發(fā)布時間：2017-05-21 16:08

  本文關(guān)鍵詞：修飾多發(fā)性硬化病程藥物機(jī)制探索—醋酸格拉默，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:醋酸格拉默(Glatiramer acetate,GA)是一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的藥物,它已經(jīng)被批準(zhǔn)用于多發(fā)性硬化癥(中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病)的一線治療。但是,醋酸格拉默在治療多發(fā)性硬化癥中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制仍不完全清楚。雖然改善對髓鞘抗原,如中樞髓鞘堿性蛋白(Myelin basic protein,MBP)的免疫反應(yīng)可能是它的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,但是醋酸格拉默的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制是否是抗原非特異性的仍不清楚。在本實驗中,我們應(yīng)用與中樞抗原MBP不同的周圍神經(jīng)抗原P0,誘導(dǎo)人類吉蘭巴雷綜合征的動物模型-實驗性自身免疫性神經(jīng)炎(Experimental autoimmune neuritis,EAN)作為工具,探索醋酸格拉默的免疫調(diào)節(jié)作用是否具有抗原非特異性。研究內(nèi)容和方法:通過周圍神經(jīng)髓鞘抗原P0(Protein 0)免疫lewis大鼠的方法誘導(dǎo)實驗性自身免疫性神經(jīng)炎,在lewis鼠造模前和發(fā)病后分別皮下注射醋酸格拉默,觀察動物的臨床評分和體重變化。同時在發(fā)病高峰期即造模后第16天,通過肌電圖評估坐骨神經(jīng)髓鞘和軸索損傷;通過HE染色和Luxol Fast Blue病理染色觀察髓鞘變化;通過酶聯(lián)免疫法檢測多種炎性細(xì)胞因子變化。體外實驗通過H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法檢測醋酸格拉默對不同抗原P0、MBP、LPS(Lipopolysaccharide)刺激的T細(xì)胞增殖。實驗結(jié)果:免疫前或者免疫后10天皮下注射醋酸格拉默均減輕了該疾病的臨床評分,同時醋酸格拉默治療組大鼠的體重明顯較對照組增加,具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。肌電圖研究表明,治療組坐骨神經(jīng)遠(yuǎn)端運動潛伏期明顯降低,運動傳導(dǎo)速度明顯增加,波幅明顯增高,表明醋酸格拉默減輕了髓鞘和軸索損傷。神經(jīng)病理HE和Luxol Fast Blue染色證實了免疫前注射醋酸格拉默減輕了P0誘導(dǎo)的EAN坐骨神經(jīng)脫髓鞘。ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)結(jié)果表明在治療組,炎性因子如Interferon-gama(INF-γ),IL-6,IL-12,,IL-17明顯降低,IL-10明顯升高,均具有統(tǒng)計學(xué)意義,進(jìn)一步驗證了醋酸格拉默對周圍神經(jīng)脫髓鞘疾病具有抑制炎癥的作用。我們的體外實驗通過H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法進(jìn)一步證實了醋酸格拉默對周圍神經(jīng)抗原P0、中樞神經(jīng)抗原MBP、非特異性抗原刺激的T細(xì)胞增殖均有抑制作用,治療組和對照組有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:醋酸格拉默減輕了實驗性自身免疫性神經(jīng)炎造成的神經(jīng)功能缺損,證明了該藥物免疫調(diào)節(jié)機(jī)制不是中樞神經(jīng)抗原特異性的。
【關(guān)鍵詞】：實驗性自身免疫性神經(jīng)炎 實驗性自身免疫性脊髓炎 醋酸格拉默 吉蘭巴雷綜合征 多發(fā)性硬化
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R744.51
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、對象和方法16-37
• 1.1 實驗動物和EAN模型誘導(dǎo)16-19
• 1.1.1 實驗動物的選擇及分組16
• 1.1.2 EAN模型誘導(dǎo)16-17
• 1.1.3 免疫抗原及佐劑17
• 1.1.4 抗原乳化及免疫方法17-18
• 1.1.5 EAN大鼠的評估及監(jiān)護(hù)18
• 1.1.6 注意事項18-19
• 1.2 醋酸格拉默應(yīng)用和實驗分組19-20
• 1.2.1 醋酸格拉默的應(yīng)用劑量、頻率和方式19
• 1.2.2 醋酸格拉默注射部位及步驟19-20
• 1.2.3 醋酸格拉默注射中的注意事項：20
• 1.3 坐骨神經(jīng)的電生理研究20-21
• 1.3.1 電生理的檢測指標(biāo)及方法20
• 1.3.2 電生理檢測步驟20-21
• 1.3.3 注意事項21
• 1.4 病理組織的準(zhǔn)備和組織學(xué)染色21-30
• 1.4.1 坐骨神經(jīng)標(biāo)本的固定方法及目的22
• 1.4.2 坐骨神經(jīng)石蠟包埋步驟22-23
• 1.4.3 石蠟標(biāo)本切片步驟23-24
• 1.4.4 石蠟標(biāo)本展片步驟24
• 1.4.5 石蠟標(biāo)本烤片步驟24-25
• 1.4.6 冰凍切片的制作流程25-27
• 1.4.7 H&E染色步驟27
• 1.4.8 Luxol快藍(lán)染色步驟27-28
• 1.4.9 實驗試劑的配制方法28-29
• 1.4.10注意事項29-30
• 1.5 淋巴細(xì)胞增殖實驗30-33
• 1.5.1 大鼠脾臟標(biāo)本的收集及單核細(xì)胞的提取步驟30-32
• 1.5.2 淋巴細(xì)胞增殖實驗步驟32-33
• 1.5.3 3H-甲基胸腺嘧啶法滲入法實驗原理33
• 1.5.4 實驗用試劑配方33
• 1.6 血清細(xì)胞因子檢測33-37
• 1.6.1 提取大鼠的外周血標(biāo)本步驟及方法33-35
• 1.6.2 細(xì)胞因子檢測步驟35-36
• 1.6.3 注意事項36-37
• 二、實驗結(jié)果37-48
• 2.1 P0免疫前應(yīng)用醋酸格拉默對EAN臨床損傷產(chǎn)生了抑制效應(yīng)37-38
• 2.2 醋酸格拉默在電生理學(xué)上抑制了EAN坐骨神經(jīng)的損傷38-39
• 2.3 醋酸格拉默在坐骨神經(jīng)病理上抑制了EAN炎性細(xì)胞浸潤和脫髓鞘39-42
• 2.4 體外增殖實驗證明醋酸格拉默對自身反應(yīng)的T細(xì)胞的抑制作用是P0抗原非特異性的42-43
• 2.5 醋酸格拉默對EAN進(jìn)展期大鼠有治療作用43-44
• 2.6 醋酸格拉默抑制了EAN進(jìn)展期炎性因子的產(chǎn)生44-45
• 2.7 醋酸格拉默抑制了EAN進(jìn)展期坐骨神經(jīng)炎性細(xì)胞浸潤和髓鞘脫失45-48
• 三、統(tǒng)計學(xué)分析48
• 四、討論48-50
• 五、小結(jié)50-52
• 全文結(jié)論52-53
• 論文創(chuàng)新點53-54
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明61-63
• 綜述醋酸格拉默的免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)保護(hù)功能與自身免疫性疾病63-91
• 1. 醋酸格拉默的發(fā)現(xiàn)及發(fā)展63
• 2. 吉蘭巴雷綜合征及其動物模型63-68
• 3. 醋酸格拉默對免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)機(jī)制68-73
• 3.1 醋酸格拉默對T細(xì)胞亞群的免疫調(diào)節(jié)作用68-69
• 3.2 醋酸格拉默對B細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用69-70
• 3.3 醋酸格拉默對巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用70-71
• 3.4 醋酸格拉默對自然殺傷細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用71-72
• 3.5 醋酸格拉默對CNS星形膠質(zhì)細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用72
• 3.6 醋酸格拉默對神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用72-73
• 4. 醋酸格拉默對免疫球蛋白的免疫調(diào)節(jié)作用73-74
• 5. 醋酸格拉默對神經(jīng)再生和髓鞘修復(fù)的作用74-77
• 6.小結(jié)77-79
• 綜述參考文獻(xiàn)79-91
• 致謝91-92

【共引文獻(xiàn)】

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10 胡U，

本文編號：384142