膿毒癥是一種由感染因素引發(fā)的全身炎癥性疾病,是臨床上燒創(chuàng)傷以及感染性疾病常見(jiàn)的并發(fā)癥。膿毒癥進(jìn)一步發(fā)展可導(dǎo)致膿毒癥休克和心腎肝肺等多器官功能障礙綜合癥,最終導(dǎo)致死亡。流行病學(xué)調(diào)查顯示,全球每年有膿毒癥患者超過(guò)1900萬(wàn),超過(guò)中風(fēng)、肺癌、乳腺癌、心臟疾病等常見(jiàn)病的發(fā)病率。膿毒癥不但發(fā)病率高,其死亡率也高居不下。調(diào)查顯示,膿毒癥的死亡率超過(guò)20%,而膿毒癥休克的死亡率更是高達(dá)45%。然而膿毒癥發(fā)病的機(jī)制仍未完全闡明,導(dǎo)致膿毒癥的治療未取得根本性突破,因此,對(duì)膿毒癥發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究顯得十分迫切。膿毒癥的本質(zhì)是機(jī)體失控性炎癥反應(yīng),炎性細(xì)胞被過(guò)度激活而造成致炎因子與抗炎因子的平衡失調(diào),從而引起的失控性炎癥反應(yīng)。巨噬細(xì)胞的損傷與激活是機(jī)體發(fā)生失控性炎癥反應(yīng)的核心環(huán)節(jié),其分泌的大量炎癥因子和其他炎性介質(zhì),可引起炎癥的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng),進(jìn)而導(dǎo)致失控性炎癥反應(yīng)和多臟器功能障礙綜合征的發(fā)生。巨噬細(xì)胞內(nèi)NF-κB信號(hào)通路的持續(xù)性激活,是損傷后巨噬細(xì)胞分泌過(guò)量炎癥因子和炎性介質(zhì)的重要分子基礎(chǔ)。正常情況下,NF-κB位于胞漿,與其天然性的抑制因子IκB結(jié)合在一起而不能進(jìn)入核內(nèi)。當(dāng)細(xì)胞受到內(nèi)源性或外源性危險(xiǎn)因素刺激時(shí)...

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
縮略語(yǔ)表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)回顧
    1 膿毒癥的研究進(jìn)展
    2 單核細(xì)胞趨化誘導(dǎo)蛋白1(MCP-1 induced protein,MCPIP1)
    3 微小RNA(microRNA,miRNA)
    4 總結(jié)
第一部分 膿毒癥模型的建立
    1 材料與儀器
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.0 動(dòng)物模型制作
        2.1 骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞(BMDM)分離提取
        2.2 細(xì)胞模型制作
        2.3 組織標(biāo)本切片及HE染色
        2.4 血清中IL-1β、IL-6、TNFα含量檢測(cè)
        2.5 血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量的檢測(cè)
        2.6 qRT-PCR檢測(cè)相關(guān)炎癥因子mRNA表達(dá)水平
        2.7 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 小鼠膿毒癥模型的建立
        3.2 體外細(xì)胞模型的建立
    4 討論
第二部分 MCPIP1 對(duì)膿毒癥炎癥反應(yīng)及臟器損傷的影響
    1 材料與儀器
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 動(dòng)物模型制作
        2.2 小鼠生存分析
        2.3 細(xì)胞模型制作
        2.4 質(zhì)粒和小干擾RNA(siRNA)
        2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.6 肝臟標(biāo)本切片及HE染色
        2.7 血清中IL-1β、TNFα含量檢測(cè)
        2.8 血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量的檢測(cè)
        2.9 qRT-PCR檢測(cè)相關(guān)炎癥因子mRNA表達(dá)水平
        2.10 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞中MCPIP1及NF-κB信號(hào)通路
        2.11 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 MCPIP1 在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2 MCPIP1 對(duì)巨噬細(xì)胞中炎癥反應(yīng)的影響
        3.3 MCPIP1 對(duì)巨噬細(xì)胞中NF-κB p65 核移位的影響
        3.4 MCPIP1 對(duì)膿毒癥小鼠炎癥反應(yīng)及臟器損傷的影響
    4 討論
第三部分 MCPIP1 通過(guò)調(diào)節(jié)SIRT1 表達(dá)參與炎癥調(diào)控
    1 材料與儀器
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 細(xì)胞模型制作
        2.2 質(zhì)粒和小干擾RNA(siRNA)
        2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.4 qRT-PCR檢測(cè)相關(guān)炎癥因子mRNA表達(dá)水平
        2.5 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞中MCPIP1及NF-κB信號(hào)通路
        2.6 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 MCPIP1 對(duì)巨噬細(xì)胞中NF-κB p65 乙�；挠绊�
        3.2 MCPIP1對(duì)SIRT1 表達(dá)的影響
        3.3 過(guò)表達(dá)SIRT1 緩解MCPIP1 介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)
    4 討論
第四部分 MICRORNA-9 參與了MCPIP1 介導(dǎo)的SIRT1 調(diào)控
    1 材料與儀器
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 細(xì)胞模型制作
        2.2 質(zhì)粒和小干擾RNA(siRNA)
        2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.4 qRT-PCR檢測(cè)相關(guān)炎癥因子mRNA表達(dá)水平及miRNA表達(dá)
        2.5 免疫共沉淀試驗(yàn)
        2.6 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞中MCPIP1及SIRT1 表達(dá)
        2.7 熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)
        2.8 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 SIRT1與MCPIP1 之間的相互結(jié)合
        3.2 miR-9 通過(guò)調(diào)控SIRT1 進(jìn)而調(diào)控炎癥反應(yīng)
        3.3 MCPIP1 對(duì)巨噬細(xì)胞中miR-9 的影響
        3.4 miR-9 參與了MCPIP1 介導(dǎo)的SIRT1 調(diào)控
    4 討論
第五部分 MICRORNA-155 參與了MCPIP1 介導(dǎo)的SIRT1 調(diào)控
    1 材料與儀器
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 細(xì)胞模型制作
        2.2 質(zhì)粒和小干擾RNA(siRNA)
        2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.4 qRT-PCR檢測(cè)相關(guān)炎癥因子mRNA表達(dá)水平及miRNA表達(dá)
        2.5 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞中MCPIP1及SIRT1 表達(dá)
        2.6 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 MCPIP1 對(duì)巨噬細(xì)胞中miR-155 的影響
        3.2 miR-155 可調(diào)控SIRT1 的表達(dá)
        3.3 過(guò)表達(dá)miR-155 緩解MCPIP1 介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)
    4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果
致謝



本文編號(hào)：3806220