目的:肝細胞癌(HCC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率排在世界第五位,是世界第三高死亡率的腫瘤。目前有多種HCC治療方案,但是全球HCC患者5年生存率仍然低于5%,其主要原因是手術(shù)切除術(shù)、化學療法通常會有嚴重的副作用。因此,迫切需要尋找和研究出一種安全有效的新藥物或藥物傳遞系統(tǒng)來改善以上的弊端,從而到達預防和治療HCC的目的。國內(nèi)外研究報道狼毒、京大戟、蒲公英等中藥對多種腫瘤模型具有顯著抑制作用,而越來越多的研究表明中藥中的單體成分(雷公藤紅素、斑蝥素)對腫瘤性疾病具有一定的治療作用。羽扇豆醇是狼毒、京大戟、蒲公英等中藥中的主要化學成分,大量研究證實羽扇豆醇在多種腫瘤細胞系和癌癥模型中發(fā)揮了顯著的抗腫瘤作用。但是,由于羽扇豆醇存在不溶于水,生物利用度低等缺點,從而限制了其開發(fā)使用。因此,需要一種新型藥物載體改善其作用性質(zhì)以及它的靶向性。本課題首先構(gòu)建一個具有肝靶向性長循環(huán)能力的羽扇豆醇脂質(zhì)體,然后作用于HepG2細胞研究該制劑的靶向性以及腫瘤相關(guān)的蛋白信號通路,最后利用SB(睡美人轉(zhuǎn)座子)介導的高壓尾靜脈注射轉(zhuǎn)染AKT/c-Met誘導的小鼠HCC模型作為實驗動物模型,進一步驗證...

【文章頁數(shù)】：138 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
第一章 處方前研究
    1 實驗材料
        1.1 藥品及試劑
        1.2 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 脂質(zhì)體中羽扇豆醇含量測定方法的建立
        2.2 羽扇豆醇脂質(zhì)體包封率測定方法及制備方法的考察
        2.3 羽扇豆醇溶解度的測定
        2.4 羽扇豆醇普通脂質(zhì)體影響因素考察
    3 實驗結(jié)果
        3.1 羽扇豆醇含量測定方法的建立
        3.2 羽扇豆醇包封率及制備方法的考察結(jié)果
        3.3 羽扇豆醇溶解度測定結(jié)果
        3.4 羽扇豆醇普通脂質(zhì)體影響因素考察結(jié)果
    4 小結(jié)與討論
第二章 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體制備工藝及表征
    1 實驗材料
        1.1 藥品及試劑
        1.2 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 正交試驗法優(yōu)化羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體處方
        2.2 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體凍干工藝的考察
        2.3 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體理化性質(zhì)的考察
        2.4 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體穩(wěn)定性的考察
    3 實驗結(jié)果
        3.1 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體制備工藝的考察結(jié)果
        3.2 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體凍干保護劑考察結(jié)果
        3.3 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體理化性質(zhì)的考察結(jié)果
        3.4 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體制劑穩(wěn)定性考察結(jié)果
    4 小結(jié)與討論
第三章 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體體內(nèi)和體外靶向性研究
    1 實驗材料
        1.1 藥品及試劑
        1.2 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體體外靶向性研究
        2.2 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體體內(nèi)靶向性研究
    3 實驗結(jié)果
        3.1 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體體外靶向性研究結(jié)果
        3.2 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體體內(nèi)靶向性研究結(jié)果
    4 小結(jié)與討論
第四章 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體藥代動力學研究
    1 實驗材料
        1.1 藥品及試劑
        1.2 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 羽扇豆醇標準溶液的配制
        2.2 血漿樣品的處理
        2.3 羽扇豆醇體內(nèi)分析方法的考察
        2.4 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體在大鼠體內(nèi)藥代動力學研究
    3 實驗結(jié)果
        3.1 羽扇豆醇體內(nèi)分析方法的建立
        3.2 血藥濃度測定結(jié)果
        3.3 平均血藥濃度-時間曲線
        3.4 統(tǒng)計矩擬合分析
    4 小結(jié)與討論
第五章 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體對HepG2 細胞行為學研究
    1 實驗材料
        1.1 藥品及試劑
        1.2 抗體
        1.3 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 細胞復蘇
        2.2 細胞培養(yǎng)
        2.3 細胞凍存
        2.4 工作液的配制
        2.5 細胞增殖抑制實驗
        2.6 細胞凋亡實驗
        2.7 細胞周期實驗
        2.8 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體促細胞凋亡分子機制研究
    3 實驗結(jié)果
        3.1 細胞增殖抑制實驗結(jié)果
        3.2 細胞凋亡實驗結(jié)果
        3.3 細胞周期實驗結(jié)果
        3.4 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體促細胞凋亡分子機制研究結(jié)果
    4 小結(jié)與討論
第六章 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體體內(nèi)藥效學研究
    1 實驗材料
        1.1 藥品及試劑
        1.2 抗體
        1.3 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 質(zhì)粒的提取及鑒定
        2.2 質(zhì)粒溶液的配制
        2.3 高壓尾靜脈轉(zhuǎn)染造模
        2.4 分組與給藥
        2.5 小鼠腫瘤檢測
        2.6 蘇木精-伊紅(HE)染色
        2.7 肝組織中RNA的提取和q RT-PCR(即時聚合酶鏈式反應)檢測
        2.8 羽扇豆醇靶向脂質(zhì)體抗AKT/c-MET誘導HCC分子機制研究
    3 實驗結(jié)果
        3.1 質(zhì)粒酶切實驗結(jié)果
        3.2 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體對AKT/c-Met誘導FVB小鼠腫瘤生長的影響
        3.3 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體對AKT/c-Met誘導小鼠肝臟病理學變化的影響
        3.4 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體對AKT/c-Met誘導小鼠的肝臟肝細胞癌標志物表達水平的影響
        3.5 羽扇豆醇肝靶向脂質(zhì)體對AKT/c-Met誘導的HCC小鼠肝臟的AKT/mTOR以及Ras/MAPK相關(guān)蛋白的影響
    4 小結(jié)與討論
參考文獻
結(jié)語
附錄1 文獻綜述
    參考文獻
附錄2 在讀博士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3847755