膿毒癥是一種由感染因素引發(fā)的全身炎癥性疾病,是臨床上燒創(chuàng)傷以及感染性疾病常見的并發(fā)癥。膿毒癥進一步發(fā)展可導致膿毒癥休克和心腎肝肺等多器官功能障礙綜合癥,最終導致死亡。流行病學調(diào)查顯示,全球每年有膿毒癥患者超過1900萬,超過中風、肺癌、乳腺癌、心臟疾病等常見病的發(fā)病率。膿毒癥不但發(fā)病率高,其死亡率也高居不下。調(diào)查顯示,膿毒癥的死亡率超過20%,而膿毒癥休克的死亡率更是高達45%。然而膿毒癥發(fā)病的機制仍未完全闡明,導致膿毒癥的治療未取得根本性突破,因此,對膿毒癥發(fā)病機制進行研究顯得十分迫切。膿毒癥的本質(zhì)是機體失控性炎癥反應,炎性細胞被過度激活而造成致炎因子與抗炎因子的平衡失調(diào),從而引起的失控性炎癥反應。巨噬細胞的損傷與激活是機體發(fā)生失控性炎癥反應的核心環(huán)節(jié),其分泌的大量炎癥因子和其他炎性介質(zhì),可引起炎癥的級聯(lián)放大效應,進而導致失控性炎癥反應和多臟器功能障礙綜合征的發(fā)生。巨噬細胞內(nèi)NF-κB信號通路的持續(xù)性激活,是損傷后巨噬細胞分泌過量炎癥因子和炎性介質(zhì)的重要分子基礎。正常情況下,NF-κB位于胞漿,與其天然性的抑制因子IκB結(jié)合在一起而不能進入核內(nèi)。當細胞受到內(nèi)源性或外源性危險因素刺激時...

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻回顧
    1 膿毒癥的研究進展
    2 單核細胞趨化誘導蛋白1(MCP-1 induced protein,MCPIP1)
    3 微小RNA(microRNA,miRNA)
    4 總結(jié)
第一部分 膿毒癥模型的建立
    1 材料與儀器
        1.1 試驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.0 動物模型制作
        2.1 骨髓來源巨噬細胞(BMDM)分離提取
        2.2 細胞模型制作
        2.3 組織標本切片及HE染色
        2.4 血清中IL-1β、IL-6、TNFα含量檢測
        2.5 血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量的檢測
        2.6 qRT-PCR檢測相關炎癥因子mRNA表達水平
        2.7 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 小鼠膿毒癥模型的建立
        3.2 體外細胞模型的建立
    4 討論
第二部分 MCPIP1 對膿毒癥炎癥反應及臟器損傷的影響
    1 材料與儀器
        1.1 試驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 動物模型制作
        2.2 小鼠生存分析
        2.3 細胞模型制作
        2.4 質(zhì)粒和小干擾RNA(siRNA)
        2.5 細胞轉(zhuǎn)染
        2.6 肝臟標本切片及HE染色
        2.7 血清中IL-1β、TNFα含量檢測
        2.8 血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量的檢測
        2.9 qRT-PCR檢測相關炎癥因子mRNA表達水平
        2.10 Western Blot檢測細胞中MCPIP1及NF-κB信號通路
        2.11 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 MCPIP1 在巨噬細胞中的表達
        3.2 MCPIP1 對巨噬細胞中炎癥反應的影響
        3.3 MCPIP1 對巨噬細胞中NF-κB p65 核移位的影響
        3.4 MCPIP1 對膿毒癥小鼠炎癥反應及臟器損傷的影響
    4 討論
第三部分 MCPIP1 通過調(diào)節(jié)SIRT1 表達參與炎癥調(diào)控
    1 材料與儀器
        1.1 試驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 細胞模型制作
        2.2 質(zhì)粒和小干擾RNA(siRNA)
        2.3 細胞轉(zhuǎn)染
        2.4 qRT-PCR檢測相關炎癥因子mRNA表達水平
        2.5 Western Blot檢測細胞中MCPIP1及NF-κB信號通路
        2.6 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 MCPIP1 對巨噬細胞中NF-κB p65 乙�；挠绊�
        3.2 MCPIP1對SIRT1 表達的影響
        3.3 過表達SIRT1 緩解MCPIP1 介導的炎癥反應
    4 討論
第四部分 MICRORNA-9 參與了MCPIP1 介導的SIRT1 調(diào)控
    1 材料與儀器
        1.1 試驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 細胞模型制作
        2.2 質(zhì)粒和小干擾RNA(siRNA)
        2.3 細胞轉(zhuǎn)染
        2.4 qRT-PCR檢測相關炎癥因子mRNA表達水平及miRNA表達
        2.5 免疫共沉淀試驗
        2.6 Western Blot檢測細胞中MCPIP1及SIRT1 表達
        2.7 熒光素酶報告基因試驗
        2.8 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 SIRT1與MCPIP1 之間的相互結(jié)合
        3.2 miR-9 通過調(diào)控SIRT1 進而調(diào)控炎癥反應
        3.3 MCPIP1 對巨噬細胞中miR-9 的影響
        3.4 miR-9 參與了MCPIP1 介導的SIRT1 調(diào)控
    4 討論
第五部分 MICRORNA-155 參與了MCPIP1 介導的SIRT1 調(diào)控
    1 材料與儀器
        1.1 試驗材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 細胞模型制作
        2.2 質(zhì)粒和小干擾RNA(siRNA)
        2.3 細胞轉(zhuǎn)染
        2.4 qRT-PCR檢測相關炎癥因子mRNA表達水平及miRNA表達
        2.5 Western Blot檢測細胞中MCPIP1及SIRT1 表達
        2.6 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 MCPIP1 對巨噬細胞中miR-155 的影響
        3.2 miR-155 可調(diào)控SIRT1 的表達
        3.3 過表達miR-155 緩解MCPIP1 介導的炎癥反應
    4 討論
小結(jié)
參考文獻
個人簡歷和研究成果
致謝



本文編號：3806220