤小鼠體重的影響
        2.4 PolyI:C復(fù)合物對LL/2移植瘤小鼠生存率的影響
        2.5 PolyI:C復(fù)合物對腫瘤組織中凋亡與壞死的影響
        2.6 PolyI:C復(fù)合物抑制各臟器轉(zhuǎn)移
    3. 討論
    4. 結(jié)論
第三部分 PolyI:C復(fù)合物在體內(nèi)外抑制非小細(xì)胞肺癌的作用機制
    1. 材料與方法
        1.1 實驗材料與實驗儀器
            1.1.1 NSCLC細(xì)胞株
            1.1.2 實驗動物
            1.1.3 實驗試劑
            1.1.4 實驗儀器
        1.2 實驗方法
            1.2.1 多重免疫分析法檢測血清中細(xì)胞因子的含量
            1.2.2 動物肺癌模型的建立
            1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟DC細(xì)胞及其表面抗原表達
            1.2.4 免疫印跡實驗
                1.2.4.1 溶液配制
                1.2.4.2 蛋白提取
                1.2.4.3 BCA法蛋白定量
                1.2.4.4 制備上樣蛋白
                1.2.4.5 免疫印跡實驗
            1.2.5 免疫組織化學(xué)染色
            1.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理方法
    2. 結(jié)果
        2.1 PolyI:C復(fù)合物對正常小鼠炎性細(xì)胞因子的影響
        2.2 PolyI:C復(fù)合物對LL/2荷瘤小鼠脾臟組織DC細(xì)胞群CD80、CD86的影響
        2.3 PolyI:C復(fù)合物干預(yù)對NSCLC細(xì)胞PI3K/Akt/p53通道蛋白的影響
        2.4 PolyI:C復(fù)合物干預(yù)LL/2肺癌移植瘤PI3K/Akt/p53通道蛋白
    3. 討論
    4. 結(jié)論
總結(jié)及展望
參考文獻
致謝
綜述
    參考文獻
附錄 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3848782