本文關(guān)鍵詞：體液miRNA作為生物標(biāo)志物在疾病診斷治療中的應(yīng)用及miR-203通過靶向SRC影響肺癌細(xì)胞增殖、遷移和凋亡，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：miRNA是一種廣泛存在于真核生物體內(nèi)的短小RNA分子,長度約16-22nt�？梢酝ㄟ^與mRNA序列互補(bǔ)阻遏蛋白翻譯,從而調(diào)控蛋白表達(dá)進(jìn)而影響生物學(xué)功能。自1993年被發(fā)現(xiàn)以來,miRNA越來越受到科研工作者的廣泛關(guān)注,目前已經(jīng)證實(shí),miRNA在細(xì)胞分化、增殖、凋亡,生物體發(fā)育及多種生物學(xué)過程中都起著非常重要的調(diào)控作用。而不僅是生理狀態(tài),miRNA在多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起到的作用也在近年來進(jìn)行了廣泛而深入的探索。而隨著血清中穩(wěn)定存在的miRNA的發(fā)現(xiàn),血清miRNA表達(dá)譜作為生物標(biāo)志物用于多種腫瘤及重大疾病的診斷也成了該領(lǐng)域中近年來的一大熱點(diǎn)。其實(shí),不僅是血清,人的其他體液如尿液、汗液、唾液等中同樣存在穩(wěn)定表達(dá)的miRNA。因此這些miRNA在某些特定條件下也有望成為很好的診斷標(biāo)志物。本文旨在以干擾素治療乙肝療效預(yù)測及腎損傷的診斷為例研究體液miRNA作為分子標(biāo)志物在臨床診斷上的應(yīng)用以及以miR-203靶向于SRC蛋白為例研究miRNA在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。乙型肝炎是一種分布極廣的傳染性疾病,因此慢性乙肝的治療也因其受眾廣、難治愈、易復(fù)發(fā)而成為醫(yī)學(xué)界的一個(gè)難題。除傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的中草藥外,目前明確有效成分的臨床應(yīng)用乙肝治療藥物主要有核苷類似物和干擾素兩種。前者是針對病毒復(fù)制而設(shè)計(jì)的藥物,短期抗病毒效果好,副作用小,但長期使用容易產(chǎn)生耐藥,易復(fù)發(fā)；后者作為一種經(jīng)典的抗病毒藥物,通過調(diào)節(jié)自身免疫達(dá)到抗病毒的目的,其療效穩(wěn)定,不易復(fù)發(fā),不會產(chǎn)生耐藥,但其療效與個(gè)體差異關(guān)系較大,僅有40%左右的人群使用該藥物有效,且其副作用較大。因此,對于干擾素來說,用藥前的療效預(yù)測非常重要。此部分研究旨在研究血清miRNA作為生物標(biāo)志物用于干擾素a治療乙肝病人的療效預(yù)測,以期為臨床用藥提供參考。課題組在前人的基礎(chǔ)上,嘗試尋找一種用于預(yù)測干擾素治療乙肝療效的特征性miRNA表達(dá)譜。我們收集了108例干擾素治療前的乙肝病人血清,并通過跟蹤其治療后的血液生化指標(biāo)將其分為有效組和無效組。運(yùn)用microRNA array高通量篩選出兩組差異表達(dá)的miRNA,再以實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)驗(yàn)證芯片結(jié)果。我們發(fā)現(xiàn),miR-99a作為血清的分子標(biāo)志物,對干擾素療效的預(yù)測的ROC曲線下面積可達(dá)0.74,有望作為臨床干擾素治療乙肝的分子標(biāo)志物。除血清外,人的其他體液中也有穩(wěn)定存在的miRNA,但以這些體液作為生物標(biāo)志物的研究尚少。而尿液作為一種更方便收集的體液,收集過程對患者無損傷、且與腎臟關(guān)系密切,因此是腎病診斷的理想媒介。腎病的發(fā)生往往伴隨著腎損傷,輕度腎損傷由于癥狀較輕往往不易察覺,從而成為重大腎病的隱患。因此腎損傷的早期診斷很重要。目前臨床腎損傷的診斷采用的主要是以肌酐、尿量為指標(biāo)的診斷標(biāo)準(zhǔn),但這兩者均受多種因素影響,缺乏特異性,并且難以制定一個(gè)統(tǒng)一的客觀標(biāo)準(zhǔn)。因此尋找一個(gè)敏感特異的腎臟早期損傷的生物標(biāo)志物對腎損傷進(jìn)行早期預(yù)測,以便于及時(shí)采取有效手段進(jìn)行治療顯得極為必要。此部分旨在篩選出理想的尿液miRNA作為腎損傷標(biāo)志物,以期為臨床腎損傷的診斷提供參考。我們通過缺血再灌注以及鏈脲霉素(streptozotocin, STZ)分別對小鼠進(jìn)行造模,以模擬急性和慢性腎損傷,并用組織切片病理學(xué)對造模結(jié)果進(jìn)行了鑒定。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR手段,我們篩選了組織特異性miRNA,我們發(fā)現(xiàn)miR-10a和miR-30d能夠作為腎損傷的標(biāo)志物,并且比臨床所用的血尿氮更為靈敏。接下來我們檢測了局段節(jié)灶性腎小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis, FSGS)的病人尿液與正常人尿液,發(fā)現(xiàn)miR-10a和miR-30d在病人尿液中有明顯升高,進(jìn)一步驗(yàn)證miR-10a和miR-30d的確可以作為良好的腎損傷標(biāo)志物。miRNA除了可以作為穩(wěn)定的生物標(biāo)志物,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中也起了非常重要的作用。肺癌是世界范圍腫瘤相關(guān)性死亡的主要病因,其死亡率居惡性腫瘤死亡率之首。目前的治療方法主要是以手術(shù)治療、放射治療和藥物治療為主。有效的抗腫瘤藥物的開發(fā)一直是科學(xué)界的焦點(diǎn)。Src蛋白是一種非受體酪氨酸蛋白激酶,由原癌基因c-Src編碼,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中具有重要作用,體外實(shí)驗(yàn)表明抑制Src對肺癌患者有效。我們通過生物信息學(xué)方法,尋找到miR-203可以靶向于Src蛋白的3'非翻譯區(qū)(Untranslated region, UTR)的四個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。同時(shí)我們收集了6對肺癌和正常肺組織標(biāo)本,檢測了Src蛋白、mRNA和miR-203的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在肺癌組織中,Src蛋白顯著上升、mRNA沒有顯著變化,而miR-203明顯降低。并且Src蛋白的表達(dá)量與miR-203呈現(xiàn)皮爾森負(fù)相關(guān)。接著我們用熒光素酶(Luciferase)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了miR-203對SRC的直接靶向作用,并用細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了miR-203可以抑制肺癌細(xì)胞的遷移和增殖,并促進(jìn)其凋亡。
【關(guān)鍵詞】：miRNA 乙型肝炎 干擾素α 腎損傷 肺癌 SRC
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.62;R734.2
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 第一章 緒論12-45
• 1.1 microRNA概述12-15
• 1.1.1 microRNA的體內(nèi)生成12-13
• 1.1.2 植物microRNA與動(dòng)物microRNA13
• 1.1.3 microRNA的生理特性13
• 1.1.4 血清microRNA作為生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)13-14
• 1.1.5 miRNA與腫瘤14-15
• 1.1.6 microRNA作為抗癌藥物的潛力15
• 1.2 乙型肝炎概述15-21
• 1.2.1 乙肝的流行病學(xué)15-16
• 1.2.2 乙肝的傳播16-17
• 1.2.3 乙肝帶來的問題17
• 1.2.4 乙型肝炎病毒基因組17
• 1.2.5 乙型肝炎病毒的血清存在形式17-18
• 1.2.6 乙型肝炎病毒的抗逆性18-19
• 1.2.7 乙型肝炎病毒的生活史19
• 1.2.8 乙型肝炎病毒的變異19-20
• 1.2.9 乙型肝炎的藥物治療20-21
• 1.3 腎損傷概述21-30
• 1.3.1 腎臟的解剖結(jié)構(gòu)21
• 1.3.2 腎單位21-22
• 1.3.3 腎臟功能檢驗(yàn)指標(biāo)22-23
• 1.3.4 腎損傷23-26
• 1.3.5 腎損傷的標(biāo)志物26-28
• 1.3.6 尿液miRNA作為生物標(biāo)志物預(yù)測腎損傷的優(yōu)勢28-30
• 1.4 肺癌概述30-41
• 1.4.1 肺癌的病因30-31
• 1.4.2. 肺癌的治療31-33
• 1.4.3 幾種重要的抗腫瘤藥物靶點(diǎn)33-38
• 1.4.4. Src蛋白38-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 第二章 血清miRNA用于干擾素α治療乙肝病人的療效預(yù)測45-68
• 2.1 引言45-46
• 2.2 儀器與試劑46-47
• 2.2.1 耗材46
• 2.2.2 主要試劑46-47
• 2.2.3 主要儀器47
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法47-50
• 2.3.1 樣本的收集47
• 2.3.2 病人的生化指標(biāo)的采集及樣本的分組47-48
• 2.3.3 低密度芯片檢測48
• 2.3.4 樣品初篩和復(fù)篩48-50
• 2.3.5 數(shù)據(jù)分析50
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-54
• 2.4.1 低密度芯片結(jié)果50
• 2.4.2 水背景排除50-51
• 2.4.3 樣本初篩51-52
• 2.4.4 樣本復(fù)篩52-53
• 2.4.5 病人血生化指標(biāo)53
• 2.4.6 ROC曲線與散點(diǎn)圖53-54
• 2.5 結(jié)果討論54-57
• 附：低密度芯片結(jié)果57-67
• 參考文獻(xiàn)67-68
• 第三章 尿液miR-10a和miR-30d作為新型靈敏、特異的生物標(biāo)志物用于腎損傷的早期診斷68-84
• 3.1 引言68-69
• 3.2 材料和方法69-70
• 3.2.1. 實(shí)驗(yàn)材料69-70
• 3.2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物69
• 3.2.1.2 實(shí)驗(yàn)器材69-70
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法70-73
• 3.3.1 小鼠缺血再灌注實(shí)驗(yàn)(renal ischemia-reperfusion injury,IRI)70
• 3.3.2 鏈脲霉素(Streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)的糖尿病腎損傷模型70
• 3.3.3 組織切片及組織學(xué)染色70-71
• 3.3.4 尿液RNA的提取71-72
• 3.3.5 正常人與FSGS病人尿液與血液樣本的收集72-73
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果73-80
• 3.4.1 miR-10a和miR-30d作為腎臟特異性miRNA73-75
• 3.4.2 腎損傷后小鼠尿液中腎臟特異性miRNA含量升高75-79
• 3.4.3 局段節(jié)灶性腎小球硬化(FSGS)病人的尿液中miR-10a和miR-30d的含量升高79-80
• 3.5 實(shí)驗(yàn)討論80-83
• 參考文獻(xiàn)83-84
• 第四章 miR-203通過靶向SRC抑制肺癌細(xì)胞的增殖和遷移,并促進(jìn)凋亡84-111
• 4.1 引言84
• 4.2 材料和方法84-95
• 4.2.1. 實(shí)驗(yàn)材料84-86
• 4.2.2. 實(shí)驗(yàn)方法86-95
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果95-107
• 4.3.1 在肺癌組織中,SRC的蛋白上調(diào),mRNA不變95-97
• 4.3.2 miR-203可以靶向于SRC的3'UTR區(qū)97-99
• 4.3.3 肺癌組織中miR-203與SRC的含量呈負(fù)相關(guān)99-100
• 4.3.4 SRC是miR-203的直接靶點(diǎn)100-104
• 4.3.5 miR-203通過靶向SRC影響A549細(xì)胞的增殖、遷移和凋亡104-107
• 4.4 實(shí)驗(yàn)討論107-110
• 參考文獻(xiàn)110-111
• Publications111-113
• 致謝113-115

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張潔;王鴻程;;Src及其抑制劑對非小細(xì)胞肺癌作用的研究進(jìn)展[J];國際內(nèi)科學(xué)雜志;2009年01期

  本文關(guān)鍵詞：體液miRNA作為生物標(biāo)志物在疾病診斷治療中的應(yīng)用及miR-203通過靶向SRC影響肺癌細(xì)胞增殖、遷移和凋亡，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：380752